Как приготовить краситель по романовскому

Окраска по Романовскому

Азур-эозин по Романовскому

Окрашивание различных элементов клеток в разные цвета и оттенки смесью основных (азур II) и кислых (водорастворимый желтый эозин) красок.

Потенциальный риск применения набора – класс 2б.

При работе с набором необходимо соблюдать «Правила устройства, техники безопасности, производственной санитарии, противоэпидемического режима и личной гигиены при работе в лабораториях (отделениях, отделах) санитарно-эпидемиологических учреждений системы Министерства здравоохранения СССР» (Москва, 1981 г.).

При работе с биологическими жидкостями следует надевать одноразовые резиновые или пластиковые перчатки, так как исследуемый материал является потенциально инфицированным, способным длительное время сохранять или передавать ВИЧ, вирус гепатита или любой другой возбудитель вирусной инфекции.

Все использованные материалы дезинфицировать в соответствии с требованиями МУ-287-113.

Посуда и аппаратура.

•цилиндры мерные вместимостью 25 -1000 мл;

•калий фосфорнокислый однозамещенный;

•натрий фосфорнокислый двузамещенный;

•Штатив для мазков.

•Кювета со стеклянным мостиком для окраски.

Приготовление забуференной воды:

Взвесить на аналитических весах с точностью ±0,01 г 9,50 г натрия фосфорнокислого двузамещенного

безводного или 22,70 г натрия фосфорнокислого двузамещенного 12-водного; навеску перенести в мерный цилиндр вместимостью 1000 мл, добавить 900 мл дистиллированной воды, перемешать до растворения, довести до 1000 мл дистиллированной водой и тщате льно перемешать (раствор 1).

Взвесить на аналитических весах с точностью ±0,01 г 9,07 г калия фосфорнокислого однозамещенного; навеску внести в мерный цилиндр вместимостью 1000 мл, добавить 900 мл дистиллированной воды, перемешать до растворения, довестидо 1000 мл дистиллированной водой и тщательно перемешать (раствор 2).

Внести в мерный цилиндр вместимостью 1000 мл 63 мл раствора 1 и 37 мл раствора 2, довести до 1000 мл дистиллированной водой и определить рН полученной

забуференнойводы на рН-метре; рН должен находиться в диапазоне 6,8 — 7,2. Полученную забуференную воду можно хранить при комнатной температуре (+18/+25°С).

В продаже имеется готовый раствор краски Романовского, а также сухая краска Романовского (Гимзы), из которой приготовляют раствор следующим образом: 3,8 г сухой краски Романовского растворяют в 250 мл чи­стого метилового или этилового спирта (последний хуже).

Раствор оставляют на 3—5 сут, часто взбалтывая для лучшего растворения краски.

Затем прибавляют 250 мл чистого глицерина и вновь оставляют на 3—5 сут, периодически взбалтывая. Приготовленная таким образом краска хорошо сохраняется длительное время в темных бутылях в шкафу, где нет ни кислот, ни щелочей.

Вновь полученный или приготовленный раствор красителя Романовского перед употреблением оттитровывают, т. е. окрашивают несколько фиксированных мазков крови в течение 25—40 мин различно разведенной краской (1—2 капли краски на 1 мл дистиллированной воды). По хорошо окрашенному препарату устанавливают нужное количество капель краски на 1 мл воды и время окрашивания.

(методика окраски): Мазки необходимо зафиксировать фиксатором-красителем по Май-Грюнвальду или типа Лейшмана в течение 2-3 минут. Непосредственно

перед окраской приготовить рабочий раствор: смешать краситель с забуференной водой в соотношении 1:20 — 1:45 и профильтровать.

Полученный рабочий раствор красителя можно использовать в течение 6 ч асов.

Зафиксированные мазки крови поместить в рабочий раствор красителя, по истечении 20-45 мин препараты промыть проточной водой 1-2 сек, высушить на воздухе и микроскопировать.

