Петля микробиологическая: конструкция и применение
Микробиологическая петля — простая, обычно изготавливается из металлической проволоки и фиксируется на держателе для петли. Такие петли используется в лабораторных исследований для созданий мазков микроорганизмов.
Внешний вид
Проволока формирует круглую петлю диаметром до 5 мм и фиксируется на держателе для петли. Чаще всего петля изготавливается из вольфрама или нихрома (сплав никеля и хрома), очень редко — из платины. Нихромовые микробиологические петли находят широкое применение благодаря низкой себестоимости. Платиновые — самые дорогие, поэтому встречаются редко. Вольфрамовые петли — благодаря устойчивости к воздействию высоких температур, а также высоких и низких рН, они имеют более долгий срок службы, чем нихромовые
В последнее время микробиологические петли начали изготавливать из пластика. Они гораздо дешевле аналогов из металла и обычно недолговечны. В отличие от петель из нихрома и вольфрама, пластиковые нельзя стерилизовать в пламени — их стерилизуют химически.
Применение
Микробиологические петли используются для создания на предметном стекле мазков для исследования микроорганизмов под микроскопом. Перед нанесением мазка петля стерилизуется. Если микроорганизмы находятся в жидком агаре, то даже слабого прикосновения петлей к поверхности агара достаточно, чтобы собрать достаточное для мазка количество материала. Жидкость прилипает благодаря эффекту поверхностного натяжения.
Мазки с твердых сред делаются механически — на петлю берется небольшое количество агара, на стекле в капле воды делается мазок. После нанесения мазка петля стерилизуется в пламени. Если петля пластиковая, ее можно очистить спиртом. Или другим антисептиком. Стерилизация петли после каждого использования обязательна, иначе существует риск попадания в исследуемый материал посторонних микроорганизмов.
Источник
Лабораторная работа № 2
Приготовление нативных препаратов микроорганизмов для микроскопирования.
Теоретические пояснения:
Для работы с микроорганизмами используют бактериологические петли, иглы, шпатели. Бактериологические петли изготовляют из проволоки, которую закрепляют в специальных металлических держателях. Бактериологическая петля прокаливается, пробки и край пробирки с культурой микроорганизмов фламбируются. Если в работе используются суспензии микроорганизмов или культуры, выращенные на жидких средах, они берутся предварительно простерилизованной пипеткой, у которой широкий конец закрыт ватой. Изучают микроорганизмы, изготавливая препараты из них. Для этого применяют чистые, хорошо обезжиренные стекла, на поверхности которых капля воды свободно растекается. С этой целью промытые и высушенные стекла натирают хозяйственным мылом, увлажняют дыханием и протирают салфеткой. При микроскопировании можно использовать культуры, выращенные в жидких средах. Культуры, выращенные на твердых средах, можно суспендировать (развести) с помощью стерильной петли или иглы в капле стерильной жидкой среды или какого-нибудь раствора до слабого помутнения. В зависимости от цели исследования готовят прижизненные или фиксированные препараты.
Цель работы: изучить методы приготовления прижизненных микропрепаратов (раздавленная капля, висячая капля).
Материалы и оборудование: Предметные и покровные стёкла, предметные стёкла с углублениями, микробиологические петли, пипетки, культура микроорганизмов в пробирке, микроскопы, иммерсионное масло.
Ход работы:
1. Приготовить нативный микропрепарат методом раздавленной капли.
