Как приготовить нервно мышечный препарат лягушки

Практические работы.

1. Приготовление нервно-мышечного препарата и препарата изолированной икроножной мышцы лягушки.

ЦЕЛЬ: ознакомиться с методикой приготовления НМП и икроножной мышцы лягушки.

ОСНАЩЕНИЕ: препаровальный набор инструментов, лоток, салфетки, операционный столик, раствор Рингера, лягушка.

1. Обездвиживание лягушки. Существует несколько способов обездвиживания: наркотизация (например, эфирный наркоз), введение миорелаксантов в подкожный лимфатический мешок, разрушение ЦНС путём декапитации и введения препаровальной иглы в спинномозговой канал.

Этапы приготовления нервно-мышечного препарата и изолированной мышцы.

а – перерезка позвоночника; б – снятие кожи с лапок; в – препарат задних лапок;

г – отрезание уростиля; д – расположение бедра; е – препарирование седалищного нерва;

ж – места перерезания лапки; з – нервно-мышечный препарат икроножной мышцы;

и – препарат изолированной мышцы.

2. Приготовление препарата двух задних лапок. Позвоночник перерезается на один см выше проксимального конца копчика (примерно посередине туловища), отделяются внутренности вместе с передним отделом туловища. С помощью марлевых повязок — через первую — удерживают остаток позвоночника, через вторую – захватывают кожу и быстрым движением удаляют её с лапок.

3. Приготовление препарата одной лапки. Препарат задних лапок берётся в левую руку за остаток позвоночника (через марлю) и срезается ножницами хвостовая кость (уростиль). Препарат переворачивается на вентральную поверхность и под контролем зрения (чтобы не повредить нервные стволы крестцового сплетения) разрезается продольно по средней линии позвоночника на две половины. Один препарат помещается в стаканчик с раствором Рингера, другой – используется для приготовления нервно-мышечного препарата.

4. Приготовление нервно-мышечного препарата. Заключается в препарировании икроножной мышцы и седалищного нерва.

Препарирование икроножной мышцы начинается с области пяточного (ахиллова) сухожилия. Под сухожилие подводят браншу ножниц, отделяют его по всей длине и перерезают ниже сесамовидной косточки. Захватив конец пяточного сухожилия пинцетом, отводят икроножную мышцу в сторону, разрывая фасции, соединяющие её с другими тканями.

При препарировании нерва препарат переворачивают задней (дорсальной) поверхностью кверху. Двумя большими пальцами рук раздвигают мышцы бедра и обнажают лежащий в глубине седалищный нерв. С помощью стеклянных крючков препарируют нерв на всём протяжении до коленного сустава, подрезая все веточки нерва ножницами. Затем, перерезают конечность выше и ниже коленного сустава.

5. Приготовление препарата изолированной мышцы. От нервно-мышечного препарата отсекают нерв.

2. Сравнение возбудимости нерва и скелетной мышцы.

Сокращение мышцы в экспериментальных условиях может быть достигнуто как раздражением самой мышцы (прямое раздражение), так и раздражением двигательного нерва, иннервирующего данную мышцу (непрямое раздражение). Мерой возбудимости является пороговая сила раздражителя.

ЦЕЛЬ: сравнить возбудимость нервной и мышечной тканей.

ОСНАЩЕНИЕ: стимулятор, электроды, универсальный штатив со столиком Энгельмана, раствор Рингера, нервно-мышечный препарат.

ХОД РАБОТЫ: нерв нервно-мышечного препарата помещается на электроды стимулятора, определяется пороговая сила раздражителя, вызывающая возбуждение нерва и сокращение мышцы. Затем электроды помещаются на мышцу. Пороговая сила, подобранная для непрямого раздражения, оказывается недостаточной для прямого раздражения мышцы. Увеличивайте силу раздражителя до тех пор, пока мышца не ответит сокращением.

Источник

Как приготовить нервно мышечный препарат лягушки

Нервно-мышечная система

Методы исследования свойств мышц. Физиологические свойства мышечной ткани обычно изучают на нервно-мышечном препарате лягушки, чаще всего на изолированной икроножной мышце с седалищным нервом. Нервно-мышечный препарат помещают в специальную камеру, в которой поддерживают определенную влажность.

