Как приготовить микропрепарат с бактериями

Существует целый ряд заболеваний, клинический диагноз которых (малярия, возвратный тиф и др.) может быть подтвержден при помощи микроскопических исследований фиксированных и окрашенных тонких мазков из периферической крови или в препаратах «толстой капли» крови.

Кровь берут из пальца, предварительно протертого спиртом, уколов его стерильной иглой. Для приготовления тонкого мазка хорошо обезжиренное предметное стекло прикладывают к месту укола на пальце и получают небольшую каплю крови .

К переднему краю капли ставят шлифованное предметное стекло под углом 45 градусов. После того как кровь растечется по краю стекла, его продвигают вперед так, чтобы на предметном стекле получился равномерный тонкий мазок. Мазки крови вначале высушивают на воздухе, а затем фиксируют метиловым спиртом или смесью Никифорова.

В том случае, когда концентрация микроорганизмов в крови невелика и их не удается обнаружить в тонких мазках, необходимо приготовить препарат «толстой капли». Для этого на предметное стекло наносят 2 – 3 капли крови, полученной при проколе мякоти пальца, и распределяют на стекле в виде пятно 10 – 15 мм. Препарат высушивают на воздухе и для разрушения эритроцитов (чтобы они не мешали обнаруживанию микробов) на мазок осторожно наносят 1 – 2 капли дистиллированной воды. Через несколько минут высушенный и зафиксированный препарат окрашивают, промывают струей воды, высушивают и изучают при помощи иммерсионного микроскопа.

Приготовление мазков из испражнений

При исследовании кроваво – слизистого или жидкого стула с целью выявления кишечных патогенных простейших начинать исследования необходимо со слизи. Отобранный кусочек слизи, наносят на предметное стекло. Для того, чтобы слой слизи был тонким, его необходимо расправить препаровальными иглами. После этого препарат накрывают покровным стеклом и исследуют микроскопически.

Таким же способом готовят мазок и из жидкого калового стула.

Мазок из оформленного или густого кашицеобразного стула готовится следующим образом: в капле физиологического раствора, предварительно нанесенной на предметное стекло, ополаскивают конец тонко заостренной деревянной палочки, предварительно погруженной в кал. Полученная взвесь накрывается покровным стеклом и производится просмотр при помощи микроскопа для первоначальной ориентировки. Точное определение паразитов осуществляется в фиксированных и окрашенных препаратах.

Исследование не окрашенных и окрашенных препаратов начинают с просмотра мазков при помощи малого увеличения. Малое увеличение дает возможность охватить большее поле зрения, и, следовательно, быстрее могут быть обнаружены паразиты. Детальное же изучение паразита проводится при помощи иммерсионного объектива.

Приготовление микропрепаратов из мокроты,
мочи и спинномозговой жидкости

Для исследования мокроты ее выливают в чашку Петри из емкости, в которой она находится. Бактериологической петлей выбирают гнойные комочки и размазывают их тонким слоем по поверхности предметного стекла.

При исследовании мочи ее собирают в сосуд. Дают ей отстояться на холоду или центрифугируют. Из полученного осадка готовят микропрепараты.

При микроскопическом исследовании спинномозговой жидкости микропрепараты готовят из фибринозного сгустка или из осадка, полученного при отстаивании или центрифугировании жидкости.

Препараты следует готовить с большой осторожностью. После того как препараты высохнут, их фиксируют и окрашивают.

Приготовление препарата «мазок – отпечаток»
из органов инфицированного макроорганизма

Необходимость приготовления мазка – отпечатка из селезенки, печени, костного мозга, лимфоидной ткани возникает по разным причинам: определить первостепенность обсеменения того или иного органа в зависимости от пути и времени проникновения возбудителя в макроорганизм, активности ответной реакции иммунокомпетентных органов, вирулентных особенностей возбудителя (отношение к капсулообразованию) и пр.

Для приготовления мазка – отпечатка необходимо стерильно сделать горизонтальный срез органа и на свежий срез быстро и аккуратно без приложения усилий накладывается стерильное обезжиренное предметное стекло. И также быстро поднимается вертикально вверх, без смещения в какую – либо сторону.

