Как приготовить полужидкий агар для хранения музейных культур

Как приготовить полужидкий агар для хранения музейных культур

5.1. Общие положения

Предпочтительно использование стандартизованных сухих питательных сред промышленного производства.

При использовании промышленных сухих питательных сред их приготавливают в соответствии с указаниями изготовителя на этикетке.

В этом случае следует соблюдать способ применения и срок хранения питательных сред, указанные на упаковках.

Сухие питательные среды хранят в сухих помещениях, в темноте, при комнатной температуре. Открытые упаковки тщательно закупоривают. Среды с измененным внешним видом (уплотненные, с комками), а также с истекшим сроком годности не используют.

Для приготовления растворов, реактивов и питательных сред применяют воду дистиллированную по ГОСТу 6709-72.

Питательные среды готовят в посуде из инертного материала.

Учитывая возможное изменение рН питательных сред после кипячения и стерилизации, окончательный контроль рН проводят в готовой среде при температуре 25 °С с использованием индикаторной бумаги.

После стерилизации питательные среды оставляют для охлаждения при комнатной температуре. При необходимости розлива в чашки Петри среды охлаждают до температуры (50-60) °С.

Температура сред, хранящихся в холодильнике, перед посевом должна быть доведена до комнатной.

5.2. Питательный бульон

5.2.1. Готовят из сухого препарата промышленного производства по способу, указанному на этикетке.

5.2.2. Питательный бульон (десятикратный) для колифагов готовят путем увеличения в 10 раз навески сухого препарата, указанной на этикетке.

5.3. Питательный агар

5.3.1. Готовят из сухого препарата промышленного производства по способу, указанному на этикетке.

5.3.2. Питательный агар для определения колифагов прямым методом готовят, увеличивая навеску сухого препарата в 2 раза от прописи.

5.3.3. Питательный агар запрещается выдерживать в расплавленном состоянии более 8 ч. Оставшийся неиспользованным агар повторному расплавлению не подлежит.

5.3.4. Полужидкий питательный агар готовят следующим образом: сухой питательный бульон (15 г) и агар микробиологический (3 г) растворить при нагревании в 1000 мл дистиллированной воды. Довести рН до 7,0-7,2, разлить в пробирки и стерилизовать автоклавированием при 121 °С в течение 15 мин.

5.3.5. Питательный агар со стрептомицином готовят из расчета содержания 100 мкг стрептомицина на 1 мл питательного агара, приготовленного по стандартной прописи. Стерильно на стерильной дистиллированной воде готовят раствор стрептомицина в концентрации 10 мг на 1 мл. В готовый питательный агар, отмеренный по объему и остуженный до температуры (45-49) °С, вносят приготовленный стерильный раствор стрептомицина из расчета 0,1 мл на 10 мл питательного агара. Разливают в пробирки для приготовления скошенного агара. Повторное расплавление питательной среды со стрептомицином запрещается.

5.4. Фуксин-сульфитная среда Эндо

5.4.1. Основная модификация

Готовят из сухого препарата по способу, указанному на этикетке. Если на поверхности среды заметны следы влаги, чашки перед посевом необходимо подсушить. Срок хранения чашек со средой не более 2-3 суток в темноте, если производителем не оговорены другие сроки.

5.4.2. Повышение дифференцирующих свойств среды

Для повышения дифференцирующих свойств среды в готовую и охлажденную до (60-70) °С среду перед разливкой в чашки допускается прибавлять на 100 мл среды 0,2 мл 5 %-ного спиртового раствора основного фуксина. Срок хранения раствора фуксина — не более 1 мес.

5.4.3. Модификация среды с добавлением розоловой кислоты

В случаях, когда мембранные фильтры зарастают микрофлорой, не относящейся к бактериям кишечной группы, помимо фуксина, допускается добавление на 100 мл среды Эндо 0,2 мл 5 %-ного спиртового раствора розоловой кислоты. Срок хранения раствора розоловой кислоты -не более 1 мес.

Модификацию среды Эндо с добавлением розоловой кислоты используют только при работе методом мембранной фильтрации.

5.5. Лактозо-пептонная среда

10 г пептона, 5 г натрия хлористого, 5 г лактозы растворяют при нагревании в 1 л дистиллированной воды. После растворения ингредиентов устанавливают рН 7,4-7,6, разливают по 10 мл в пробирки, стерилизуют при (112 ±2) °С 12 мин.

Для приготовления концентрированной лактозо-пептонной среды все ингредиенты, кроме воды, увеличивают в 10 раз, разливают по 1 мл в пробирки и по 10 мл во флаконы.

5.6. Питательные среды для подтверждения способности ферментировать лактозу до кислоты и газа

5.6.1. Полужидкая среда с лактозой из сухого препарата

Готовят по способу, указанному на этикетке.