— приготовить предметное и покровное стекла и зажечь спиртовку;
— взять пробирку со стерильной водой в левую руку и поместить её наклонно между большим и указательным пальцем на расстоянии 3–5 см от пламени;
— в правую руку взять петлю, простерилизовать ее в пламени спиртовки, включая часть петледержателя, которая при работе помещается в пробирку;
— мизинцем правой руки зажать пробку пробирки, повернуть, вынуть ее и держать, не касаясь окружающих предметов;
— обжечь края пробирки и взять петлей каплю воды, поместить её на предметное стекло;
— обжечь края пробирки и пробку, закрыть пробирку и поставить в штатив;
— открыть пробирку с культурой так же, как в п. 4;
— стерильную петлю ввести в пробирку с культурой, охладить, прикоснувшись к внутренней поверхности пробирки, а затем взять ею небольшое количество микроорганизмов;
— петлей с микроорганизмами сделать штрих на стекле внутри капли воды. После этого петлю прожечь и охладить, прикоснувшись к стеклу;
— 
растереть штрих петлей круговыми движениями, чтобы получилась слегка опалесцирущая суспензия и накрыть покровным стеклом. Чтобы не образовывалось пузырьков воздуха, покровное стекло подводят ребром к краю капли и резко опускают его.
2. Приготовить микропрепарат методом висячей капли.
— 
Для приготовления препарата необходимы стекло с лункой, покровное стекло и вазелин. Края лунки покрывают тонким слоем вазелина. На покровное стекло наносят каплю культуры (Рис. 2).
— Накрывают покровное стекло стеклом с лункой так, чтобы капля оказалась в центре.
— Склеившиеся стёкла быстро переворачивают покровным стеклом вверх. Капля находится в герметической камере и сохраняется долгое время.
3. Исследовать препараты под микроскопом.
4. Зарисовать и сделать вывод о подвижности микроорганизмов.
Вопросы для самоконтроля:
1. Что такое «асептика»? Почему нужно ее соблюдать при работе с микроорганизмами?
2. Какая посуда используется для выращивания микроорганизмов?
3. Как правильно держать пробирку с микроорганизмами и петлю?
4. Какие свойства микроорганизмов исследуются на прижизненных и
5. Как приготовить препарат «раздавленная капля»?
Источник
ЗАНЯТИЕ 2. ПРАВИЛА РАБОТЫ С МИКРООРГАНИЗМАМИ. ПРИГОТОВЛЕНИЕ ПРИЖИЗНЕННЫХ И ПОСТОЯННЫХ ПРЕПАРАТОВ
Основное требование при работе с микроорганизмами — соблюдение асептики, т. е. таких условий, при которых в пробирку с изучаемой культурой не смогли бы попасть другие микроорганизмы (например, из воздуха, с предметов, используемых в процессе выполнения работы).
Для работы с микроорганизмами используют специальные бактериологические петли, иглы, шпатели. Бактериологические петли изготовляют из проволоки, которую закрепляют в специальных металлических держателях или впаивают в стеклянные палочки. Толщина игл и петель не должна превышать 0,5 мм (рис. 10).
Рис. 10. Бактериологическая петля (1) и шпатель Дригальского (2)
Выращивают микроорганизмы в стеклянной посуде: пробирках, колбах или чашках Петри. В пробирках микроорганизмы культивируют как в жидких, так и на плотных средах. Пробирки со средами и культурами при работе следует устанавливать на штативах.
Бактериологическая петля прокаливается, пробки и край пробирки фламбируются. Если в работе используются суспензии микроорганизмов или культуры, выращенные на жидких средах, они берутся предварительно простерилизованной пипеткой, у которой широкий конец закрыт ватой. Такие пипетки стерилизуются и хранятся завернутыми в бумагу (каждая отдельно).
Изучают микроорганизмы, изготавливая препараты из них. Для этого применяют чистые, хорошо обезжиренные стекла, на поверхности которых капля воды свободно растекается. С этой целью промытые и высушенные стекла натирают хозяйственным мылом, увлажняют дыханием и протирают салфеткой.
При микроскопировании можно использовать культуры, выращенные в жидких средах. Культуры, выращенные на твердых средах, можно суспендировать (развести) с помощью стерильной петли или иглы в капле стерильной жидкой среды или какого-нибудь раствора, но не водопроводной воды, до слабого помутнения.