Окраска форменных элементов крови должна быть следующей:

эритроциты — розовые, розовые с серым или бежевым оттенком, бежево-коричневые;

тромбоциты — розово-фиолетовые или фиолетовые;

ядра лимфоцитов, моноцитов и нейтрофилов — фиолетовые;

цитоплазма лимфоцитов — голубая, серо-голубая или сине-голубая;

цитоплазма моноцитов- серо-голубая;

цитоплазма нейтрофилов — бледно-розовая или розово-серая;

зернистость нейтрофилов — фиолетовая или красно-фиолетовая;

зернистость эозинофилов- оранжево-красная, розово-красная или розово-фиолетовая;

зернистость базофилов- фиолетовая

Окраска по Романовскому в модификации Филипсона.

Применение красителей-фиксаторов, которыми мазки крови в первый период одновременно фиксируются и частично окрашиваются, а во второй период, после разбавления красителей -фиксаторов дистиллированной водой, докрашиваются окончательно.

Посуда и аппаратура — см. «Окраска по Романовскому».

1.Одну часть готовой краски Романовского и 3 части этилового спирта (ректификата) тщательно смешивают. Краска сразу же пригодна к употреблению, но можно готовить ее и заранее.

2. Дистиллированная вода нейтральной реакции.

Приготовленный краситель наливают на нефиксированный мазок, покрывая его полностью и

через 1 — 1мин30 сек, не сливая красителя, прибавляют к нему но каплям примерно столько же дистиллированной воды, следя за тем, чтобы вода при соединении с красителем не сливалась с мазка. Через 20—30 мин краситель смывают водой и мазок высушивают.

Этим способом клетки окрашиваются хорошо, но иногда, по-видимому, от недоброкачественности спирта в эритроцитах обнаруживаются мелкие пузырьки, мешающие определению степени насыщения их гемоглобином.

Способы быстрой окраски мазков краской Романовского по Алексееву.

Одновременная фиксация и окраска мазков с применением для ускорения окрашивания по первому способу подогрева дистиллированной воды и по второму способу — подогрева разведенной краски Романовского.

Посуда и аппаратура.

1. Глазные пипетки.

3. Темная бутыль с притертой пробкой емкостью 1 л. Остальное — см. «Окраска по Романовскому».

1. Разведенная краска Романовского (1,5 капли краски на 1 мл дистиллированной воды).

2. Краситель Лейшмана для второго метода (растворяют 4 г сухой краски в 1 л метилового спирта и хранят в темной посуде).

3. Чистый метиловый спирт.

4. Нейтральная дистиллированная вода.

5. Фильтровальная бумага.

1. На сухой нефиксированный мазок наносят глазной пипеткой 6—10 капель краски Романовского, распределяя ее той же пипеткой равномерным слоем. Через 30 с другой пипеткой добавляют к краске по каплям удвоенное количество подогретой до 50—60° дистиллированной воды. Покачиванием препарата перемешивают краску с водой и оставляют на 3 мин в покое, затем смывают ее дистиллированной водой и высушивают мазок фильтровальной бумагой. При этом методе окраски частично гемолизируются эритроциты, однако клетки белой крови не изменяются.

При втором способе, приводимом ниже, результаты получаются лучшей окраска препаратов мало отличается от обычной окраски по Романовскому.

2. На сукой нефиксированный мазок наливают равномерным слоем 10—12 ка­пель краски Лейшмана. Через 20—30 с, не сливая краску, добавляют к ней нагретый до 50—60° раствор краски Романовского в количестве, способном удержаться на препарате. Через 3 мин, не сливая краску, смывают ее сильной струей дистиллированной воды и высушивают препарат фильтровальной бумагой.

Источник

Азур-эозин по Романовскому для анализа (чистый)

Раствор Азур-эозина по Романовскому используется для того, чтобы окрашивать форменные элементы крови.