Срок хранения — не более 2 недель при комнатной температуре.

Посев производят уколом до дна пробирки. При образовании кислоты цвет питательной среды изменяется в соответствии с использованным индикатором. При газообразовании газ скапливается или по уколу, или на поверхности, или в толще среды появляются разрывы. При инкубации посевов более 5 ч газ может улетучиться. В таких случаях на присутствие газа указывают оставшиеся в толще среды “карманы” -потемнения среды на месте бывшего пузырька газа.

5.6.2. Полужидкая среда с лактозой

Готовят при отсутствии сухого препарата.

В 1 л дистиллированной воды растворяют 10 г пептона, 5 г натрия хлористого, (4-5) г агар-агара, доводят до кипения, устанавливают рН 7,2-7,4, добавляют 1 мл 1,6%-ного спиртового раствора бромтимолового синего. Стерилизуют при (120±2)°С 20 мин. В расплавленную среду вносят 5 г лактозы, нагревают до кипения, разливают в стерильные пробирки на; высоту (3-5) см и стерилизуют при (112 ± 2) °С 12 мин. Срок хранения — не более 2 недель при комнатной температуре.

Правильно приготовленная среда зеленого цвета с синеватым оттенком (цвет, бутылочного стекла). При образовании кислоты цвет среды изменяется на желтый.

5.6.3. Лактозо-пептонная среда

Готовят по п. 5.5 с добавлением 1 мл 1,6%-ного спиртового раствора бромтимолового синего на 1 л и разливают по (3-5) мл в пробирки с поплавком.

Готовят по прописи завода-изготовителя.

5.7. Реактивы для оксидазного теста

1 %-ный водный раствор тетраметил-п-фенилендиамина гидрохлорид. Готовят перед употреблением.

Реактив № 1. 1 %-ный спиртовой раствор a -нафтола.

Реактив № 2. 1 %-ный водный раствор фенилендиаминового соединения.

Растворы сохраняют в темных флаконах с притертыми пробками: 1 — до одного месяца, 2 — до одной недели. Перед употреблением к трем частям первого раствора добавляют семь частей второго раствора.

Могут быть использованы коммерческие тест-системы для постановки оксидазного теста (СИБ-оксидаза или аналоги).

Перед работой с каждой серией проб реактивы или тест-системы на оксидазу следует испытывать с тест-культурами микроорганизмов, дающих положительную (Ps. aeruginosa, Ps. fluorescens) и отрицательную оксидазную реакцию (Е. со li).

5.8. Железо-сульфитный агар

В 1000 мл стерильного расплавленного питательного агара (по п. 5.4) добавляют 10 г глюкозы, нагревают до растворения, разливают мерно во флаконы, автоклавируют при (112 ± 2) °С 12 мин (основная среда).

20 %-ный раствор сульфита натрия (Na₂SO₃) и 8 %-ный раствор железа серно-кислого закисного ( FеSO4 ) или железа хлористого (FeCl2) готовят непосредственно перед употреблением в стерильной посуде на стерильной дистиллированной воде. Раствор сульфита натрия нагревают до полного растворения. Перед выполнением анализа в 100 мл расплавленной основной среды вносят 5 мл 20 %-ного раствора сульфита натрия, перемешивают, затем вносят 1 мл 8 %-ного раствора сернокислого железа, перемешивают и стерильно разливают в пробирки высоким столбиком (12-15) см для работы методом мембранной фильтрации или во флаконы для работы методом прямого посева.

5.9. Реактивы для окраски препаратов по Граму

5.9.1. Карболовый раствор генциана фиолетового готовят следующим образом: 1 г генциана фиолетового, 10 мл ректификованного этилового спирта, 5 г фенола растирают в ступке, добавляя 100 мл дистиллированной воды.

5.9.2. Раствор Люголя готовят следующим образом: 1 г йода, 2 г йодистого калия растворяют в 300 мл дистиллированной воды. Хранить во флаконе из темного стекла.

5.9.3. Фуксин Циля готовят следующим образом: 1 г основного фуксина, 10 мл спирта этилового ректификованного, 54 г фенола растирают в ступке, добавляя 100 мл дистиллированной воды.

Источник

ГК «Униконс»

Продвижение и реализация комплексных пищевых добавок, антисептиков и др. продукции.

«Антисептики Септоцил»

Септоцил. Бытовая химия, антисептики.

«Петритест»

Микробиологические экспресс-тесты. Первые результаты уже через 4 часа.

«АльтерСтарт»

Закваски, стартовые культуры. Изготовление любых заквасок для любых целей.