В качестве раздражителя преимущественно используют электрический ток. Однако можно применять механические (щипок, укол, удар), химические (кислоты), температурные (тепло, холод) и другие раздражители.

О функциональном состоянии мышцы судят по результатам регистрации ее Механической реакции (миография) и биопотенциалов (электромиография).

Регистрация мышечного сокращения. Для записи сокращений мышцы ее укрепляют в вертикальном миографе, специальном зажиме, в который помещают бедренную кость нервно-мышечного препарата. Сухожилие мышцы соединяют с пишущим рычажком, свободный конец которого прикладывают к барабану кимографа. Главную часть кимографа — барабан — покрывают бумагой. Барабан приводят в равномерное вращение часовым механизмом или электромотором. Часовой механизм заводят с помощью ключа. Для приведения барабана во вращение смещают стопор, находящийся на стенке коробки часового механизма. Скорость вращения регулируют с помощью специального валика, расположенного на оси барабана. Для замедления вращения применяют крылатки, оказывающие сопротивление действию часового механизма.

Для электрического раздражения мышцы используют электронные стимуляторы или санный аппарат Дюбуа-Реймона.

Основной частью стимулятора является генератор колебаний, включающий электронные лампы или транзисторы. Прибор питается от сети переменного тока и имеет гнезда для подключения электродов. На лицевой панели стимулятора имеются ручки и шкалы. Поворотом тумблера «частота» устанавливают нужную частоту раздражения в секунду, переключателем «длительность» устанавливают необходимую продолжительность стимуляции. С помощью ручки «амплитуда» и тумблера переключения диапазонов амплитуды (×1, ×10) можно изменять величину раздражающего стимула. Имеется тумблер «пуск», при включении которого раздражение подается к препарату. Корпус заземляют.

При раздражении нервно-мышечного препарата возникает мышечное сокращение, которое регистрируется на барабане кимографа в виде кривой, получившей название миограммы.

Задание 1. Приготовление нервно-мышечного препарата лягушки

Для работы необходимы: набор препаровальных инструментов (ножницы большие и малые, пинцет хирургический и глазной, металлический зонд для разрушения спинного мозга, два стеклянных крючка), изоосмотический раствор хлорида натрия для холоднокровных.

Ход работы. 1. Лягушку завернуть в марлевую салфетку, одну браншу ножниц ввести в полость рта, вторую поместить за глазами и, сомкнув их, удалить головной мозг. Зондом разрушить спинной мозг. Острием ножниц проткнуть полость тела, ввести в нее браншу ножниц и, отступя на 1·10 -2 м (1 см) от копчиковой кости, перерезать позвоночник.

2. Держа лягушку за задние лапки и опустив ее головой вниз, отрезать всю свисающую половину туловища и внутренности.

3. Захватить одной рукой остаток позвоночника, другой — край кожи со спины, быстрым движением снять кожу с обеих лапок (в этом случае получают препарат двух задних лапок лягушки).

4. Фиксировать препарат двух лапок так, чтобы они висели вниз под прямым углом к позвоночнику, ножницами осторожно вырезать копчиковую часть. Затем продольно по средней линии отделить лапки друг от друга.

5. Подведя под ахиллово сухожилие браншу ножниц, отделить его по всей длине и, захватив сухожилие пинцетом, оттянуть мышцу в сторону и разорвать фасции, связывающие ее с другими тканями.

6. Для выделения нерва бедро расположить задней поверхностью кверху. Мышцы развести и отпрепарировать двумя стеклянными крючками нерв по всей его длине.

7. Перерезать бедренную кость выше коленного сустава, а кости голени ниже него. Полученный нервно-мышечный препарат поместить в изоосмотический раствор хлорида натрия для холоднокровных.

Задание 2. Изучение физиологических свойств нервов и мышц

Для работы необходимы: электронный стимулятор (или санный аппарат Дюбуа-Реймона), электроды, набор препаровальных инструментов, миограф, кимограф, гальванический пинцет, изоосмотический раствор хлорида натрия для холоднокровных.