Рабочие красящие соединения желательно применять с рН=6,4-6,8. Азур-эозин следует развести в дистиллированной, свежей воде в 10-20 раз для изготовления 0,76% рабочей красящей смеси. До того, как прибавить краситель из расчета 0,05-0,1/100мл рабочего раствора, буфер необходимо вводить в воду.

Рабочий раствор красителя следует наносить на высушенные и фиксированные мазки крови, затем выдержать от 30 минут до 1-ого часа. Препараты промываются дистиллированной водой, высушиваются, затем их можно микроскопировать. Нельзя допускать длительный контакт препарата с водой. Для промывания препарата можно применять водопроводную воду, но эритроциты поменяют цвет на серо-синий. Это происходит из-за щелочной реакции.

В состав красителя входит метанол. Он огнеопасен, токсичен и вреден при вдыхании, приеме внутрь, контакте со слизистыми оболочками или кожей. Работать с красителем следует лишь в вентилируемых помещениях, используя при этом средства защиты (перчатки). Если вы приняли внутрь, то вероятно он вызовет рвоту. При таком случае необходимо выпить 2 литра воды, затем обязательно обратиться к врачу. При попадании красителя в глаза или на кожу, нужно незамедлительно смыть.

Краситель нужно предохранять от негативного воздействия щелочей и кислот. Хранить в помещении, где температура составляет 0-25оС.

МЕРЫ ПРЕДОСТОРОЖНОСТИ

В состав красителя входит метанол — яд, класс опасности III, особенности действия на организм А, токсичен при ингаляции, контакте с кожными покровами и особенно при проглатывании. Огнеопасен. Концентрация паров метанола в производственных помещениях при использовании и испытании красителя не должна превышать ПДК = 5 мг/м 3. Работа с красителем должна проводиться в вытяжном шкафу при хорошо действующей вентиляции, в перчатках, вдали от открытого огня.

Меры предосторожности — соблюдение “Правил устройства, техники безопасности, производственной санитарии, противоэпидемического режима и личной гигиены при работе в лабораториях (отделениях, отделах) санитарно-эпидемиологических учреждений системы Министерства здравоохранения СССР”, Москва, 1981 г.

При работе с красителем следует надевать одноразовые резиновые или пластиковые перчатки, так как образцы крови человека следует рассматривать как потенциально инфицированные, способные длительное время сохранять и передавать ВИЧ, вирус гепатита В или любой другой возбудитель вирусной инфекции.

Химическая посуда и оборудование, используемые при работе с красителем, должны быть соответствующим образом маркированы и храниться отдельно. Запрещаются хранение и прием пищи и курение в помещениях, предназначенных для работы с красителем.

ОБОРУДОВАНИЕ, МАТЕРИАЛЫ, РЕАКТИВЫ

— цилиндры мерные вместимостью 25 — 1000 мл

ПРИГОТОВЛЕНИЕ БУФЕРНОГО РАСТВОРА.

Для приготовления буферного раствора с рН 6,8 – 7,2 рекомендуется буферную смесь (производства НПФ «Абрис+») развести в 3 л дистиллированной воды. Полученный раствор использовать для разведения красителя и промывки стекол.

ПРИГОТОВЛЕНИЕ МАЗКОВ КРОВИ

Мазки крови сделать на предметных стеклах с помощью более узкого предметного шлифованного стекла следующим образом.

Взять предметное стекло за длинные края и прикоснуться его поверхностью, отступив на 0,5 — 1 см от узкого края, к капле крови (но не к коже). Предметное стекло следует держать на столе или в левой руке за края. Правой рукой приставить шлифованное стекло узким краем к предметному стеклу с кровью слева от капли под углом 45° и продвинуть его вправо до соприкосновения с каплей крови. Выждать до тех пор, пока кровь расплывется по всему ребру шлифованного стекла, и затем легким быстрым движением провести его справа налево до тех пор, пока не будет исчерпана вся капля. Капля крови должна быть небольшой и соразмерна так, чтобы весь мазок помещался на предметном стекле, не доходя 1 — 1,5 см до его края. Сильно нажимать на стекло нельзя, так как многие клетки крови могут оказаться поврежденными. Хорошо сделанный мазок тонок, имеет желтоватый цвет и оканчивается “метелочкой”.