• Вы здесь:
• Библиотека технолога
• ГОСТы, документы
• ГОСТ 7702.2.0-2016 — ПРОДУКТЫ УБОЯ ПТИЦЫ, ПОЛУФАБРИКАТЫ ИЗ МЯСА ПТИЦЫ И ОБЪЕКТЫ ОКРУЖАЮЩЕЙ ПРОИЗВОДСТВЕННОЙ СРЕДЫ. Методы отбора проб и подготовка к микробиологическим исследованиям

Бульоны, агары, среды

11.3.37 Мясная вода
Охлажденную говядину освобождают от костей, сухожилий, жира, измельчают. 1,0 кг полученного фарша заливают двух- или четырехкратным количеством питьевой воды (по массе), медленно нагревают до кипения и кипятят в течение 1,5 ч, постоянно помешивая и удаляя накипь. После кипячения мясную воду остужают, удаляют жир. Жидкость фильтруют через вату, затем через фильтровальную бумагу до полной прозрачности. Фильтрат измеряют и доливают до первоначального объема кипяченой питьевой водой, затем разливают по флаконам и стерилизуют при температуре (121 ± 1) °С в течение 30 мин.

11.3.38 Мясо-пептонный бульон, мясо-пептонный бульон с глюкозой
10 г пептона бактериологического, 5 г натрия хлористого (хлорид) добавляют к 1000 см3 мясной воды (см. 11.3.37) устанавливают рН (7,0-7,2) ед. рН, кипятят. Жидкость фильтруют через фильтро¬вальную бумагу, разливают по бутылям.
Стерилизуют при температуре (121 ± 1) °С в течение 20 мин.
Мясо-пептонный бульон с глюкозой: к 1000 см3 мясо-пептонного бульона перед стерилизацией добавляют 1,0 или 10,0 г глюкозы, устанавливают рН (7,0-7,2) ед. рН и стерилизуют при температуре (121 ± 1) °С в течение 20 мин.

11.3.39 Амино-пептидный бульон
В 250 см3 жидкого аминопептида добавляют 5,5 г натрия хлористого (хлорид), 750 см3 дистиллированной воды, перемешивают, стерилизуют в течение 20 мин при температуре (121 ± 1) °С.
Срок хранения при температуре (4-8) °С не ограничен.

11.3.40 Пептонная вода
В 1000 см3 дистиллированной воды при медленном нагревании растворяют 1 г пептона бактериологического. Полученный раствор при необходимости фильтруют через бумажный фильтр, устанавли¬вают рН (7,0-7,2) ед. рН и стерилизуют при температуре (121 ± 1) °С в течение 30 мин.

11.3.41 Забуференная пептонная вода
В 1000 см3 воды дистиллированной при медленном нагревании растворяют 10 г пептона и 5 г натрия хлористого (хлорид), 9 г фосфорнокислого двузамещенного натрия, 1.5 г фосфорнокислого однозамещенного калия, устанавливают рН (7,0-7.2) ед. рН и стерилизуют при температуре (121 ± 1) °С в течение 15 мин.

11.3.42 Пептонно-солевой раствор
В 1000 см3 дистиллированной воды при медленном нагревании растворяют 1 г пептона бактериологического, 8,5 г хлористого натрия (хлорид). Полученный раствор при необходимости фильтруют через бумажный фильтр, устанавливают рН (7,0-7,2) ед. рН.
Стерилизуют при температуре (121 ± 1) °С в течение 30 мин.
Раствор хранят в темном месте при температуре (4 ± 2) °С не более одного месяца.

11.3.43 Голодный агар
2 г агара микробиологического растворяют в 98 см3 дистиллированной воды при нагревании и постоянном помешивании до полного растворения, устанавливают рН (7,0-7,2) ед. рН.
Стерилизуют в течение 20 мин при температуре (121 ± 1) °С.

11.3.44 Мясо-пептонный агар
В 1000 см3 мясо-пептонного бульона (11.3.38) добавляют 15-20 г агара микробиологического и кипятят на слабом огне при постоянном помешивании до полного растворения агара, устанавливают рН (7,0- 7,2) ед. рН.
Стерилизуют в течение 20 мин при температуре (121 ± 1) °С.

11.3.45 Мясо-пептонный агар с глюкозой
К 1000 см3 мясо-пептонного агара (11.4.44) перед стерилизацией добавляют 1 или 10 г глюкозы, устанавливают рН (7,0-7,2) ед. рН.
Стерилизуют в течение 20 мин при температуре (121 ± 1) °С.

11.3.46 Мясо-пептонный агар с глюкозой и дрожжевым экстрактом
К 1000 см3 стерильного расплавленного и охлажденного до температуры 50 °С мясо-пептонного агара с глюкозой (11.3.45) перед применением асептически добавляют 2 г дрожжевого экстракта (11.3.23).

