Приготовление индикаторов
1. Метиловый красный — 0,2%-ный раствор (метилрот; диметиламиноазобензол-о-карбоновая кислота). Реактив представляет собой блестящие темно-фиолетовые кристаллы или красно-бурый порошок. В воде нерастворим; растворим в спирте. Переход окраски от красной к желтой наступает в интервале pH 4,2-6,2.
0,2 г индикатора растворяют в 60 мл спирта и добавляют 40 мл воды.
2. Метиловый оранжевый — 0,1%-ный раствор (метилоранждиметиламиназобензол сульфонат натрия) — оранжево-желтый порошок или листочки. Нерастворим в спирте, легкорастворим в горячей воде.
Переход окраски от красной к желтой в интервале pH 3,0-4,4. 0,1 г индикатора растворяют в 100 мл воды.
3. Фенолфталеин — 1%-ный раствор. Мелкокристаллический порошок белого (или слегка кремового цвета) растворяется в спирте и нерастворим в воде. Переход окраски от бесцветной к красной в интервале pH 8,2-10,0. 1 г индикатора растворяют в 100 мл 96%-ного спирта.
4. Бромфеноловый синий — 0,1%-ный раствор (тетрабромфенолсульфофталеин) — мелкие, почти бесцветные или бледно-розовые кристаллы, плохо растворимые в воде; растворяются в этиловом спирте и в серном эфире. В растворах щелочей и аммиака растворяются с синим окрашиванием.
100 мг индикатора растирают в фарфоровой ступке с 1,5 мл 0,1 н. раствора едкого натра, постепенно прибавляют прокипяченную дистиллированную воду. В мерной колбе раствор доводят прокипяченной дистиллированной водой до 100 мл.
5. 10%-ный раствор хромовокислого калия (K2CrO4). 10 г реактива отвешивают с точностью до 0,01 г и растворяют в 90 мл дистиллированной воды.
6. 1%-ный раствор крахмала. 1 г растворимого крахмала растирают в ступке с небольшим количеством холодной воды, полученную кашицу выливают в 100 мл кипящей дистиллированной воды. Кипятят, пока раствор не станет прозрачным.
Источник
Как приготовить раствор фенолфталеина для определения кислотности молока
МОЛОКО И МОЛОЧНЫЕ ПРОДУКТЫ
Титриметрические методы определения кислотности
Milk and milk products.
Titrimetric methods of acidity determination
Дата введения 1994-01-01
1. РАЗРАБОТАН И ВНЕСЕН ТК по стандартизации 186 «Молоко и молочные продукты» и ТК по стандартизации 187 «Масло и сыр»
О.А.Гераймович; Е.А.Фетисов, канд. техн. наук; Р.В.Парамонова; В.П.Панов, канд. техн. наук; В.И.Еремина, канд. техн. наук; Н.В.Васильева
2. УТВЕРЖДЕН И ВВЕДЕН В ДЕЙСТВИЕ Постановлением Комитета стандартизации и метрологии СССР от 12.02.92 N 145
4. ССЫЛОЧНЫЕ НОРМАТИВНО-ТЕХНИЧЕСКИЕ ДОКУМЕНТЫ
Обозначение НТД, на который дана ссылка
Номер раздела, пункта
Государственная фармокопея СССР X
ВНЕСЕНА поправка, опубликованная в ИУС N 8, 2009 год
Поправка внесена изготовителем базы данных
Настоящий стандарт распространяется на молоко и молочные и молокосодержащие продукты и устанавливает следующие титриметрические методы определения кислотности: потенциометрический, с применением индикатора фенолфталеина; метод определения предельной кислотности молока.
Стандарт не распространяется на казеин и молочные консервы.
1. МЕТОДЫ ОТБОРА ПРОБ
Методы отбора проб молока и молочных и молокосодержащих продуктов и подготовка их к анализу по ГОСТ 13928 и ГОСТ 26809.
2. ПОТЕНЦИОМЕТРИЧЕСКИЙ МЕТОД
Метод применяется при возникновении разногласий.