Ход работы. 1. Приготовить нервно-мышечный препарат лягушки и фиксировать его в миографе.

2. Соединить сухожилие мышцы с пишущим рычажком.

3. Зарядить пишущий рычажок чернилами.

4. Записать мышечные сокращения при раздражении мышцы непосредственно — прямое раздражение и через нерв — непрямое раздражение: а) гальваническим пинцетом; б) электрическим током; в) щипком.

5. Начиная с минимальной (подпороговое раздражение), изменять силу тока и получить минимальное и максимальное сокращение мышцы.

6. Записать сокращение мышцы при минимальной скорости вращения барабана кимографа.

Задание 3. Регистрация одиночного сокращения изолированной мышцы, зубчатого и гладкого тетануса

Для работы необходимы: электронный стимулятор (санный аппарат Дюбуа-Реймона), электроды, миограф, кимограф, универсальный штатив, писчики, влажная камера, набор препаровальных инструментов, изоосмотический раствор хлорида натрия для холоднокровных.

Ход работы. 1. Приготовить нервно-мышечный препарат лягушки, укрепить его в миографе, соединить с писчиком. Подвести электроды вплотную к мышце.

2. При частоте раздражения 1 Гц (одиночное раздражение) определить пороговую силу раздражения и несколько увеличить ее.

3. Записать на барабане кимографа миограммы при нанесении на мышцу раздражения: а) 1 Гц; б) 5-10 Гц; в) 20-40 Гц.

Задание 4. Зависимость работы изолированной мышцы от нагрузки. Определение мышечной силы

Для работы необходимы: электронный стимулятор (катушка Дюбуа-Реймона), влажная камера с электродами, миограф с подпоркой, набор грузов с крючками, набор препаровальных инструментов, изоосмотический раствор хлорида натрия для холоднокровных.

Ход работы. 1. Приготовить нервно-мышечный препарат лягушки.

2. Изолировать икроножную мышцу.

3. Ахиллово сухожилие соединить с рычагом миографа прочной ниткой или проволокой. Под рычаг поставить особую подпорку, которая будет препятствовать растягиванию мышцы при подвешивании груза и позволит лишь поднимать груз при сокращении.

4. Подобрать силу и частоту раздражений, дающих наиболее высокое тетаническое сокращение. Запись вести на неподвижном барабане кимографа.

5. Записать максимальную высоту сокращения мышцы, без нагрузки.

6. К рычагу (к той же точке, за которую тянет мышца) подвесить груз в 2,5·10 -2 -3·10 -2 кг (25-30 г) и снова записать высоту сокращения в ответ на раздражение. Под графиком отметить массу груза.

7. Не меняя силу и частоту раздражения, при постепенном увеличении нагрузки на 5·10 -3 кг (5 г) и одновременной регистрации высоты сокращения найти предельный груз, который мышца может поднять. Эта величина, выраженная в килограммах, и будет соответствовать абсолютной силе мышцы.

8. Вычислить работу мышцы при различных нагрузках по формуле:

где А — работа; m — масса груза; h — высота сокращения.

Задание 5. Эргография

Для работы необходимы: эргограф, кимограф, метроном, набор грузов (1-3 кг), циркуль, линейка.

Ход работы. 1. Укрепить предплечье в станке эргографа.

2. Надеть кожаное кольцо, соединенное с грузом и пишущим устройством, на указательный палец. Остальными пальцами для исключения их движения охватить вертикальный стержень.

3. Подвесить на шнур груз массой 2 кг и включить метроном с частотой 60 ударов в 60 с (1 мин).

4. Обследуемый начинает поднимать груз в заданном ритме до полного утомления.

5. Отметить время начала и окончания работы и определить ее продолжительность.

6. По эргограмме определить величину работы, выполненной сгибателем пальца. Для этого определить высоту каждого подъема кривой, полученные величины сложить и умножить на массу груза.

