Как приготовить лейкоцитарную формулу

Как расшифровать лейкоцитарную формулу?

Лейкоцитарная формула, микроскопия лейкоцитов, пять фракций лейкоцитов, дифференцировка лейкоцитов — в назначениях врача можно встретить много названий одного и того же. Где ее найти и как расшифровать?

Что такое лейкоциты?

Лейкоциты (белые клетки крови) — это большая группа клеток крови. Их основная цель — защита организма от инфекций. Все лейкоциты — это часть иммунитета, они участвуют в аллергических, аутоиммунных, опухолевых процессах. Каждый тип лейкоцитов выполняет свою роль и важен для организма.

Общий анализ крови без лейкоцитарной формулы говорит только об общем содержании лейкоцитов и не позволяет выявить за счет какого типа лейкоцитов идет повышение (лейкоцитоз) или снижение (лейкопения) белых клеток крови. Лейкоцитарная формула определяет пять типов лейкоцитов и оценивается в развернутом общем анализе крови. Чтобы расшифровать лейкоцитарную формулу нужно оценить содержание каждого типа лейкоцитов и их соотношение между собой.

Лейкоцитарную формулу подсчитывает автоматический анализатор крови. Принимая содержание всех лейкоцитов за 100%, он выдает процент (%) содержания каждого типа белых клеток крови. Также автоматически измеряет их содержание в объеме крови (на литр). Иногда требуется “ручной подсчет” и визуальная оценка мазка крови под микроскопом. Например, когда лейкоцитарная формула изменена, есть странные или незрелые клетки, есть признаки анемии или снижения тромбоцитов в общем анализе крови. В этом случае можно увидеть только процентное соотношение лейкоцитарной формулы.

Гранулоциты — ударные силы

Самая большая часть лейкоцитов представлена клетками гранулоцитами. Свое название они получили из-за наличия включений (гранул). Гранулы содержат химические иммунные вещества. В лейкоцитарной формуле можно увидеть три вида гранулоцитов: нейтрофилы, эозинофилы, базофилы. Они различаются особенностями строения ядра и окраски гранул разными красителями. Гранулоциты важны в развитии воспаления и иммунной защите организма. Они способны к поглощению и перевариванию белков и химических веществ. Все гранулоциты созревают в костном мозге, сохраняя там запас зрелых клеток на 3-4 дня. В крови гранулоциты циркулируют не больше 6 часов, уходя в ткани, где и выполняют свою функцию.

Нейтрофилы составляют наибольшее количество циркулирующих в крови лейкоцитов. Ежедневно в кровоток поступает 10 10 нейтрофилов. Нейтрофилез (увеличение количества нейтрофилов в крови) — показатель бактериальной инфекции. Чем тяжелее инфекция, тем больше нейтрофилов выходит на борьбу. Из-за их низкой продолжительности жизни (около 4-х дней) в кровь начинают поступать более юные, еще не созревшие формы клеток (палочкоядерные, метамиелоциты и другие). Врачи называют это “сдвигом лейкоцитарной формулы влево”. Когда нейтрофилов в крови очень мало (нейтропения), организм не защищен от инфекций.

Эозинофилы в крови составляют не более 5% от общего количества лейкоцитов. Их концентрация колеблется в течение суток из-за воздействия гормонов надпочечников. Утром она максимальная. Накапливаются они в подслизистом слое желудочно-кишечного тракта. Эозинофилия (повышение эозинофлов в крови) возникает при паразитарных инфекциях, аллергических и аутоиммунных процессах.

Базофилы составляют наименьшее количество лейкоцитов в крови (менее 1%) и участвуют в аллергических реакциях, выделяя гистамин. Это вещество виновно в спазме бронхов, зуде, отеке, покраснении. В зависимости от того, куда базофилы попали, будут проявления аллергических реакций: приступ бронхиальной астмы, сыпь на коже, крапивница, отек Квинке (отек гортани).

Моноциты — тканевые охотники

Второе звено лейкоцитов — моноциты. В костном мозге, образовавшись за 5 дней, они не формируют запас. В крови моноциты составляют около 10% массы лейкоцитов, быстро уходя в ткани. Тканевые макрофаги, а именно так уже будут называться моноциты, преимущественно содержатся в печени, селезенке, легких. Их продолжительность жизни очень большая (60 дней). Они главные охотники иммунной системы, т.к. поглощают и перерабатывают тысячи чужеродных белков, делая из них доступные иммунным клеткам антигены.

Моноцитоз (повышение моноцитов в крови) связан с хроническими инфекциями, а также с инфекциями, возбудители которых прячутся в клетках организма (вирусы, хламидии, микоплазмы).