Препарат высушивается на воздухе, фиксируется в жидком фиксаторе, промывается осторожно проточной водой, высушивается, окрашивается и микроскопируется.

Источник

Приготовление препарата для микроскопа

В этой статье расскажу 3 способа приготовления препаратов для микроскопа. Эти способы — самые простые.

В начале статьи — так называемый словарик, а точнее пояснения, что такое тот или иной предмет.

Для изготовления микропрепаратов требуется специальный инструмент, красители, а также определенная аккуратность и сноровка. Очень важно строгое соблюдение всех необходимых условий – иначе микропрепарат может оказаться непригодным для исследований.

В продаже есть готовые наборы препаратов для исследований (что удобно для дома и школы) — например, 25 препаратов, или 38 слайдов от Левенгук. А также минералы и другие наборы.

Смотрите КАТАЛОГ микроскопов.

пояснения

Фиксированный препарат — в микробиологии часто готовят именно фиксированные препараты, так что следует знать, что это такое. Эти препараты рассматривают под микроскопом именно в окрашенном виде. Под словом «фиксация» имеется ввиду такая обработка живого объекта (который вы собираетесь рассмотреть), которая дает возможность быстро прервать жизненные процессы в том или ином объекте (поясню проще — убить), при этом сохранив тонкую структуру. В результате фиксации клетки прочно прикрепляются к стеклу и лучше прокрашиваются. Фиксация необходима в случае работы с патогенными микроорганизмами (в целях самобезопасности).

Патоген, патогенный микроорганизм — живой организм, паразит, вызывающей патологическое состояние (заболевания) иного живого организма.

Суспензия — смесь каких-либо веществ, где твёрдое вещество распределено в виде мельчайших частиц в жидком веществе в неосевшем состоянии.

Биологическая петля — тонкая металлическая палочка, на конце — тонкая металлическая петля. Используется для захватывания маленького количества той или иной суспензии микроорганизмов.

Вазелин — мазеобразная жидкость без запаха и вкуса. Смесь состоит из минерального масла и твёрдых парафинов (воскоподобная смесь).

Герметизация — обеспечение совершенной непроницаемости для разных газов и жидкостей поверхностей и мест соединения деталей.

Агар-агар — в микробиологии используется для изготовления плотных и полужидких питательных сред, то есть агаризованных сред.

Жидкость Карнуа — жидкость для фиксации.

Горелка — устройство, имеющее инжектор, который установлен в металлической трубке с отверстиями для поступления в эту трубку атмосферного воздуха, которая закреплена на подставке с боковым вводом для подачи в трубку газа, при этом отверстия выполнены на боковой поверхности трубки, на которой для изменения подачи воздуха в горелку, может быть установлена подвижная заслонка, изменяющая площадь проходного сечения этих отверстий.

Смесь Никифорова — смесь равных объемов этилового спирта и безводного серного эфира, применяется для фиксации мазков крови, мазков-отпечатков органов и каких либо тканей.

Приготовления препарата «раздавленная капля»

Убедитесь, что ваше предметное стекло обезжиренное и чистое.

Нанесите 1-2 капли воды на предметное стекло.

Аккуратно положите объект изучения.

Аккуратно накройте каплю с объектом изучения покровным стеклом. Если вода при накрывании капли покровным стеклом вышла за его пределы, аккуратно удалите её фильтрованной бумагой.

Препарат «раздавленная капля» готов! Приступайте к его изучению.

Приготовление препарата «висячая капля»

Одну каплю суспензии микроорганизмов (заранее приготовленной) с помощью биологической петли аккуратно нанесите на чистое покровное стекло.
Переверните покровное стекло с каплей суспензии так, чтобы капля свободно висела.
Поместите перевёрнутое покровное стекло с каплей над лункой специального покровного стекла с углублением в центре.
Капля не должна касаться краёв стекла и углубления (лунки), она должна свободно висеть на покровном стекле.
Края углубления специального покровного стекла предварительно смазывают вазелином для герметизации камеры.
Наслаждайтесь наблюдением за бактериями в микропрепарате!

