Выращивание грибов. Советы начинающим

Мудрость, рожденная в простом

Copyright 1999, all rights reserved.

Данная статья впервые опубликована в издании Mushroom: the Journal of Wild Mushrooming . Стоимость подписки $16 за четыре ежеквартальных выпуска от Mushroom the Journal, 861 Harold St., Moscow ID 83843.

Если перспектива выращивания собственных грибов окрылила вас, то первые же попытки, скорее всего, повергли в уныние в связи со сложностью и потенциальной дороговизной таких вещей, как «стерильные технологии,» «чистые помещения», «ламинарные боксы» и «агаровые питательные среды». А может быть вы, будучи склонны к исследованиям, проделали немалую работу, героически пытаясь отделить чистые культуры мицелия, и все лишь для того, чтобы увидеть, как нежный белый мицелий расцветает всеми цветами радуги, благодаря пушистым спорам плесени, или превращается в лоснящиеся лужицы жидкости в связи с бактериальным заражением. Мужайтесь, вы не одиноки! Являясь председателем Комитета по культивированию Микологического общества Сан-Франциско (MSSF), я общаюсь с многими людьми, посвятившими себя культивированию грибов, и они подтверждают, что указанные выше сложности — это две основные преграды, тормозящие прогресс в грибоводстве. Признавая необходимость в оказании помощи по преодолению указанных проблем, Комитет по культивированию MSSF периодически организовывал лекции и семинары, посвященные вопросам выращивания грибов. Я весьма признательна преподавателям, принимавшим участие в тех семинарах за методики, которые я предлагаю в этой статье.

Цели и задачи

Наиболее разумная цель, конечно, начать с одного плодового тела гриба и вырастить из него целый букет грибов. Грибы могут быть размножены двумя способами — спорами (это аналог семян у растений) или путем воспроизведения ткани, извлеченной из плодового тела (аналогично вегетативному размножению растений через прививание). Для начала мы будем использовать второй способ, который проще и дает начинающему грибоводу лучшие шансы на успех. Задачи у нас вот какие:

• Начать со стерильного фрагмента грибной ткани и перенести его на питательную среду (на самом деле, этот процесс будет последовательно проводиться в три этапа на различных средах, как вы увидите дальше)
• Из основной культуры создать несколько ее образцов
• Избежать заражения культуры
• И, наконец, создать среду и условия, в которых грибной организм начнет плодоношение.

Ваша культура должна пройти через три отдельные фазы (См. Рис. 1):

1. Стерильная культура на агаровой среде
2. Стерильная культура на зерне, известная также как «зерновой мицелий»
3. Плодоношение на пастеризованном субстрате

Пусть слово «стерильность», наряду с новыми терминами, не смущает и не останавливает вас. Да, потенциальные источники заражения существуют повсеместно в окружающей среде: в наших домах, даже в чистых комнатах и лабораториях. Цель состоит в том, чтобы предотвратить их попадание в разводимую культуру и исключить «борьбу» за питательную среду, оставив исключительной право ее использования нашим грибным культурам. Обладая определенной аккуратностью и после небольшой тренировки с использованием простых методик, этот процесс может быть успешно освоен каждым. В общем, дышите глубже и читайте о деталях процесса дальше, шаг за шагом.

Рис. 1 — Это действительно просто! (Рисунки выполнены T. Beauséjour)

Комментарий к тексту на рисунке (по часовой стрелке): Sterile Tissue Culture — стерильная ткань гриба, Inоculation in Grain — инокуляция зерна, Incubation of Spawn — рост зернового мицелия, Transfer to Final Substrate — перенос на основной субстрат, Mushrooms Fruiting in Substrate — плодоношение грибов на субстрате.