Лимфоциты — надежные защитники

Переработанные моноцитами-макрофагами и другими иммунными клетками антигены привлекают лимфоциты. Лимфоциты обеспечивают приобретенный иммунитет, производя антитела и клетки-памяти для защиты от повторной инфекции.

Лимфоциты образуются в костном мозге, циркулируют как в крови, так и в лимфатической системе. Важными органами созревания клеток являются тимус (вилочковая железа) и лимфоузлы. Лимфоциты выполняют разную иммунную работу, представляя вторую по численности группу лейкоцитов. Есть особенное исследование крови (иммунофенотипирование) позволяющее определить разные виды лимфоцитов. Это бывает важно при заболеваниях иммунной системы, ВИЧ-инфекции и др.

В лейкоцитарной формуле важны как повышение лимфоцитов (лимфоцитоз) — больше характерен для вирусных инфекций, так и лимфопения (снижение их количества). Нехватка лимфоцитов снижает защитные силы организма и наблюдается при иммунодефицитах (в том числе ВИЧ-инфекции).

В лаборатории Lab4U можно сдать со скидкой 50%:

Источник

Лейкоцитарная формула (с микроскопией мазка крови при выявлении патологических изменений)

Лейкоцитарная формула – процентное соотношение различных форм лейкоцитов в сыворотке крови и подсчет их числа в единице объема. При наличии атипичных форм клеток проводится исследование крови под микроскопом. В отличие от эритроцитов, популяция которых является однородной, лейкоциты делятся на 5 типов, отличающихся по внешнему виду и выполняемым функциям: нейтрофилы, лимфоциты, моноциты, эозинофилы, базофилы.

Cоотношение различных форм лейкоцитов в крови, дифференцированный подсчет лейкоцитов, лейкоцитограмма, лейкограмма, формула крови, подсчет лейкоцитарной формулы.

Синонимы английские

Leukocyte differential count, Peripheral differential, WBC differential.

*10^9/л (10 в ст. 9/л).

Какой биоматериал можно использовать для исследования?

Венозную, капиллярную кровь.

Как правильно подготовиться к исследованию?

• Исключить из рациона алкоголь за сутки перед сдачей крови.
• Не принимать пищу за 2-3 часа до исследования (можно пить чистую негазированную воду).
• Исключить физическое и эмоциональное перенапряжение и не курить за 30 минут до исследования.

Общая информация об исследовании

Лейкоциты, как и другие клетки крови, образуются в костном мозге. Основная их функция – борьба с инфекцией, а также ответ на повреждение тканей.

В отличие от эритроцитов, популяция которых является однородной, лейкоциты делятся на 5 типов, отличающихся по внешнему виду и выполняемым функциям: нейтрофилы, лимфоциты, моноциты, эозинофилы, базофилы.

Лейкоциты образуются из стволовых клеток костного мозга. Они живут недолго, поэтому происходит их постоянное обновление. Продукция лейкоцитов в костном мозге возрастает в ответ на любое повреждение тканей, это часть нормального воспалительного ответа. Разные типы лейкоцитов имеют несколько разные функции, однако они способны к координированным взаимодействиям путем «общения» с использованием определенных веществ – цитокинов.

Долгое время лейкоцитарную формулу высчитывали вручную, однако современные анализаторы позволяют гораздо точнее проводить исследование в автоматическом режиме (врач смотрит 100-200 клеток, анализатор – несколько тысяч). Если анализатором определяются атипичные формы клеток либо выявляются значительные отклонения от референсных значений, то лейкоцитарная формула дополняется микроскопическим исследованием мазка крови, который позволяет диагностировать некоторые заболевания, такие как, например, инфекционный мононуклеоз, определить степень тяжести инфекционного процесса, описать тип выявленных атипичных клеток при лейкозе.

Нейтрофилы – наиболее многочисленные из лейкоцитов – первыми начинают бороться с инфекцией и первыми появляются в месте повреждения тканей. Нейтрофилы имеют ядро, разделенное на несколько сегментов, поэтому их еще называют сегментоядерными нейтрофилами или полиморфноядерными лейкоцитами. Эти названия, однако, относятся только к зрелым нейтрофилам. Созревающие формы (юные, палочкоядерные) содержат цельное ядро.

В очаге инфекции нейтрофилы окружают бактерии и ликвидируют их путем фагоцитоза.

Лимфоциты – одно из важнейших звеньев иммунной системы, они имеют большое значение в уничтожении вирусов и борьбе с хронической инфекцией. Существует два вида лимфоцитов – Т и В (в лейкоцитарной формуле подсчета видов лейкоцитов по отдельности нет). B-лимфоциты вырабатывают антитела – специальные белки, которые связываются с чужеродными белками (антигенами), находящимися на поверхности вирусов, бактерий, грибов, простейших. Окруженные антителами клетки, содержащие антигены, доступны для нейтрофилов и моноцитов, которые убивают их. Т-лимфоциты способны разрушать зараженные клетки и препятствовать распространению инфекции. Также они распознают и уничтожают раковые клетки.