Для прижизненных наблюдений наиболее часто готовят препараты «раздавленная капля» или «висячая капля». Работу проводят в следующем порядке:
1) приготовить предметное и покровное стекла;
2) зажечь спиртовку;
3) взять пробирку со стерильной водой в левую руку и поместить её наклонно между большим и указательным пальцем на расстоянии 3-5 см от пламени;
4) в правую руку взять петлю простерилизовать ее в пламени спиртовки, включая часть петледержателя, которая при работе помещается в пробирку;
5) мизинцем правой руки зажать пробку пробирки, повернуть, вынуть ее и держать, не касаясь окружающих предметов;
6) обжечь края пробирки и взять петлей каплю воды, поместить её на предметное стекло;
7) обжечь края пробирки и пробку. Закрыть пробирку и поставить в штатив;
8) прожечь петлю;
9) открыть пробирку с культурой так же, как в п.5;
10) стерильную петлю ввести в пробирку с культурой, охладить, прикоснувшись к внутренней поверхности пробирки, а затем взять ею небольшое количество микроорганизмов;
11) петлей с микроорганизмами сделать штрих на стекле внутри капли воды. После этого петлю прожечь и охладить, прикоснувшись к стеклу;
12) растереть штрих петлей круговыми движениями, чтобы получилась слегка опалесцирущая суспензия;
13) петлю прожечь;
14) полученную суспензию микроорганизмов накрыть покровным стеклом и микроскопировать.
Чтобы избежать в поле зрения пузырьков воздуха, нужно, расположив покровное стекло под углом 40-45°, прикоснуться им к краю капли и, когда она распределится вдоль грани, осторожно накрыть каплю.
Препарат можно подкрасить метиленовым синим (в концентрации 0,010,001), капнув непосредственно в препарат или поместив каплю красителя у края покровного отекла, с противоположное стороны полоску фильтровальной бумаги.
При изготовлении препарата нужно учитывать размер капли, который должен быть равен приблизительно объему двух рисовых зерен.
Висячая капля. На середину необезжиренного покровного стекла наносят очень маленькую, с четкими краями каплю суспензии микроорганизмов, как описано выше. Каплю материала покрывают предметным стеклом с лункой, края которой предварительно смазывают вазелином. Предметное стекло с прилипшим к нему покровным стеклом переворачивают. Капля оказывается висячей в герметически закрытой влажной камере, из которой жидкость испаряется очень медленно и поэтому препарат долгое время остается пригодным для наблюдения. Висячую каплю микроскопируют с плоским зеркалом и суженной диафрагмой.
Фиксированный (постоянный) препарат готовят следующим образом:
1) приготовить суспензию микроорганизмов методом, аналогичным вышеописанному;
2) с помощью стерильной бактериологической петли распределить суспензию тонким слоем на поверхности предметного стекле в виде пятна диаметром около 1 см;
3) высушить мазок на воздухе;
4) фиксировать мазок в пламени спиртовки. Для этого препарат три раза проводят в средней части пламени спиртовки. При этом микроорганизмы погибают, хорошо прикрепляются к стеклу, становятся более восприимчивыми к красителю. Можно вместо термической проводить химическую фиксацию, предусматривающую применение средств, вызывающих коагуляцию белков. В этом случае она осуществляется с помощью определенных химических веществ (например, метиловый, этиловый спирты, формалин) или различных смесей (например, уксусная кислота, абсолютный этиловый спирт и хлороформ — фиксирующая смесь Карнуа).
Для микроскопического исследования приготовленные мазки, высушенные и зафиксированные, подвергают окраске. Окраска бывает простая и сложная. Простая окраска заключается в нанесении на мазок какой-либо одной краски на определенное время. Чаще всего для простой окраски применяют водно-спиртовый 1:10 фуксин, метиленовую синьку и сафранин.
При простой окраске микробные тела воспринимают цвет применяемой краски так же интенсивно, как и ядра клеток; в то же время цитоплазма и весь фон мазка (если это не мазок из чистой культуры) окрашиваются в тот же цвет, но несколько бледнее. Обычно фуксином 1:10 красят 10-30 секунд, а метиленовой синькой — 2-10 минут. Фуксин и генцианвиолет окрашивает мазки более интенсивно. А при окраске метиленовой синькой получаются нежные, более изящные препараты.