11.3.47 Среда Кесслера (с лактозой)
10 г пептона бактериологического, 5 г сухой желчи или 50 см3 натуральной стерильной желчи, 2,5 г лактозы, 0,01 г генциан фиолетового добавляют в 1000 см3 дистиллированной воды. Тщательно перемешивают, кипятят в течение 20-30 мин. Фильтруют через ватно-марлевый фильтр, устанавливают рН таким образом, чтобы после стерилизации он составлял (7,3 ± 0,2) ед. рН при температуре (25 ± 1) :°С. Разливают в пробирки с поплавками (трубки Дархема) дном вверх.
Стерилизуют в течение 20 мин при температуре (114 ± 1) °С. Если в поплавках остался воздух, среду не используют. Цвет готовой среды фиолетовый.
Срок хранения – не более 14 сут при температуре (4 ± 1) °С.

11.3.48 Среда Хейфеца (с лактозой)
10 г пептона бактериологического, 5 г натрия хлористого (хлорида), 5 г лактозы растворяют в 1000 см3 дистиллированной воды, устанавливают рН (7,4-7,6) ед. рН, нагревают до кипения, фильтру¬ют, добавляют 1 см3 5,0 %-ного спиртового раствора розоловой кислоты (11.3.8) и 2,5 см3 0,1 %-ного водного раствора метиленового синего (голубого) (11.3.9). Среду разливают по 10 см3 в стерильные пробирки с поплавками (трубки Дархема). Стерилизуют при температуре (112 ± 1) °С в течение 20 мин. Цвет среды красно-фиолетовый. Если в поплавках остался воздух, среду не используют.
Срок хранения среды – не более 14 сут при температуре (4 ± 2) °С.

11.3.49 Среда с углеводом (маннитом или мальтозой) и феноловым красным
К 1000 см3 стерильного, расплавленного и охлажденного до (80 ± 2) °С питательного или мясо-пептонного агара (11.3.44) добавляют 10 г углеводов (маннита или мальтозы) (предварительно углеводы растворяют в небольшом объеме стерильной дистиллированной воды) и 52 см3 1,6 %-ного водного раствора фенолового красного (11.3.12). Смесь перемешивают, при необходимости еще раз расплавляют готовую среду, разливают в стерильные чашки Петри и подсушивают. Среду готовят с соблюдением стерильности.
Среда пурпурно-красного цвета.
Срок хранения среды — не более 30 сут при температуре (4 ± 2) °С.

11.3.50 Среды Гисса с углеводами с индикатором Андреде
К 1000 см3 дистиллированной воды прибавляют 10 г пептона сухою ферментативного для бак¬териологических целей, 5,0 г натрия хлористого (хлорид). Пептон и соль растворяют при нагревании воды в течение нескольких минут. Фильтруют через бумажный фильтр до прозрачности раствора, устанавливают рН (7,1 ± 0,1) ед. рН, прибавляют 10 г одною из необходимых углеводов (лактоза, глюкоза, сахароза, манит и т.д.) и 10 см3 раствора индикатора Андреде (11.3.11). Среду разливают по 10,0 см3 в стерильные пробирки с поплавками (трубки Дархема) дном вверх и стерилизуют в течение 20 мин при температуре (112 ± 1) °С.
Если в поплавках остался воздух, среду не используют.
Среды Гисса с индикатором Андреде должны быть бесцветны или соломенно-желтого цвета без розового оттенка.
Срок хранения среды – не более 30 сут при температуре (4 ± 2)°С.

11.3.51 Среда Ресселя
К 1000 см3 2,0 %-ного питательного или мясо-пептонного агара (11.3.44) прибавляют 10 г лактозы, 1 г глюкозы и 10 см3 раствора индикатора Андреде (11.3.11).
Среду разливают по 10 см3 в пробирки, стерилизуют при температуре (112 ± 1) °С в течение 20 мин и скашивают так, чтобы на 2,0-3,0 см от дна пробирки агар оставайся в виде столбика.
Готовая среда бледно-розовою цвета.
Срок хранения среды — не более 30 сут при температуре (4 ± 2) °С.

11.3.52 Среда Мюллера
2,5 г стерильного кальция углекислого помещают в стерильный флакон, добавляют 90 см3 бу¬льона Хоттингера, приготовленного по ГОСТ 10444.1, стерилизуют в течение 30 мин при температуре (121 ± 1) °С, рН готовой среды (7,2-7.4) ед. рН.
Срок хранения среды – не более 30 сут при температуре (4 ± 2) °С.
Перед использованием с соблюдением правил асептики добавляют 2 см3 раствора Люголя (11.3.4), и 10 см3 раствора серноватистокислого натрия (тиосульфата) (11.3.5). Готовая среда стерилизации не подлежит.