После приготовления мазки следует быстро высушить на воздухе до исчезновения влажного блеска; при медленном высыхании может изменяться морфология клеток.

ПРОВЕДЕНИЕ ОПРЕДЕЛЕНИЯ

Мазки необходимо зафиксировать фиксатором-красителем по Май-Грюнвальду или типа Лейшмана в течение 2 мин. Непосредственно перед окраской приготовить рабочий раствор: смешать краситель с буферным раствором в соотношении 1:10 — 1:12 и профильтровать. Полученный рабочий раствор красителя можно использовать в течение 6 часов.

Зафиксированные мазки крови поместить в рабочий раствор красителя, по истечении 10-12 мин препараты промыть проточной водой 1-2 сек, высушить на воздухе и микроскопировать.

Окраска форменных элементов крови должна быть следующей: эритроциты — розовые, розовые с серым или бежевым оттенком, бежево-коричневые; тромбоциты — розово-фиолетовые или фиолетовые; ядра лимфоцитов, моноцитов и нейтрофилов — фиолетовые; цитоплазма лимфоцитов — голубая, серо-голубая или сине-голубая; цитоплазма моноцитов — серо-голубая; цитоплазма нейтрофилов — бледно-розовая или розово-серая; зернистость нейтрофилов — фиолетовая или красно-фиолетовая; зернистость эозинофилов — оранжево-красная, розово-красная или розово-фиолетовая; зернистость базофилов — фиолетовая.

УСЛОВИЯ ХРАНЕНИЯ И ЭКСПЛУАТАЦИИ

Хранение красителя должно проводиться при температуре от 0°С до +25°С в крытых вентилируемых помещениях вдали от кислот и щелочей, не допуская воздействия прямых солнечных лучей, в течение всего срока годности (1 год). Краситель стабилен после вскрытия флакона в течение всего срока годности при условии достаточной герметизации флакона.

Для получения надежных результатов необходимо строгое соблюдение инструкции по применению красителя.

Источник

Окраска по Романовскому — Гимзе

Окраска по Романовскому — Гимзе

Окраска по Романовскому — Гимзе — цитологический метод окраски простейших, бактерий, клеточных структур и тканей различных видов (в том числе крови) при световой микроскопии. Предложена в 1904 году Густавом Гимзой. Окрашивает ацидофильные образования в различные оттенки красного цвета, базофильные — в цвета от пурпурного до синего.

Содержание

Приготовление красителя

Готовый жидкий краситель перед окрашиванием мазков разводят из расчета 1-2 капли красителя на 1 мл дистиллированной воды. Мазки окрашивают 20 — 25 минут при 37 °C во влажной камере (закрытая чашка Петри с увлажнённым фильтром на дне). После окрашивания мазки промывают в проточной воде, сушат на воздухе и исследуют при масляной иммерсии.

Красящую смесь Романовского-Гимзы, которая имеет в основе краску Романовского Райта, в виде порошка (коммерческий краситель) растворяют в смеси равных объемов метилового спирта и глицерина (800 мг красителя на 100 мл растворителя). Краситель растворяется плохо, поэтому лучше его растереть с растворителем в количестве 300 мг на 100 мл, а затем, помешивая, добавлять краситель до получения нужной концентрации. Приготовление красителя часто занимает несколько дней. Важно в качестве растворителей использовать химически чистый метиловый спирт и глицерин, так как примеси ухудшают свойства красителя. Вместо метилового спирта можно применять 100 % этиловый спирт. Приготовленную красящую смесь хранят в сухом прохладном месте в плотно закрытом сосуде.