Шаг I: Подготовка агара и стерильной культуры

Подготовка агара: Первым шагом является подготовка агаровой питательной среды. Произведенный из морских водорослей агар, в совокупности с добавочными ингредиентами, часто используется для первоначального разведения и дальнейшей изоляции культур. Микробиологи приспосабливают агаровую среду для селекционного выращивания грибов путем добавления различных питательных веществ, таких как минералы, антибиотиков и т.д. Агаровая среда обладает и тем ценным качеством, что микроорганизмы, вызывающие заражение, без труда обнаруживаются на поверхности среды и таким образом, они могут быть уничтожены на самых ранних стадиях процесса роста. Для разведения грибного мицелия могут быть использованы несколько типов агаровых сред. Наиболее часто используют картофельный агар (Potato Dextrose Agar, PDA) и мальтодекстриновый агар (Malt Dextrose Agar, MDA). Готовые смеси промышленного изготовления доступны в самых различных магазинах. Правда, они могут оказаться несколько дороже, чем при самостоятельном приготовлении агара, но если позволяют средства и не хочется тратить драгоценное время, то готовые смеси — это хороший выбор. Для тех, кто привык все делать своими руками, ниже приводятся два способа приготовления картофельного агара (PDA). Первый способ, уже не раз мною опробованный, основан на методике, описанной в издании The Mushroom Cultivator («Грибовод»), авторы Paul Stamets и J.S. Chilton. Второй способ с успехом используется и пропагандируется грибоводнической группой MSSF. Попробуйте первый или второй способ, или же оцените оба. Вскоре вы сможете определиться, какой из способов лучше подходит для вас, а может быть, на основе полученного опыта вы придумаете свой способ, который со временем несомненно преобразуется во что-то еще. Процедура приготовления выглядит так же, как описание рецепта из поваренной книги.

Материалы, необходимые для обоих методов

• Хлопчатобумажный бинт (продается в аптеках)
• Алюминиевая фольга
• Пробирки с накручиваемыми колпачками для автоклавной обработки — можно найти у снабженцев по медицинскому оборудованию или попросить в лаборатории. Лаборатории иногда избавляются от больших количеств таких пробирок. Поищите, поспрашивайте..
• Небольшая воронка для заполнения пробирок
• Мерные чашки
• Скороварка
• Две литровые бутылки или колбы с узким горлышком.

Первым делом, несколько слов о скороварке. Скороварка — это, возможно, наиболее дорогостоящая вещь из всего инвентаря грибовода. Если она у вас уже имеется и ее размеры позволяют разместить внутри бутылки или банки, то можно считать, что вы полностью укомплектованы. Если нет, то новая скороварка обойдется вам приблизительно в $75 — $250, в зависимости от размера и места покупки. Скороварки продаются во многих хозяйственных магазинах, торгующих кухонной утварью. Если у вас сложности с бюджетом, можно пойти по экономному пути и поискать скороварку на распродажах или на барахолке. Можно найти практически новую скороварку за $15 — 35. Постарайтесь найти скороварку с манометром, а не просто с клапаном-колпачком и без указателя давления. В любом случае, какую бы скороварку вы ни выбрали, очень важно соблюдать все правила безопасной эксплуатации, определенные производителем.

Картофельный агар. Метод №1

(Для приготовления приблизительно 1 литра среды)

300 грамм картофеля

20 грамм агара (поищите в организациях по снабжению медицинских лабораторий, магазинах здорового питания или на азиатских продовольственных рынках)

10 грамм декстрозы или другого сахара

2 грамма пивных дрожжей (необязательно)