Моноцитов в организме не очень много, однако они осуществляют крайне важную функцию. После непродолжительной циркуляции в кровяном русле (20-40 часов) они перемещаются в ткани, где превращаются в макрофаги. Макрофаги способны уничтожать клетки, так же как нейтрофилы, и держать на своей поверхности чужеродные белки, на которые реагируют лимфоциты. Они играют роль в поддержании воспаления при некоторых хронических воспалительных заболеваниях, таких как ревматоидный артрит.

Эозинофилов в крови содержится небольшое количество, они тоже способны к фагоцитозу, однако в основном играют другую роль – борются с паразитами, а также принимают активное участие в аллергических реакциях.

Базофилов в крови также немного. Они перемещаются в ткани, где превращаются в тучные клетки. Когда они активируются, из них выделяется гистамин, обусловливающий симптомы аллергии (зуд, жжение, покраснение).

Для чего используется исследование?

• Для оценки способности организма противостоять инфекции.
• Для определения степени выраженности аллергии, а также наличия в организме паразитов.
• Для выявления неблагоприятного воздействия некоторых лекарственных препаратов.
• Для оценки иммунного ответа на вирусные инфекции.
• Для дифференциальной диагностики лейкозов и для оценки эффективности их лечения.
• Для контроля за воздействием на организм химиотерапии.

Когда назначается исследование?

• Совместно с общим анализом крови при плановых медицинских осмотрах, подготовке к хирургическому вмешательству.
• При инфекционном заболевании (или подозрении на него).
• Если есть подозрение на воспаление, аллергическое заболевание или заражение паразитами.
• При назначении некоторых лекарственных препаратов.
• При лейкозах.
• При контроле за различными заболеваниями.

Что означают результаты?

Лейкоцитарная формула обычно интерпретируется в зависимости от общего количества лейкоцитов. Если оно отклоняется от нормы, то ориентирование на процентное соотношение клеток в лейкоцитарной формуле может приводить к ошибочным заключениям. В этих ситуациях оценка производится на основании абсолютного количества каждого вида клеток (в литре – 10 12 /л – или микролитре – 10 9 /л). Увеличение или уменьшение количества какой-либо популяции клеток обозначается как «нейтрофилез» и «нейтропения», «лимфоцитоз» и «лимфопения», «моноцитоз» и «моноцитопения» и т. д.

Источник

Приготовление, фиксация и окраска мазков крови Исследование окрашенных мазков, выведение лейкограммы (лейкоцитарной формулы)

Приготовление мазков крови. Лучше мазки готовить из свежей, нативной крови. Из цитратной и оксалатной крови мазки можно приготовить до 6 ч после взятия ее, а из гепаринизированной — до 24 ч. Мазки крови готовят на предметных стеклах, которые нужно соответствую­щим образом подготовить.

Подготовка предметных стекол. Не бывшие в употреблении стекла промывают в водопро­водной воде, а затем в дистиллированной, высушивают и закладывают в банку с притертой крышкой в смесь равных количеств этилового эфира и этилового спирта. Перед работой стекла извлекают пинцетом, протирают. При необходимости, подгото­вленные таким образом стекла складывают в пакеты, за­вертывают в бумагу и закладывают на хранение в полиэ­тиленовые мешочки, которые хорошо завязывают.

Техника приготовления мазков. Пред­метное стекло берут между большим и указательным пальцами левой руки. Отступя на 1 см от края стекла, лежащего ближе к указательному пальцу, наносят не­большую (диаметром 2 — 3 мм) каплю крови. Это де­лают обычно путем прикосновения поверхностью пред­метного стекла к капле крови на месте ее появления после прокола кожи. При изготовлении мазков из крови, взятой в пробирки, каплю ее наносят с помощью глаз­ной или пастеровской пипетки или краем пробки. Затем правой рукой устанавливают вблизи от капли крови шлифованное стекло под углом 30 — 45° и осторожно продвигают его до соприкосновения края стекла с каплей крови. После этого, плавно и не очень быстро, продвигая, справа, налево шлифованное стекло по пред­метному, приготовляют мазок.

Мазок должен начинаться на 1 — 1,5 см от края предмет­ного стекла и заканчиваться в 1 — 3 см от другого его края, составляя примерно 2/3 — 3/4 длины стекла. Мазок должен быть уже предметного стекла, с боков на стекле должны оста­ваться свободные поля шириной около 1 см. Хоро­ший мазок не имеет перерывов, пустот, на всем протяжении одинаковый по толщине. Хорошие мазки получаются при подогревании пред­метных стекол на резиновой грелке с теплой водой 45 — 50 °С, или на электрообогревательном столике к ми­кроскопу, или на стерилизаторе с горячей водой, закры­том крышкой; рекомендуется на этих же приспособле­ниях высушивать изготовленные мазки.