11.3.53 Среда Кауфмана
В 100 см3 стерильной среды Мюллера (11.3.52), с соблюдением правил асептики, добавляют 1 см3 раствора бриллиантового зеленого массовой концентрацией 0,001 % (11.3.14) и 5 см3 стерильной на¬туральной говяжьей желчи, перемешивают. Среда стерилизации не подлежит.
Срок хранения среды – не более семи суток при температуре (4 ± 2) °С.

11.3.54 Селенитовая среда
Основа среды: 5 г пептона сухого ферментативного для бактериологических целей или триптона, 4 г лактозы, 7 г натрия фосфорнокислого двузамещенного безводного и 3 г натрия фосфорнокислого однозамещенного при нагревании растворяют в 1000 см3 дистиллированной воды.
Устанавливают рН (7,0 ± 0,1) ед. рН путем изменения соотношения солей: натрия фосфорнокислого однозамещенного и натрия фосфорнокислого двузамещенного. Разливают в колбы, стерилизуют в течение 30 мин при температуре (112 ± 1) °С.
Срок хранения среды – не более 2 мес при температуре (4 ± 2) :С.
Для приготовления основы среды допускается вместо пептона или триптона и дистиллированной воды использовать амино-пептидный бульон (11.3.39).
Перед использованием к 960 см3 основы среды добавляют 40 см3 раствора натрия кислого селенистокислого (11.3.21).
Готовую смесь не стерилизуют. Хранению не подлежит.

11.3.55 Селенитово-цистиновая среда
В 1000 см3 готовой селенитовой среды (11.3.54) асептически добавляют 10 см3 раствора L-цистина (11.3.22). Устанавливают рН (7,0±0,1) ед. рН.
Среда хранению не подлежит.

11.3.56 Питательная среда для выявления сальмонелл
Состав питательной среды: 4,3 г питательного агара, 0,3 г калия фосфорнокислого двузамещен¬ного 3-водного, 1,5 г лактозы. 1,5 г сахарозы, 10 см3 стерильной натуральной желчи крупного рогатого скота (или 1 г сухой стерильной желчи), 0,3 см3 раствора малахитового зеленого массовой концентра¬цией 1,0 % (11.3.19), 0,75 см3 раствора трифенилтетразолиума хлористого массовой концентрацией 0,4 % (11.3.20), ингредиенты которого растворяют в 80 см3 дистиллированной воды при подогреве, последовательно, после полного растворения предыдущего ингредиента, доводят до кипения, долива¬ют дистиллированной водой до 100 см3, устанавливают рН (7,1 ± 0,1) ед. рН. Стерилизуют в течение 15 мин при температуре (100 ± 1) °С.

11.3.57 Магниевая среда или хлористомагниевая среда.
Среду готовят из трех растворов.
Раствор I:
4.2 г пептона сухого ферментативного для бактериологических целей, 7,15 г натрия хлористо¬го (хлорид), 1,48 г калия фосфорнокислого двузамещенного безводного, 9 см3 дрожжевого экстракта (11.3.23) (или дрожжевого диализата) растворяют в 890 см3 дистиллированной воды.
Раствор II:
35,7 г магния хлорида растворяют в 90 см3 дистиллированной воды.
Раствор III:
0.9 см3 0,5 %-ного водного раствора бриллиантового зеленого (11.3.15).
Все три приготовленных раствора смешивают, разливают в колбы, флаконы, пробирки. Стерили¬зуют при температуре (112 ± 1) °С в течение 30 мин.
Срок хранения готовой среды – не более 14 сут при температуре (4 ± 1) °С.

11.3.58 Агар трехсахарный по Олькеницкому
25 г сухого питательною агара, 10 г лактозы. 10 г сахарозы, 1 г глюкозы. 0,2 г железа (II) аммония сульфат (соль Мора), 10 г мочевины, 4 см3 0,4 %-ного раствора фенолового красного (11.3.13) растворяют в 1000 см3 дистиллированной воды.
Предварительно соли растворяют в небольшом объеме дистиллированной воды. Углеводы и мо¬чевину также растворяют в небольших объемах воды при подогревании в водяной бане.
Сухой питательный агар расплавляют при нагревании в оставшемся объеме воды.
Все ингредиенты соединяют, перемешивают с расплавленным агаром, фильтруют через марле¬вый фильтр, устанавливают рН (7,2-7,4) ед. рН, добавляют индикатор и разливают в пробирки по 6-7 см3.
Среду стерилизуют текучим паром три дня подряд по 20 мин при температуре (115 ± 1) °С и ска¬шивают, оставляя столбик 2-2,5 см.
Готовая среда бледно-розовою цвета.
Срок хранения среды – не более 5 сут при температуре (4 ± 1) °С.