Метод основан на нейтрализации кислот, содержащихся в продукте, раствором гидроокиси натрия до заранее заданного значения рН=8,9 с помощью блока автоматического титрования и индикации точки эквивалентности при помощи потенциометрического анализатора.
2.1. Аппаратура, материалы и реактивы
Анализатор потенциометрический с диапазоном измерения 4-10 ед. рН с ценой деления шкалы 0,05 ед. рН.
Блок автоматического титрования, аппаратурно совместимый с потенциометрическим титратором и имеющий дозатор раствора (бюретку) вместимостью не менее 5 см с ценой деления не более 0,05 см .
Весы лабораторные 4-го класса точности с наибольшим пределом взвешивания 200 г по ГОСТ 24104*.
* С 1 июля введен в действие ГОСТ 24104-2001 (здесь и далее).
Стаканы В-1-50 ТС, В-2-50 ТС, В-1-100 ТС, В-2-100 ТС по ГОСТ 25336.
Колбы 1-1000-2, 2-1000-2 по ГОСТ 1770.
Пипетки 2-2-10, 2-2-20 по ГОСТ 29169.
Цилиндры 1-50-1, 1-50-2, 3-50-1, 3-50-2 по ГОСТ 1770.
Ступка фарфоровая с пестиком по ГОСТ 9147.
Натрия гидроокись, стандарт-титр по ТУ 6-09-2540, раствор с молярной концентрацией 0,1 моль/дм .
Вода дистиллированная по ГОСТ 6709.
Допускается применение других средств измерения с метрологическими характеристиками и оборудования с техническими характеристиками не хуже, а также реактивов по качеству не ниже вышеуказанных.
2.2. Подготовка к измерениям
2.2.1. Подготовка приборов
Подключают блок автоматического титрования к анализатору согласно инструкции, прилагаемой к блоку. Затем подключают блок и анализатор к сети и прогревают их в течение 10 мин.
Заполняют дозатор блока автоматического титрования раствором гидроокиси натрия.
Согласно инструкции, прилагаемой к потенциометрическому анализатору, настраивают его на такой диапазон измерения рН, который включил бы в себя рН=8,9.
Согласно инструкции, прилагаемой к блоку автоматического титрования, настраивают его на точку эквивалентности, равную 8,9 ед. рН, и устанавливают на блоке значение рН=4,0, начиная с которого подача гидроокиси натрия должна вестись по каплям.
Устанавливают время выдержки после окончания титрования, равное 30 с.
2.3. Проведение измерений
2.3.1. Молоко, молокосодержащий продукт, молочный составной продукт, сливки, простокваша, ацидофилин, кефир, кумыс и другие кисломолочные продукты
2.3.1.1. В стакан вместимостью 50 см отмеривают 20 см дистиллированной воды и 10 см анализируемого продукта. Смесь тщательно перемешивают.
При анализе сливок и кисломолочных продуктов переносят остатки продукта из пипетки в стакан путем промывания пипетки полученной смесью 3-4 раза.
2.3.1.2. В стакан помещают стержень магнитной мешалки и устанавливают стакан на магнитную мешалку. Включают двигатель мешалки и погружают электроды потенциометрического анализатора и сливную трубку дозатора блока автоматического титрования в стакан с продуктом. Включают кнопку «Пуск» блока автоматического титрования, а спустя 2-3 с, кнопку «Выдержка». Раствор гидроокиси натрия при этом начинает поступать из дозатора блока в стакан с продуктом, нейтрализуя последний. По достижении точки эквивалентности (рН=8,9) и истечении времени выдержки (30 с) процесс нейтрализации автоматически прекращается, а на панели блока автоматического титрования зажигается сигнал «Конец». После этого отключают все кнопки. Проводят отсчет количества раствора гидроокиси натрия, затраченного на нейтрализацию.
2.3.2. Мороженое, сметана
В стакане взвешивают 5 г продукта. Тщательно перемешивают продукт стеклянной палочкой, постепенно добавляют к нему 30 см воды и перемешивают. Проводят измерения в соответствии с п.2.3.1.2.