Специальный стандартный раствор Гимза

• Состав красителя:

Азур 1 — 3,772 г Эозин — 2,165 г Метиленовая синька (медиц.) — 1,563 г Метанол (ЧДА) — 750,0 мл Глицерин (ЧДА) — 256,0 мл

Методика окраски

• Мазки, фиксированные в метиловом спирте, окрашивают раствором (1 мл готовой жидкой краски + 2 мл основного буферного раствора + 47 мл дистиллированной воды) в течение 40—120 мин (продолжительность окрашивания подбирают эмпирически). Пользуются фосфатным буфером, но рН буфера зависит от вида мазка: для мазка костного мозга — 5,8 — 6,0, для мазка крови — 6,4 — 6,5, для выявления простейших — 6,8, малярийного плазмодия — 7,0 — 7,2.
• Ополаскивают в дистиллированной воде, высушивают и исследуют при иммерсии.

Результат окраски

Бактерии окрашиваются в фиолетово-красный цвет, цитоплазма клеток — в голубой, ядра — в красный. При окрашивании простейших их цитоплазма приобретает голубой цвет, а ядра — красно-фиолетовый.

См. также

Wikimedia Foundation . 2010 .

Полезное

Смотреть что такое «Окраска по Романовскому — Гимзе» в других словарях:

Окраска по Романовскому — Гимзе цитологический метод окраски простейших, бактерий, клеточных структур и тканей различных видов (в том числе крови) при световой микроскопии. Предложена в 1904[1] году Густавом Гимзой. В авторской версии название красителя «Giemsasche… … Википедия

Окраска по Романовскому-Гимзе — цитологический метод окраски простейших, бактерий, клеточных структур и тканей различных видов (в том числе крови) для облегчения их световой микроскопии. Краситель состоит из эозина, метиленового синего и азура, растворённых в метаноле или в… … Википедия

Окраска по Гимзе — Окраска по Романовскому Гимзе цитологический метод окраски простейших, бактерий, клеточных структур и тканей различных видов (в том числе крови) для облегчения их световой микроскопии. Краситель состоит из эозина, метиленового синего и азура,… … Википедия

Окраска микроорганизмов — (крашение микробов) комплекс методов и приёмов для исследования внешнего и внутреннего строения микроорганизмов, метод микробиологической техники, позволяющий различать виды микроорганизмов. Метод широко используют в прикладной… … Википедия

Окрашивание по Романовскому — Гимзе цитологический метод окрашивания микроорганизмов, клеточных структур и тканей различных видов (в том числе крови) для изучения методом световой микроскопии. Предложена в 1904[1] году Густавом Гимзой. В авторской версии название… … Википедия

Крашение микробов — Окраска микроорганизмов (крашение микробов) комплекс методов и приемов для исследования внешнего и внутреннего строения микроорганизмов, метод микробиологической техники, позволяющий различать виды микроорганизмов. Метод широко используют в… … Википедия

Окрашивание микробов — Окраска микроорганизмов (крашение микробов) комплекс методов и приемов для исследования внешнего и внутреннего строения микроорганизмов, метод микробиологической техники, позволяющий различать виды микроорганизмов. Метод широко используют в… … Википедия

Лейшманио́зы — (leishmanioses) группа трансмиссивных протозойных болезней, вызываемых жгутиковыми простейшими рода Leishmania, переносчиками которых служат москиты, относящиеся к роду Phlebotomus. Вне зависимости от вида лейшмании в своем жизненном цикле… … Медицинская энциклопедия

Список паразитов человека — Паразиты человека это паразиты, заражению которыми подвержен человек. Общее определение слова «паразит» касается не только многоклеточных и простейших, живущих за счёт своего хозяина и во вред последнему, но также вирусов, бактерий и грибов … Википедия

Бакте́рии — (греч. baktērion палочка) одноклеточные микроорганизмы с примитивной цитоплазмой и ядром без ядрышка и ядерной оболочки. Относятся к прокариотам. Наряду с другими микроорганизмами широко распространены в почве воде, воздухе, заселяют… … Медицинская энциклопедия

Источник