11.3.59 Агар с мочевиной (Кристенсена)
Основа среды: 1 г пептона, 1 г глюкозы, 5 г натрия хлористого (хлорид). 2 г калия фосфорнокислого двузамещенного, 0,012 г фенолового красного, 15 агара растворяют в 1000 см3 кипящей дистиллированной воды. Устанавливают рН таким образом, чтобы после стерилизации составлял (6,9 ± 0,1) ед. рН при температуре (25 ± 1) °С. Стерилизуют в течение 20 мин при температуре (121 ±1) °С.
Срок хранения среды – не более 5 сут при температуре (4 ± 1) °С.
Перед употреблением асептически к 1000 см3 основы среды добавляют 50 см3 раствора мочеви¬ны массовой концентрацией 20,0 % (11.3.33).

11.3.60 Среда Кларка для реакции Фогес-Проскауэра
7 г бактериологического пептона, 5 г гидрофосфата калия безводною, 5 г глюкозы растворяют в 1000 см3 дистиллированной воды. Кипятят в течение 2-3 мин, фильтруют через ватно-марлевый или бумажный фильтр, устанавливают рН (6,9-7,0) ед. рН. разливают в пробирки, стерилизуют в течение 20 мин при температуре (115 ± 1) °С.
Срок хранения среды — не более 28 сут при температуре (4 ± 1) °С.

11.3.61 Среда для расщепления фенилаланина
В 1000 см3 дистиллированной воды при нагревании растворяют 15 см3 дрожжевого экстракта (11.3.23), 2,0 г DL-фенилаланина или 1 г L-фенилаланина, 1 г фосфорнокислого двузамещенного на¬трия. 5 г хлористого натрия (хлорид), 12 г агара.
По 5 см3 среды разливают в пробирки, стерилизуют в течение 10 мин при температуре (121 ± 1) °С и дают застыть в наклонном положении.
Срок хранения среды – не более 5 сут при температуре (4 ± 1) °С.

11.3.62 Среды с аминокислотами (лизином, орнитином, аргинином)
5 годной из L-аминокислот или 10 г одной из DL-аминокислот, 3 г дрожжевою экстракта (11.3.23), 1 г глюкозы, 0,012 г бромкрезолового пурпурного растворяют в 1000 см3 кипящей дистиллированной воды. Устанавливают рН таким образом, чтобы после стерилизации он составлял (6,8 ± 0,1) ед. рН при температуре (25 ± 1) °С.
Среды разливают в агглютинационные пробирки. Стерилизуют в течение 10 мин при температуре (121 ± 1) °С или в течение 30 мин при температуре (110 ± 1) °С.
Цвет сред – светло-фиолетовый. Хранению среды не подлежат.

11.3.63 Агар полужидкий
3 г мясного экстракта, 5 г пептона бактериологического, 4-9 г агара микробиологического раство¬ряют при нагревании до кипения в 1000 см3 дистиллированной воды. Устанавливают рН таким образом, чтобы после стерилизации он составлял (7,0 ± 0,1) ед. рН при температуре (25 ± 1) °С. Разливают в пробирки и стерилизуют в течение 20 мин при температуре (121 ± 1) °С.
Срок хранения – не более 28 сут при температуре (4 ± 1) °С.

11.3.64 Солевой бульон
К 100 см3 мясопептонного бульона (11.3.38) добавляют 6,5 г натрия хлористого. Стерилизуют в течение 20 мин при температуре (121 ± 1) °С.
Срок хранения — не более 28 сут при температуре (4 ± 1) °С.

11.3.65 Агар желточно-солевой
К 1000 см3 солевого бульона (11.3.64) добавляют 20 г микробиологического агара, расплавляют на водяной бане, при необходимости фильтруют через ватно-марлевый фильтр, разливают мерным цилиндром по 100 см3 в колбы вместимостью 250 см3 и стерилизуют при температуре (121 ± 1) °С а течение 30 мин. Получают солевой агар. Вместо солевого бульона можно использовать как основу мясо-пептонный бульон (11.3.38), бульон Хоттингера по ГОСТ 10444.1, добавляя 65 г натрия хлористого.
К 1000 см3 стерильного, расплавленного и остуженного до температуры (45 ± 1) °С солевого агара добавляют 200 см3 желточной эмульсии (11.3.24). После тщательного размешивания, желточно-солевой агар разливают в стерильные чашки Петри по 20-25 см3.
Срок хранения — не более 5 сут при температуре (4 ± 1) °С.