Восприятие окраски зависит не только от свойств красок, но и от свойств подвергаемых окраске микробов.
Для окраски мазков пользуются растворами красок или красящей бумагой. Простота приготовления, удобство применения, а также возможность хранения красящих бумаг в течение неограниченно долгого времени явились основанием для широкого их использования при различных способах окраски.
Источник
Бактериологическая петля
Владельцы патента RU 2520327:
Изобретение относится к биотехнологии. Предложена бактериологическая петля для культивирования микроорганизмов. Бактериологическая петля содержит рукоятку с одной стороны и съемный рабочий элемент с другой стороны. Рабочий элемент представляет собой металлический стержень с ушком на его конце. При этом рабочий элемент возле муфты снабжен металлическими ограничителями, расположенными перпендикулярно рабочему элементу. На концах металлических ограничителей закреплены металлические направляющие. Направляющие расположены вдоль металлического стержня с ушком на расстоянии от него, равном наружному радиусу поперечного сечения пробирки. 3 ил., 1 табл.
Изобретение относится к микробиологии, а именно к лабораторным инструментам для культивирования микроорганизмов. Наиболее эффективно применение бактериологической петли при посеве микробных культур уколом в пробирки с твердыми питательными средами столбиком с целью накопления биомассы.
Известна бактериологическая петля, представляющая собой рукоятку с одной стороны и съемный рабочий элемент в виде проволоки из легкомоделирующегося металла. Ее свободный конец загибают в виде ушка и используют при бактериологической работе для переноса микробиологического материала (Практикум по ветеринарной микробиологии и иммунологии / Т.С.Костенко, Е.И.Скаршевская, С.С.Гительсон. — М.: Агропромиздат, 1989. — С.23. — [1]).
Известна также бактериологическая петля, содержащая рукоятку с одной стороны и рабочий элемент в виде металлического стержня с ушком на его конце. Ее используют при пересеве микробных культур из одной пробирки в другую. Посев уколом делают с использованием бактериологической петли, которую вводят в столбик плотной питательной среды (Практикум по ветеринарной микробиологии и иммунологии / В.Н.Кисленко. — М.: КолосС, 2005. — С.29-31. — [2]).
Недостатком известных бактериологических петель является то, что манипуляция по переносу микробных культур из одной пробирки в другую требует концентрации усилий лабораторных работников и их сосредоточенности для введения рабочего элемента бактериологической петли строго по центру столбика питательной среды. Выполняя такую точную работу лабораторному работнику необходимо держать кисть в напряженном состоянии. Сосредоточенность и выполнение действий по нацеливанию в заданную точку рабочего элемента бактериологической петли влечет дополнительные затраты времени на проведение манипуляции.
При этом не исключено смещение петли в сторону от центра поперечного сечения пробирки и соответственно от центра твердой питательной среды. Зона непреднамеренного заноса культуры возбудителя в незапланированные участки твердой питательной среды возрастает. В последующем это может исказить характерные особенности роста колоний различных микроорганизмов, что снижает возможность визуальной оценки результатов роста микроорганизмов на питательной среде. При проведении экспериментальных исследований различные пробы ставятся в неодинаковые условия.
Кроме того, сосредоточенность исследователей необходима при определении глубины введения микробных культур в питательную среду, а именно как общепринято на 2/3 высоты столбика среды. Лабораторному работнику часто тяжело соразмерять усилия при введении бактериологической петли вглубь твердой питательной среды. Такая манипуляция при ее повторяемости не может быть стандартно выполненной на всех пробах, что также может исказить результаты исследований. Как правило, такие результаты не учитывают и работу выполняют повторно. Последнее зачастую невозможно продублировать в условиях эксперимента, например, при анализе микробной обсемененности раневого отделяемого в определенные сроки после оперативного вмешательства, для своевременной и оправданной послеоперационной антибиотикотерапии.