Приготовление препарата «отпечаток»

Из агаризованной среды, на которой какие-либо микроорганизмы растут абсолютным сплошным газоном или же в виде отдельных колоний, аккуратно вырежете скальпелем не очень большой кубик.

Перенесите его на предметное стекло таким образом, чтобы поверхность кубика с микроорганизмами была обращена именно вверх.

Затем к газону микроорганизмов или к колонии приложите обычное покровное стекло (абсолютно чистое), аккуратно и не сильно, а слегка, надавите на него биологической петлей или пинцетом и тотчас снимите, стараясь не сдвинуть его в сторону.

Полученный препарат (покровное стекло с отпечатком) помещают именно отпечатком вниз в каплю обычной воды на чистое предметное стекло. Отпечаток также можно получить и на предметном стекле, если касаться поверхности колонии предметным стеклом.

Препарат готов!

Внимание! Препараты живых клеток рассматривают с помощью «сухих систем» микроскопа. После микроскопирования такие препараты перед мытьем должны быть выдержаны в дезрастворе (дезинфицирующее средство).

Приготовление препарата «отпечаток», иной способ

Из агара в чашке Петри с засеянными на нем бактериями (бактериальным газоном) вырежьте блок.

Возьмите обезжиренное чистое стекло и приложите его к поверхности блока агара, засеянного бактериями. Получился первый отпечаток, Отпечатки делайте до тех пор, пока бактериальный слой на блоке не истощится, располагая их слева направо начиная с левой короткой грани стекла.

Дайте отпечаткам подсохнуть и поместите стекло в жидкость Карнуа для фиксации клеток.

Готово!

Приготовление препарата «фиксированный мазок»

Для того, чтобы приготовить этот препарат, требуется на обезжиренное предметное стекло нанести одну каплю воды.

В неё биологической петлей внесите исследуемый вами материал и распределите его так, чтобы получить тонкий и равномерный мазок диаметром примерно 1-1,5 сантиметра (только при таком распределении материала в мазке можно увидеть изолированные бактериальные клетки).

Если исследуемый материал содержится в жидкой среде, то петлей его непосредственно наносят на предметное стекло и готовят мазок. Мазки высушивают на воздухе или в струе теплого воздуха над пламенем горелки.

Для фиксации мазка предметное стекло (именно мазком вверх) очень аккуратно и медленно проводят 3 раза (в течение всего 3 секунд) через пламя горелки. Микроорганизмы, находящиеся в мазке, при фиксации погибают, плотно прикрепляясь к поверхности предметного стекла, и они не смываются при дальнейшей обработке препарата.

Внимание! Более долгое нагревание может вызвать деформацию структур клеток. Мазки крови, мазки-отпечатки органов и каких-либо тканей и (в некоторых случаях и мазки из культур), фиксируют погружением на 5-20 минут в метиловый синий или этиловый спирт, смесь Никифорова, также сулемовый спирт или иные фиксирующие жидкости.

Примеры микропрепаратов для микроскопа

Перечень микропрепаратов набора на 25 слайдов от WSBD World:

Loose Connective Tissue Рыхлая волокнистая соединительная ткань
Spinal Cord c.s. Поперечный срез спинного мозга
Motor Nerve Ending Нервные клеточные окончания (нейроны)
Stomach Mammal Sec. Срез ткани желудка млекопитающего
Kidney c.s. Поперечный срез почки
Artery & Vein c.s. Поперечный срез вены и артерии
Blood Vessel of Lung Срез кровеносного сосуда легкого
Blood Vessel of kidney Срез кровеносного сосуда почки
Tase Bud Вкусовой рецептор
Mouth Smear Мазок со слизистой полости рта
Human Sperm Smear Мазок человеческой спермы
Mitosis of Animal Cell Митоз клетки животного
Hydra thru Testis c.s. Семенник гидры
Hydra thru Ovary c.s. Яичник гидры
Hydra with Bud Гидра с отростком
Fern Prothalium wm Заросток папоротника
Zea Mays Seed l.s. Срез семян кукурузы
Spirogyra Спирогира
Lung Mammal Легкое млекопитающего
Colon Mammal Толстая кишка млекопитающего
Trachea Mammal Трахея млекопитающего
Pancreas Mammal Поджелудочная железа млекопитающего
Uterus Mammal Матка млекопитающего
Spleen Mammal Селезенка млекопитающего
Onion Root Tips Корневые кончики лука