11.3.66 Агар яично-желточный азидный
С 1000 см3 дистиллированной воды растворяют при нагревании 10 г пептона, 3 г натрия хлористо¬го, 0,2 г натрия фосфорнокислого двузамещенного, 15 г агара микробиологического, 5,5 г мясного экстракта. При отсутствии мясного экстракта используют мясную воду (11.3.37), при этом все компоненты растворяют в 1000 см3 мясной воды. Устанавливают рН (7,6 ±0,1) ед. рН. Стерилизуют в течение 30 мин при температуре (121 ± 1)°С. охлаждают до температуры 50 °С — 60 °С, добавляют 0,15 г азида натрия, смешивают, вновь стерилизуют в течение 30 мин при температуре (121 ± 1) °С. После охлаждения до температуры (50 ± 1) °С добавляют 150 см3 желточной эмульсии (11.3.24), смешивают и разливают в чашки Петри.
Срок хранения – не более 5 сут при температуре (4 ± 1) °С.

11.3.67 Желатиновая среда
10-15 г измельченного пищевою желатина добавляют в 100 см3 мясо-пептонного бульона (11.3.38), растворяют при помешивании и медленном нагревании в водяной бане при температуре 40 °С — 50 °С. После полного растворения устанавливают рН (7,1-7,3) ед. рН. Фильтруют через ватно-марлевый или бумажный фильтр, разливают в пробирки по 5-7 см3, стерилизуют текучим паром один раз в день по 20 мин два дня подряд.
После стерилизации среду охлаждают при строго вертикальном положении пробирок.

11.3.68 Среда Вильсон-Блера (агаризованная), измененная для анаэробов
К 1000 см3 стерильно расплавленного и охлажденного до температуры (80 ± 1) °С питательно¬го агара добавляют 10 см3 раствора натрия сернистокислого (сульфита) массовой концентрацией 100 г/дм3, предварительно приготовленного следующим образом: 100 г натрия сернокислого (сульфита) помещают в стерильную колбу объемом 1000 см3 и добавляют до метки 1000 см3 стерильную дистил¬лированную воду; и 1 см3 раствора железа (III) аммония сульфата массовой концентрацией 50 г/дм3, предварительно приготовленного следующим образом: 50 г железа (III) аммония сульфата помещают в стерильную колбу объемом 1000 см3 и добавляют до метки 1000 см3 стерильную дистиллированную воду.
Срок хранения среды в защищенном от света месте при температуре (4 ± 1) °С – не более 7 сут.
Допускается приготовление среды Вильсон-Блера следующим образом: к 100 см3 расплавленно¬го питательного агара добавляют 4 см3 раствора натрия сернистокислого (сульфита) массовой концен¬трацией 100 г/дм3 и 1 см3 раствора железа треххлористого 6-водного массовой концентрацией 80 г/дм3, предварительно приготовленного следующим образом: 80 г железа треххлористого 6-водного помеща¬ют в стерильную колбу объемом 1000 см3 и добавляют до метки 1000 см3 стерильную дистиллирован¬ную воду.
Готовая среда хранению не подлежит.

11.3.69 Среда железосульфитная
К 1000 см3 дистиллированной воды добавляют 10 г триптона. 0,5 г сульфита натрия, 0,5 г железа (III) цитрата, 15 г агара (при приготовлении агаризованной среды) или 1,5 г агара (при приготовлении вязкой среды). Компоненты растворяют при нагревании, после чего охлаждают до температуры (50 ± 5) °С Устанавливают рН (7,1 ± 0,1) ед. рН. Среду разливают в пробирки по 10-12 см3 и стерилизуют в течение 15 мин при температуре (121 ± 1) °С.
Триптон может быть заменен на равноценную навеску сухого панкреатического гидролизата казе¬ина или на десятикратный объем жидкого панкреатического гидролизата казеина. Триптон и 1000 см3 дистиллированной воды могут быть заменены на 1000 см3 мясной воды (11.3.37).

11.3.70 Среда Китт-Тароцци
Среду Китт-Тароцци готовят по ГОСТ 10444.1 со следующим дополнением: перед употреблением среду регенерируют. Для этого пробирки со средой помещают в водяную баню и прогревают в течение 20 мин при температуре (100 ± 1) °С. Затем пробирки со средой быстро охлаждают водопроводной водой.

11.3.71 Селенитовая среда Лейфсона
Для приготовления среды готовят два раствора: А и Б.
Раствор А: 5 г пептона бактериологического, 7 г натрия фосфорнокислого двузамещенного безводного, 3 г натрия фосфорнокислого однозамещенного, 4 г химически чистой лактозы. 1000 см3 дис¬тиллированной воды, рН (7,0 ± 0,1) ед. рН, смешивают, разливают в стерильную посуду по 225 см3 и стерилизуют текучим паром один раз в день по 30 мин два дня подряд или при температуре (112 ± 1) °С в течение 30 мин однократно.
Раствор Б: раствор натрия кислого селенистокислого с массовой концентрацией 10 % (11.3.21), (готовят на стерильной дистиллированной воде перед употреблением).
Перед началом работы к 225 см3 раствора А стерильно добавляют 9 см3 раствора Б.