Задачей предлагаемого решения является посев микробных культур в центре твердой питательной среды и на одинаковую глубину во всех исследуемых пробах.
Поставленная задача достигается благодаря тому, что известная бактериологическая петля, содержащая рукоятку с одной стороны и съемный рабочий элемент с другой стороны в виде металлического стержня с ушком на его конце, закрепленный в рукоятке муфтой, согласно изобретению рабочий элемент возле муфты дополнительно снабжен металлическими ограничителями, расположенными перпендикулярно рабочему элементу, при этом на концах металлических ограничителей закреплены металлические направляющие, которые расположены вдоль металлического стержня с ушком и на расстоянии от него, равном наружному радиусу поперечного сечения пробирки.
Техническая сущность предлагаемой бактериологической петли представлена на чертеже, где на:
фиг.1 показана предлагаемая бактериологическая петля (общий вид);
фиг.2 — разрез А-А на фиг.1;
фиг.3 — бактериологическая петля в рабочем положении.
Бактериологическая петля содержит рукоятку 1, съемный рабочий элемент в виде металлического стержня 2 с ушком 3 на его конце, закрепленный в рукоятке 1 муфтой 4. При этом рабочий элемент снабжен ограничителями 5 с направляющими 6, которые при работе располагаются снаружи пробирки 7.
Бактериологическая петля работает следующим образом. В левую руку берут пробирку с микробной культурой и пробирку для пересева с твердой питательной средой. Среди твердых питательных сред часто используют мясопептонный агар (МПА) и мясопептонную желатину (МПЖ).
Обе пробирки удерживают в одной руке в наклоненном состоянии, при этом их пробкам следует находиться на одной линии и они должны быть направлены в сторону пламени горелки. Горелку необходимо расположить между руками лабораторного работника. Пробирку с исходным материалом располагают ниже пробирки с твердой питательной средой, в которую планируется пересев микробной культуры. Между пробирками должен быть зазор для возможности прохождения между ними направляющих 6 при введении металлического стержня 2 с ушком 3 бактериологической петли как в пробирку с микробной культурой, так и в пробирку с твердой питательной средой.
Бактериологическую петлю держат за рукоятку 1 правой рукой (как пишущее перо). Перед взятием микробной культуры рабочий элемент бактериологической петли тщательно прожигают на пламени горелки, то есть его фламбируют. При этом нет необходимости избегать контакта направляющих 6 с открытым пламенем горелки, так как они металлические. Не выпуская из рук пробирки, осторожно возле пламени их открывают свободными пальцами (мизинцем и безымянным) правой руки. При этом их пробки прижимают мизинцем правой руки к ладони, и после извлечения их из пробирок держат в руке.
Для забора микробной культуры профламбированный металлический стержень 2 с ушком 3 бактериологической петли вводят в просвет пробирки, не доходя до микробиологического материала, где этот рабочий элемент охлаждают. Далее металлический стержень 2 с ушком 3 направляют вглубь пробирки, при этом направляющие 6 нацеливают так, чтобы они охватывали пробирку по ее окружности. За счет скоса на концах направляющих 6 облегчается их наползание на пробирку снаружи по ее окружности. Продвижение рабочего элемента бактериологической петли внутрь пробирки продолжают на необходимую глубину и если это необходимо, то до упора в ограничители 5.
Затем бактериологической петлей соприкасаются с культурой и захватывают каплю микробиологического материала. Культура задерживается не только на поверхности металлического стержня 2, но и в его ушке 3. После этого культуру выносят из пробирки так, чтобы она не прошла над пламенем горелки.