Содержимое другого набора (38 штук) — Levenhuk N38 NG набор готовых микропрепаратов:

Ботаника и зоология:

Кожица лука
Зерновка ржи
Корневой чехлик
Ветка липы
Пыльник
Завязь
Камелия
Эпидермис листа герани
Конечность пчелы
Крыло пчелы
Циклоп
Вольвокс
Эвглена
Инфузория-туфелька
Дождевой червь (поперечный срез)
Ротовой аппарат комара
Аскарида
Дафнии

Биология и физиология:

Мутация дрозофилы (бескрылая форма)
Мутация дрозофилы (черное тело)
Дрозофила «норма»
Животная клетка
Растительная клетка
Плесень мукор
Дробление яйцеклетки
Митоз в корешке лука
Поперечно-полосатые мышцы
Сперматазоиды млекопитающего
Нерв (поперечный срез)
Рыхлая соединительная ткань
Яйцеклетка млекопитающего
Нервные клетки
Гиалиновый хрящ
Гладкие мышцы
Костная ткань
Кровь лягушки
Кровь человека
Однослойный эпителий

Источник

Техника приготовления микропрепаратов

Микроскопы открывают крохотные миры.
С помощью микроскопа можно увидеть невероятный мир, существующий на клеточном уровне. Поразительным свойством микропрепаратов является возможность их длительного хранения и наблюдения распада клеток с течением времени. В любом случае, если не терпится поскорее взглянуть на образец или проводится долгое научное исследование, нужно научиться приготавливать микропрепараты.

Приготовление сухого препарата

Сухие препараты используются для изучения образцов, не требующих для выживания контакта с водой. Для начала потребуется чистое предметное стекло. Осторожно поместите как можно более тонкий срез образца в центр предметного стекла и накройте его покровным стеклом. Если вы в резиновых перчатках, можете слегка придавить покровное стекло, чтобы выровнять препарат.

Приготовление влажного препарата

Влажные препараты используются, если образец не может обходиться без воды, чтобы оставаться живым. Это часто бывает с одноклеточными организмами и мелкими животными. Возьмите чистое предметное стекло. С помощью пипетки, поместите одну-две капли дистиллированной воды в центр стекла. Поместите в воду образец и накройте его покровным стеклом. Опять же, можно немного прижать покровное стекло, если на руках резиновые перчатки. Прикосновение к стеклу без перчаток оставит на нем отпечатки, мешающие наблюдениям препарата под микроскопом.

Влажные препараты сами по себе удерживают покровное стекло на месте и могут храниться некоторое время. Если исследуемые микроорганизмы слишком подвижны, чтобы их можно было изучать, «замедлить» их, добавив в воду связующий компонент, например «Protoslo» (1,5% раствор метилцеллюлозы).

Подкрашивание препаратов

Некоторые организмы трудно увидеть под микроскопом без дополнительного окрашивания. Лучший способ это сделать – добавить капельку раствора Люголя (раствор йода и йодида калия) в воду перед тем, как поместить в нее образец. Также можно использовать растворы «метиленового синего» или «кристаллического фиолетового».

Если требуется окрасить уже готовый препарат, можно попробовать такую хитрость. Поместите с одной стороны покровного стекла краситель, а с другой – бумажную салфетку. Салфетка будет вытягивать влагу из-под стекла с одной стороны и таким образом затягивать под него краситель с другой стороны.

Источник

Как приготовить микропрепарат с бактериями