В холодное время необходимо предупреждать кон­денсацию паров воды на мазках крови, что может вы­звать ее гемолиз.

На высушенном мазке в начальной его части про­стым карандашом или иглой от шприца пишут номер животного (или порядковый номер записи исследуемых животных) и дату взятия крови.

Фиксация мазков. Мазки крови необходимо в течение 2 дней после изготовления или зафиксировать, или окра­сить. Нефиксированные мазки через месяц теряют спо­собность правильно окрашиваться.

Для фиксации мазки погружают в метиловый спирт (5 мин), этиловый спирт (30 мин), этиловый спирт и эти­ловый эфир поровну (30 мин) или денатурированный спирт (30 мин). Мазки помещают в кюветы с фиксато­ром и закрывают крышкой. Мазки не должны соприка­саться. После фиксации мазки высушивают на воздухе.

Окраска мазков. Качество окраски мазков зависит от многих факторов, в том числе и от рН воды, применяе­мой для разведения красок.

Для нейтрализации воды с кислой реакцией по ка­плям добавляют 1 %-ный раствор натрия гидрокарбона­та, пока розово-фиолетовая окраска не начнет появлять­ся в течение 1 — 5 мин. Для нейтрализации щелочной воды добавляют 1 %-ный раствор уксусной кислоты.

Метод Романовского— Гимза. Фиксиро­ванные препараты кладут мазком вниз на стеклянный мостик в кювете и наливают под них рабочий раствор краски (к 1 мл дистиллированной воды добавляют 2 ка­пли фабричного раствора краски Романовского — Гим­за). Окрашивание продолжается 15 — 30 мин. Продолжи­тельность окраски зависит от окружающей температуры (чем холоднее, тем продолжительнее окраска) и качества красителя. В заключение мазки промывают дистиллиро­ванной водой и сушат на воздухе.

Хорошо окрашенные мазки имеют розово-фиоле­товый цвет, не докрашенные — розовато-красноватый, а перекрашенные — темно-фиолетовый.

Выведение лейкограммы (лейкоцитарной формулы).

Лейкограммой называется про­центное соотношение между отдельными видами лейкоци­тов в крови.

Окрашенные мазки крови исследуют под микроскопом с иммерсией, для чего используют объектив х 90 и им­мерсионное масло, которое после исследования удаляют с препарата бензином, керосином, ксилолом или хлоро­формом.

В окрашенных мазках крови определяют величину, форму, характер окраски и структуру ядра, цитоплазмы и включений в нее, а также соотношение между раз­личными формами отдельных видов клеток крови.

Методы дифферен­циального подсчета лейкоцитов. Лейкограмму выводят по окрашенным мазкам крови путём дифференциального подсчёта под иммерсионной системой микро­скопа 100 (или лучше 200) лейкоцитов.

Четырехпольный метод. Дифференциальный подсчет лейкоцитов проводят таким образом, что с ка­ждой стороны мазка в начале и конце его (т. е. на 4 ис­следуемых участках) определяют по 25 лейкоцитов (всего 100 клеток). При этом от края мазка углубляются на 3 — 4 поля зрения, затем продвигаются на 2 — 3 поля вдоль мазка и возвращаются к его краю. Количество каждого вида лейкоцитов, обнаруженных при исследова­нии, регистрируют на 11-клавишном счетчике.

Трехпольный метод. При использовании трехпольного метода лейкоциты подсчитывают в 3 участках, расположенных поперек мазка (от одного края до другого). В начале мазка подсчитывают 35 кле­ток, в середине — 30 и в конце — 35 клеток.

Однопольный метод. Лейкоцитарную формулу определяют в средней части мазка, где, проходя поперек его от одного края до другого и обратно, подсчитывают 100 лейкоцитов.

При записи результатов выведения лейкограммы от­дельные виды лейкоцитов располагают в такой последо­вательности: базофилы (Б), эозинофилы (Э), нейтрофилы — миелоциты (М), юные (Ю), палочкоядерные (П), сегментоядерные (С), лимфоциты (Л), моноциты (М). Лейкограмма крови здоровых животных представлена в таблице.

Методика вычисления абсолютного ко­личества отдельных видов лейкоцитов в 1 мкл крови. Для этого необходимо подсчитать количе­ство лейкоцитов и вывести лейкограмму. Затем число лейкоцитов умножают последовательно на процент ка­ждого вида клеток лейкограммы и делят на 100, получая абсолютное число отдельных форм белых кровяных те­лец в 1 мкл крови (таб.3).

Источник