7. После отдыха повторить исследование с грузом массой 3 кг и частотой совершаемых движений 120 в 60 с (1 мин).

Задание 6. Измерение силы мышц человека при помощи кистевого динамометра (динамометрия)

Для работы необходим: кистевой динамометр.

Ход работы. 1. Определить мышечную силу сгибателей пальцев правой и левой руки с помощью кистевого динамометра.

2. Определить силу обеих рук на растяжение.

3. Определить силу разгибателей пальцев после многократных сжатий пружины динамометра.

Источник

1. Приготовление нервно-мышечного препарата лягушки (см. Практикум по Нормальной физиологии/ Под ред. Н.А. Агаджаняна. — м., 1996.-с. 183-184.)

Необходимы: лягушка, препаровальная дощечка, препаровальный набор,

марлевые салфетки, раствор Рингера.

Цель работы: освоить методику приготовления нервно-мышечного препарата.

Ход работы

1. Обездвиживают лягушку декапитацией и разрушением спинного мозга. Для этого вводят браншу ножниц в полость рта, одним движением производят декапитацию. В обнажившийся разрез центральной нервной системы вводят разрушитель и разрушают спинной мозг. Качество разрушения центральной нервной системы контролируют по отсутствию тонуса конечностей.

2. Берут лягушку за задние лапки спинкой вверх. Перерезают позвоночник примерно посредине туловища. Отвисшую вниз верхнюю часть туловища и внутренности убирают, сделав разрезы справа и слева сверху вниз вдоль позвоночника до лонного сочленения, и, захватив одной рукой позвоночник, а другой край кожи, снимают кожу с обеих лапок.

3. Берут препарат за остаток позвоночника так, чтобы задние лапки свисали вниз и вырезают копчиковую кость — уростиль. При этом бранши ножниц проводят вдоль копчиковой кости так, чтобы не задеть нервные стволики. Разрезают продольным разрезом позвоночник и лонное сочленение. Из получившихся двух препаратов задних лапок лягушки один помещают в раствор Рингера, другой используют для дальнейшей препаровки.

4. Располагают бедро задней поверхностью вверх. Препаровальными крючками раздвигают мышцы и обнажают седалищный нерв. Взявшись за остаток позвоночника, выделяют нервный пучок, в составе которого идет седалищный нерв, а затем и сам седалищный нерв.

5. Вылущивают головку бедра из тазобедренного сустава и убирают мышцы бедра. В результате этих операций получается препарат реоскопической лапки.

6. Для приготовления нервно-мышечного препарата пересекают ахилово сухожилие и, взяв за него, отделяют икроножную мышцу до коленного сустава. Оставшиеся кости и мышцы голени убирают. В результате получается нервно-мышечный препарат, состоящий из седалищного нерва, икроножной мышцы и бедренной косточки.

2. Воспроизведение опытов Гальвани (см. Практикум с. 192-193).

Необxодимы: лягушка, препаровальная дощечка, препаровальный набор,

марлевые салфетки, раствор Рингера, вилочка Гальвани.

Цель работы: доказать наличие потенциала покоя в икроножной мышце лягушки.

Ход работы

1. Готовят реоскопическую лапку.

2. Воспроизводят первый опыт Гальвани. Для этого прикасаются вилочкой Гальвани, состоящей из медной и цинковой пластинок, к нерву. Наблюдают ответную реакцию.

3. Воспроизводят второй опыт Гальвани. Для этого делают разрез на икроножной мышце и осторожно набрасывают нерв на мышцу так, чтобы он попал одновременно на поврежденный и неповрежденный участки мышцы. Наблюдают ответную реакцию.

4. В отчетах зарисовывают схему первого и второго опытов Гальвани.

4. Опыт Маттеучи (вторичный тетанус) (см. Практикум с. 193).

Необходимы: лягушка, препаровальная дощечка, препаровальный набор,

марлевые салфетки, раствор Рингера, электорстимулятор.

Цель работы: доказать наличие потенциала действия в икроножной мышце.

Тут вы можете оставить комментарий к выбранному абзацу или сообщить об ошибке.

Источник