Сварите картофель в 1 литре воды в течение 1 часа. Откиньте картофель, сохранив отвар. Разомните картофель, добавьте масла, соли и перца и съешьте. Сметана, лучок и другие приправы — по вкусу :). После того, как мы заморили червячка картофельным пюре, возьмем картофельный отвар, агар, сахар, дрожжи (необязательно) и хорошенько все смешаем в кастрюле. Для этой цели хорошо подходит веничек для взбивания, но взбивать не следует, нужно просто перемешивать. Наполните полученной смесью бутылки или колбы. Заполняйте емкости только на половину или три четверти объема. Закройте горлышки бутылок или колб хлопчатобумажными тампонами и оберните алюминиевой фольгой. Залейте в скороварку воду, чтобы она закрывала дно слоем в 1.5 см., поместите внутрь скороварки сетку, на которую поставьте бутылки или колбы. Поставьте на скороварку крышку и защелкните ее должным образом. Включите плиту и подождите, пока из скороварки не пойдет пар. После вентиляции в течение нескольких минут, закройте клапан (в соответствии с инструкцией к конкретной скороварке). Кипятите бутылки под давлением 1 атм. (121 градус по Цельсию) в течение 15 минут. Не позволяйте температуре подниматься выше 121 градуса даже на самое короткое время, иначе произойдет карамелизация среды и она придет в негодность. Через 15 минут выключите газ и дайте скороварке медленно остыть (в течение примерно 45 минут). Тем временем, снимите с пробирок колпачки, установите пробирки на штативе или в чистых консервных банках и поставьте штатив или консервные банки на чистую рабочую поверхность в месте, свободном от пыли. Когда бутылки с питательной средой остынут и их можно будет брать с помощью чистого полотенца или варежек для микроволновой печи, извлеките их из скороварки и перенесите к пробиркам. Круговыми движениями слегка перемешайте питательную среду, а затем удалите фольгу и хлопчатобумажные тампоны. Используя воронку, заполните пробирки примерно на одну треть. Наверните свободно колпачки на пробирки, поместите банки с пробирками в скороварку (убрав из скороварки лишнюю воду, если нужно), дождитесь увеличения давления до 1 атм. (121 градус по Цельсию) и оставьте вариться на 30 минут. После этого снова дайте скороварке постепенно остыть, чтобы давление снизилось до нормального. Извлеките пробирки и закрутите колпачки плотнее. Закрепите пробирки каким-нибудь способом в наклоненном положении, чтобы поверхность агаровой среды приобрела «скошенный» вид, предоставляя максимальную поверхность для дальнейшего роста мицелия. (Пробирки, приготовленные таким образом, часто называют «косым агаром»). По мере того, как среда охлаждается, она будет застывать в виде желе и, в конечном счете, пробирки можно будет вернуть в вертикальное положение; агаровая среда при этом останется на месте. Если пробирки не предполагается использовать сразу, их можно поместить в зип-локи и хранить в холодильнике в течение недель или месяцев. В дальнейшем, перед использованием пробирок из холодильника, необходимо убедиться в отсутствии заражения среды плесенью или бактериями.

Картофельный агар. Метод №2

(получается около литра питательной среды)

10 унций или 284 грамм картофеля

3/4 унции или 21.3 грамм агара

1/4 унции или 8 грамм декстрозы — можно заменить столовым сахаром

Шаг 1: Смешивание ингредиентов

1. Вымойте картофель, но не срезайте кожуру. Порежьте на небольшие кусочки.
2. Сварите картофель до хорошей готовности в полулитре воды.
3. Процедите и сохраните отвар. Картофель можно выбросить или использовать в пищу.
4. Смешайте декстрозу/сахар, картофельный отвар и агар в металлической или термостойкой стеклянной чашке. Добавьте воды до литра.

Шаг 2: Растворение агара

1. Поместите агаровую смесь в скороварку. Накройте чашку алюминиевой фольгой.
2. Дождитесь, пока давление в скороварке поднимется до 1 атм. Варка в течение 20 минут приведет к полному растворению агара.
3. Оставьте скороварку для медленного остывания.

Шаг 3: Заливка агара в пробирки

1. С помощью варежек для микроволновки и мерного стакана заполните каждую пробирку примерно на треть объема. Вместо штатива для пробирок могут быть использованы консервные банке. Оставшийся агар можно сохранить в бутылке, закрытой хлопчатобумажным или синтепоновым тампоном, а стерилизовать позже, вместе с пробирками. Если пробирки достать не удалось, вместо них можно использовать небольшие бутылочки.
2. Если пробирки закрываются пластиковыми колпачками, то они должны закрываться неплотно, чтобы давление в процессе стерилизации выравнивалось. Хлопчатобумажные или синтепоновые тампоны помогают избежать этой проблемы, но при этом потребуется накрыть пробирки алюминиевой фольгой, чтобы капли конденсата с крышки остывающей скороварки не попадали на пробки.