При пересеве из одной пробирки в другую металлический стержень 2 с ушком 3 бактериологической петли направляют в пробирку с твердой питательной средой. После введения ушка 3 в просвет пробирки направление рабочему элементу бактериологической петли придают указательным пальцем, расположенным поверх рукоятки 1 возле муфты 4. При этом направляющие 6 располагают так, чтобы они размещались по окружности пробирки. Скосы на концах направляющих 6 облегчают размещение последних на пробирке снаружи по ее окружности. Продвижение металлического стержня 2 с ушком 3 бактериологической петли внутрь пробирки продолжают до упора в ограничители 5. Это обеспечивает введение микробных культур вглубь твердой питательной среды на заданную глубину — на 2/3 высоты ее столбика.
На пути прохождения рабочего элемента бактериологической петли вглубь твердой питательной среды остаются микробы, они могут расти по уколу. То есть проводят посев микробной культуры уколом в пробирку с твердой питательной средой столбиком. Затем бактериологическую петлю выводят за пределы пробирки. Обе пробирки закрывают пробками и ставят в штатив.
После использования бактериологической петли ее стерилизуют как в собранном виде, так и в разобранном. В последнем случае откручивают муфту 4 и освобождают от рукоятки 1 рабочий элемент в виде металлического стержня 2 с ушком 3, а также с ограничителями 5 и направляющими 6. Разборная конструкция бактериологической петли предусмотрена также для замены изношенных ее элементов. Так, например, фламбирование рабочего элемента бактериологической петли может привести к износу (пережиганию) металлического стержня 2, ушка 3 или направляющих 6.
В многоразовых испытаниях предлагаемой бактериологической петли выявлено не только беспрепятственное ее прохождение вглубь твердой питательной среды, но и проникновение в эту питательную среду ушка 3 с микробными культурами на стандартно заданную глубину — 2/3 высоты ее столбика, чему способствуют ограничители 5.
Устройство бактериологической петли позволяет исследователю одинаково уверенно работать как правой, так и левой рукой.
Применение предлагаемой бактериологической петли позволяет:
— повысить управляемость и удобство лабораторного инструмента;
— соблюдать технику посева микробных культур строго в центре твердой питательной среды и на одинаковую глубину — 2/3 высоты ее столбика;
— облегчить пересев микробных культур;
— снизить время на проведение манипуляции;
— снизить напряженность режима работы исследователя;
— соблюдать технику культивирования микроорганизмов;
— повысить читаемость и точность результатов лабораторных исследований;
— определить своевременную и оправданную послеоперационную антибиотикотерапию;
— исключить необходимость проведения повторных исследований.
Это значительно снижает трудоемкость пересева микробных культур и повышает эффективность лабораторных исследований (см. таблицу).
| Таблица | |||
| Бактериологическая петля | Количество посевов | Сомнительные результаты | Повторные исследования |
| Предлагаемая | 35 | — | — |
| Известная | 35 | 8 | 8 |
Как видно из таблицы, использование предлагаемой бактериологической петли является более эффективным при пересеве микробных культур в твердые питательные среды по сравнению с известной,и позволяет исключить проведение повторных исследований.
Предлагаемая бактериологическая петля была успешно применена при проведении исследований микроорганизмов на базе кафедры эпизоотологии и терапии ФГБОУ ВПО Орел ГАУ и кафедры клинической ветеринарии ФГБОУ ВПО «Российский университет дружбы народов».
При использовании предлагаемой бактериологической петли отмечено снижение трудоемкости при работе с этим лабораторным инструментом. При этом посев микробных культур производился строго в центре твердой питательной среды, а также на одинаковую глубину во всех пробах.
Бактериологическая петля, содержащая рукоятку с одной стороны и съемный рабочий элемент с другой стороны в виде металлического стержня с ушком на его конце, закрепленный в рукоятке муфтой, отличающаяся тем, что рабочий элемент возле муфты дополнительно снабжен металлическими ограничителями, расположенными перпендикулярно рабочему элементу, при этом на концах металлических ограничителей закреплены металлические направляющие, которые расположены вдоль металлического стержня с ушком и на расстоянии от него, равном наружному радиусу поперечного сечения пробирки.
Источник