2.3.3. Творог и творожные продукты
В фарфоровую ступку вносят 5 г продукта. Тщательно перемешивают и растирают продукт пестиком. Затем количественно переносят продукт в стакан вместимостью 100 см , смывая его небольшими порциями воды, нагретой до 35-40 °С. Общий объем воды равен 50 см . Затем смесь перемешивают и проводят измерения в соответствии с п.2.3.1.2.
2.4. Обработка результатов
2.4.1. Кислотность в градусах Тернера находят умножением объема, см , раствора гидроокиси натрия, затраченного на нейтрализацию определенного объема продукта, на следующие коэффициенты:
10 — для молока, молочного составного продукта, сливок, простокваши, ацидофильного молока, кефира, кумыса и других кисломолочных продуктов;
20 — для мороженого, сметаны, творога и творожных изделий.
2.4.2. Предел допускаемой погрешности результата измерений при принятой доверительной вероятности =0,95 составляет, °Т:
±0,8 — для молока, молочного составного продукта, сливок, мороженого;
±1,2 — для простокваши, ацидофильного молока, кефира, кумыса и других кисломолочных продуктов;
±2,3 — для сметаны;
±3,2 — для творога и творожных изделий.
Расхождение между двумя параллельными измерениями не должно превышать, °Т:
Источник
Текст книги «Экспертиза молочного сырья»
Автор книги: Ирина Трубина
Жанр: Педагогика, Наука и Образование
Текущая страница: 4 (всего у книги 6 страниц) [доступный отрывок для чтения: 2 страниц]
4.8. Методы определения кислотности молока
Кислотность молока выражается общей (титруемой) и активной (концентрацией водородных ионов).
– Титруемая кислотность обусловлена содержанием в молоке белков, кислых солей и растворенные газы. Титруемая кислотность определяется в градусах Тернера (°Т). Под градусами Тернера понимают количество миллилитров 0,1 н раствора гидроксида натрия, которое расходуется на нейтрализацию (титрование) 100 см 3 молока, разбавленного водой. Один градус Тернера соответствует 0,009 % молочной кислоты.
Кислотность свежего молока равна 16-18°Т. На белки приходится 45°Т, на кислые соли – 11-13°Т, на СО2 и органические кислоты – 1-3°Т.
Титруемая кислотность молока зависит от кормового рациона, породы, возраста, периода лактации, состояния здоровья и ряда других факторов.
– Активная кислотность характеризуется концентрацией свободных водородных ионов, выражается величиной рН и численно равна отрицательному десятичному логарифму концентрации водородных ионов (Н+). Величина рН цельного молока составляет в среднем 6,7. Она зависит от температуры, а также от жизнедеятельности присутствующих в молоке бактерий.
Молоко, содержащее слабые кислоты, соли, белки, диоксид углерода и другие компоненты является буферной системой, сохраняющей определенный рН при добавлении небольших количеств кислоты или щелочи, то есть молоко обладает определенной буферной емкостью.
По отношению к кислоте молоко обладает значительно большей буферной емкостью, чем по отношению к щелочи. Низкая буферная емкость при рН 8,3 используется в методе определения титруемой кислотности с индикатором фенолфталеином.
Техника определения титруемой кислотности молока
Метод заключается в титровании кислых солей, белков, органических кислот раствором щелочи в присутствии фенолфталеина.
Приборы и реактивы. Бюретка стеклянная на 25-50 см 3 , пипетки вместимостью 1, 10 и 20 см 3 , колбы конические на 150-200 см 3 , капельница для индикатора. Раствор гидроксида натрия молярной концентрацией 0,1 моль/дм 3 , 1 %-ный спиртовой раствор фенолфталеина, пентагидрат сульфата кобальта (CoSO4 • 5 H2O) – раствор с массовой концентрацией сульфата кобальта 25 г/дм 3 , вода дистиллированная.
Для приготовления эталона окраски в колбу для титрования отмеривают пипеткой 10 см 3 молока, 20 см 3 воды и 1 см 3 раствора сульфата кобальта. Эталон пригоден для работы в течение 8 ч при комнатной температуре.