Шаг 4: Стерилизация агара

1. Поместите пробирки/бутылки, содержащие агар, в скороварку и стерилизуйте под давлением 1 атм. в течение 25 минут. В эти 25 минут не входит время, необходимое для достижения нужного давления в скороварке.
2. Дайте скороварке медленно остыть. Быстрый сброс давления может привести к интенсивному вскипанию агара в пробирках, выплёскиванию его через тампоны и колпачки пробки и к возможному заражению.

Шаг 5: Наклонное расположение пробирок

1. Протрите 10% раствором хлорсодержащего отбеливателя стол, на котором будут расположены в наклоненном положении пробирки. Работу следует производить в помещении без сквозняков.
2. Надев кухонные варежки, расположите горячие пробирки на столе в наклоненном положении, положив пробирки одним краем на подходящий предмет. Предварительно стоит поэкспериментировать с деревянными брусочками или стопкой журналов для того, чтобы подобрать нужный угол наклона.
3. После желатинизации агара закройте плотнее колпачки. Готовые пробирки или бутылки следует хранить в прохладном, свободном от пыли месте. Покрытие из алюминиевой фольги предотвратит возможность заражения пробирок до их использования.

Методики стерильной работы с грибной культурой

После того, как агаровые пробирки остыли, самое время заняться разведением грибной культуры.

Скальпель или очень острый нож с тонким лезвием

Спиртовка или пропановая горелка с баллончиком, зажигалка или спички

Металлические консервные банки или штативы для пробирок с косым агаром и одна банка и штатив для хранения готовых пробирок

Держатель для скальпеля или ножа (см. ниже примеры для самостоятельного изготовления)

Микропористый бинт (такой, как в аптечках первой помощи, продается в аптеках) или обычный бинт (более дешевый вариант)

Распылитель с раствором из 10% хлорсодержащего отбеливателя и 90% воды (необязательно)

Свежее, чистое плодовое тело гриба или грибов (для начинающих микологов очень рекомендуется использовать вешенку)

Выберите место в доме, офисе или лаборатории, свободное от пыли и возможных источников плесени или грибков. Работы производите на устойчивом столе или стойке, предварительно вымыв поверхность теплой мыльной водой и вытерев насухо (для дополнительной защиты можно также обработать поверхность аэрозолем из 10% раствора отбеливателя и вытереть затем насухо чистой тряпкой или бумажной салфеткой.) Закройте все окна, чтобы свести к минимуму циркуляцию воздуха (в идеале, постарайтесь перенести работы по культивированию на утренние часы, пока воздух чист от пыли, поднимаемой в воздух активными домочадцами). Разложите все материалы в готовом для работы виде и в пределах удобной досягаемости. Поместите агаровые пробирки в металлическую консервную банку (банки) или штативы. Зажгите свет или включите светильник. Тщательно простерилизуйте лезвие скальпеля в пламени и положите скальпель на подставку. Подставку можно выгнуть из проволоки (например из старой вешалки), жестяной банки или другого подручного материала. Целью изготовления такой подставки является обеспечение устойчивого положения инструмента, чтобы его лезвие, пока оно не используется, находилось возле пламени во избежание заражения. Для начала возьмите свежий, чистый гриб. Несмотря на то, что внешняя поверхность грибного тела может содержать бактерии и споры плесени, внутренняя ткань обычно свободна от организмов, вызывающих заражение, если только гриб не перенасыщен водой. Оторвите или отломите часть гриба (не отрезайте с помощью ножа, потому что лезвие занесет инфекцию с внешних поверхностей). Положите гриб на стол чистой поверхностью вверх (эта поверхность не должна касаться стола). Цель тут состоит в том, чтобы получить чистую, открытую поверхность, от которой может быть отделен очень небольшой кусочек грибной ткани, а сам кусочек оставался бы, насколько это возможно, нетронутым, пока не будет помещен в пробирку. Сейчас вам нужно расположить рабочие материалы так, чтобы пробирка, пока вы помещаете в нее кусочек грибной ткани, как можно меньшее время оставалась открытой. Для того, чтобы вероятность заражения была минимальна, недопустимо класть пробирку или пробку на стол. Этот момент представляет некоторую сложность. Будет полезно сперва попрактиковаться с пустой пробиркой перед тем, как использовать «боевую» пробирку с агаром и грибную ткань. Дальнейшие указания подразумевают, что вы — правша. Если нет, то все придется делать в зеркальном порядке. Держите левую руку так, чтобы большой палец смотрел вниз, а остальные пальцы были расположены горизонтально. Поместите пробирку между средним и безымянным пальцами левой руки так, чтобы безымянный палец был сверху, средний — снизу пробирки, а пробка смотрела в направлении от руки. Пробирку следует держать только в горизонтальном положении, чтобы частицы из воздуха не попадали в горлышко пробирки. Скошенная поверхность агара, на которую вы будете помещать грибную ткань, должна смотреть вверх. Осторожно снимите пробку с пробирки и поместите ее между безымянным пальцем и мизинцем так, чтобы мизинец был сверху, а безымянный палец — снизу. (См. Рис. 2).