11.3.72 Приготовление чашек со средой
Колбу с приготовленной и стерилизованной питательной средой после прогрева среды помещают в водяную баню при температуре от 44 °С до 47 °С. перемешивают, разливают в стерильные чашки Петри, дают затвердеть и подсушивают с открытой крышкой, соблюдая правила стерильности, пока по¬верхность среды не будет сухой.
Перед использованием среду в чашках предпочтительно с открытой крышкой и поверхностью сре¬ды вниз подсушивают в шкафу с температурой от 37 °С до 55 °С до тех пор, пока поверхность среды не будет сухой.
Срок хранения чашки со средой при температуре (4 ± 1) °С – не более 5 сут.

11.3.73 Среда из сухого питательного агара: готовят по инструкции изготовителя.

11.3.74 Среда из сухого питательного агара с глюкозой
В 975 см3 сухого питательного агара (11.3.74) непосредственно перед применением асептически добавляют 25 см3 стерильного раствора глюкозы массовой концентрации 200 г/дм3, предварительно приготовленного следующим образом: 200 г глюкозы помещают в стерильную колбу объемом 1000 см3 и добавляют до метки 1000 см3 стерильную дистиллированную воду.

11.3.75 Пептонно-буферная среда
10 г пептона, 0,45 г калия фосфорнокислого однозамещенного, 5,34 г натрия фосфорнокислого двузамещенного растворяют в 1000 см3 кипящей дистиллированной воды. Разливают в колбы вместимостью 500 см3 по 225 см3 среды. Стерилизуют (20 ± 1) мин при температуре (121 ± 1) °С, рН среды при температуре (25 ± 1) °С составляет (7,0 ± 0,1) ед. рН. Хранение при комнатной температуре не более 14 сут.

11.3.76 Бульон лактозный с бриллиантовым зеленым и желчью
10 г пептона, 10 г лактозы, 20 г сухой говяжьей желчи или 200 см3 натуральной желчи, 2,66 см3 раствора бриллиантового зеленого, приготовленного по 11.3.15, добавляют к 1000 см3 дистиллированной воды, перемешивают, нагревают на слабом огне до кипения, фильтруют через ватно-марлевый фильтр, охлаждают до температуры (50 ± 1) °С, устанавливают рН таким образом, чтобы после стери¬лизации он составил (7,2 ± 0,1) ед. рН при температуре (25 ± 1) °С Разливают по 10 см3 в пробирки с поплавками, стерилизуют (15 ± 1) мин при температуре (121 ± 1) °С.
Хранят не более 14 сут при температуре (4 ± 1) °С.

11.3.77 Приготовление пробирок со скошенным столбиком среды
11.3.77.1 Приготовленную стерильную питательную среду (например, при приготовлении скошенного столбика агара с цитратом Симмонса или скошенного столбика мясо-пептонного агара) после прогрева в водяной бане при температуре от 44 °С до 47 °С перемешивают и по 5-7 см3 разливают, соблюдая правила стерильности, в стерильные пробирки, скашивают, оставляя столбик высотой 2,0-2,5 см, после чего среде дают затвердеть.
Срок хранения пробирок со средой при температуре (4 ± 1) °С – не более 5 сут.
11.3.77.2 Приготовленную нестерильную питательную среду (например, при приготовлении скошенного столбика мясо-пептонного агара) разливают в пробирки по 5-7 см3, пробирки со средой стерилизуют и после остывания среды до температуры от 44 °С до 47 °С скашивают, оставляя столбик высотой 2,0-2,5 см. после чего среде дают затвердеть.
Срок хранения пробирок со средой при температуре (4 ± 1) °С – не более 1 мес.

11.3.78 Приготовление сухих (дегидратированных) питательных сред проводят по инструкции на этикетке упаковки.
11.3.79 Приготовленные растворы реактивов, если не установлено иначе, хранят во флаконах из темного стекла с притертой пробкой в холодильнике при температуре (4 ± 1) °С не более 3 мес или при температуре от 18 °С до 23 °С – не более 1 мес.
11.3.80 Приготовленные и стерилизованные питательные среды, разлитые в колбы, пробирки, чашки Петри, если не установлено иначе, хранят в холодильнике при температуре (4 ± 1) °С не более 3 мес.
Перед использованием, если не установлено иначе, питательные среды доводят до температуры окружающей среды.
11.3.81 Контроль питательных сред – по ГОСТ ISO/ТS 11133-1.
11.3.82 Сроки и условия хранения питательных сред — по ГОСТ ISO/TS 11133-1.

УДК 579.678:006.354
МКС 67.120.20
Ключевые слова: мясо птицы, субпродукты и полуфабрикаты, питательные среды, методы отбора проб, подготовка проб, разбавители, акт отбора проб, транспортирование и хранение проб, микробиологические исследования

Источник