Рис.. 2 — Немного мудрёно, но практика помогает

Используя свободные указательный и большой палец левой руки, крепко возьмите кусочек гриба с чистой поверхностью, смотрящей вверх или вбок. Правой рукой уверенно возьмите скальпель, держа его за ручку наподобие карандаша. Кончиком лезвия отрежьте от чистой грибной ткани очень маленький кусочек треугольной формы. Осторожно отделите грибную ткань и быстро поместите внутрь пробирки на край горлышка. Если нужно, стряхните кусочек гриба со скальпеля постукивающими движениями. Положите скальпель на место и быстро закройте пробирку пробкой. Теперь несколько раз постукайте нижней частью пробирки о тыльную сторону ладони для того, чтобы переместить грибную ткань на агаровую поверхность (См. Рис. 3). Поставьте пробирку в другую консервную банку, предназначенную для хранения инокулированных пробирок.

Рис. 3 — Перемещаем с помощью постукивания

Комментарий к тексту на рисунке: Move to Here by Tapping the Tube against the Heel of the Hand — переместите в это место путем постукивания пробиркой по тыльной стороне ладони, Insert Here — поместите сюда

Есть! Теперь у нас имеются очень хорошие шансы на то, что полученная культура гриба является чистой. Проделайте то же самое с оставшимися пробирками и грибным материалом. Изготовление нескольких пробирок с каждого образца гриба важно по той причине, что даже при самой аккуратной работе иногда случаются заражения. После проведения инокуляции очередной пробирки простерилизуйте заново скальпель или лезвие ножа на пламени и оторвите свежий кусочек гриба, чтобы открыть другой участок чистой ткани грибного тела. После того, как работа с пробирками завершена, закрутите плотнее колпачки и обверните на каждой пробирке место, на котором колпачок граничит со стеклом, при помощи микропористой ленты. Микропористая лента позволит культуре «дышать», но предотвратит попадание инородных организмов через горлышко пробирки. Пометьте пробирки перманентным маркером или небольшими наклейками , указав дату и информацию о содержимом. Наконец, поместите инокулированные пробирки в темное и прохладное место (наилучшая температура 13 — 21 градусов по Цельсию). Через некоторое время (от нескольких дней до недели) грибная ткань станет пушистой, что связано с началом роста мицелия. Через несколько недель мицелий полностью покроет поверхность агара. Если показалась плесень (ее легко распознать по спорам зеленого, черного или другого цвета) или бактериальное заражение (обычно окрашенная лоснящаяся субстанция ), то эта культура подлежит немедленному уничтожению, а пробирки и пробки следует вымыть в горячей мыльной воде. По возможности, пробирки с зараженной культурой нужно освобождать в отдельном месте, подальше от здоровых культур. Например, выйдите на улицу и выбросите содержимое прямо в мусорный бак. Для освобождения пробирки от питательной среды можно использовать китайскую палочку для еды; среду можно извлечь сразу целым кусочком или по частям.

Полукомбинезон Kinetic DryGaiter Camo, L

Леска Spinning line, 0,18 мм/4,0 кг, Серебряный, 150 м

Источник