Техника анализа. В коническую колбу вместимостью 150-200 см 3 отмеривают пипеткой 10 см 3 молока, 20 см 3 воды, 3 капли фенолфталеина, смесь тщательно перемешивают и титруют 0,1 н раствором гидроксида натрия до появления слабо-розового окрашивания, не исчезающего в течение 1 мин.
Кислотность молока в °Т равна количеству (в см 3 ) гидроксида натрия, пошедшего на титрование, умноженному на 10. Расхождение между параллельными определениями должно быть не более 1°Т.
Потенциометрическое определение рН молока
Приборы и реактивы. Анализатор потенциометрический для контроля рН молока, стаканы химические вместимостью 50 см 3 , стандартные буферные растворы для рН-метрии, вода дистиллированная, бумага фильтровальная лабораторная.
Техника анализа. Прибор включают в сеть за 10-15 мин до начала работы и проверяют его по буферным растворам. Для шкалы рН от 6 до 7 прибор настраивают по буферным растворам с величиной рН 6,88 и 4,00 при температуре раствора (20 ± 2)°С. Перед проверкой прибора электроды тщательно промывают дистиллированной водой, остатки воды с электродов удаляют с помощью фильтровальной бумаги.
В стеклянный стакан вместимостью 50-100 см 3 наливают (40 ± 5) см 3 буферного раствора, погружают в него электроды и через 10-15 с снимают показания прибора. Если показания прибора отличаются от значения рН буферного раствора более чем на 0,05, то прибор настраивают посредством регулятора (описание настройки в паспорте прибора). Проверка прибора по стандартному буферному раствору проводится ежедневно.
В стакан вместимостью 50-100 см 3 наливают (40 ± 5) см 3 молока и в него погружают электроды прибора, они не должны касаться стенок и дна стакана. Показания прибора снимают через 10-15 с после остановки стрелки. После окончания измерения электроды тщательно промывают и помещают в стакан с дистиллированной водой. При массовых измерениях рН молока остатки предыдущей пробы перед измерением рН следующей пробы удаляют с электродов путем легкого кругового помешивания, а промывают электроды дистиллированной водой через каждые 3-5 измерений. Для перевода величины рН в усредненные соотношения между рН и титруемой кислотностью молока используют данные, приведенные в таблице 4.6.
Таблица 4.6 – Усредненные соотношения между рН и титруемой кислотностью сырого молока
4.9. Методы определения технологических свойств молока 7 7
ГОСТ 25228-82 «Молоко и сливки. Метод определения термоустойчивости по алкогольной пробе»
К основным технологическим свойствам молока относят термоустойчивость (термостабильность) и сычужную свертываемость.
Молоко, полученное от здоровых животных, обладает термоустойчивостью – способностью при высоких температурах сохранять первоначальные свойства. Оно обладает стойкостью при нагревании до 100 °C в течение нескольких десятков минут. Термоустойчивость молока зависит, в основном, от устойчивости казеиновых мицелл. Основными факторами стабильности белковых молекул в растворе, как известно, являются величина поверхностного заряда и их степень гидрофильности. Следовательно, факторы, уменьшающие отрицательный заряд казеиновых мицелл и степень их гидратации, будут снижать термоустойчивость молока. К ним относятся изменение белково-солевого состава и рН молока.
Под сычужной свертываемостью молока понимают способность его белков коагулировать под действием внесенного сычужного фермента с образованием относительно плотного сгустка. Способность молока к сычужной свертываемости определяется в первую очередь содержанием в нем казеина и солей кальция – чем оно больше, тем выше скорость свертывания молока и плотность образующихся белковых сгустков, и наоборот.
Определение термоустойчивости молока
Метод основан на воздействии этилового спирта на белки молока и сливок, которые полностью или частично денатурируются при смешивании равных объемов молока или сливок со спиртом.
Приборы и реактивы. Ареометры для спирта, цилиндры мерные, стаканы химические вместимостью 50 и 100 см 3 , чашки Петри, пипетки вместимостью 2 см 3 , баня водяная, термометр стеклянный ртутный, спирт этиловый ректификованный или спирт этиловый синтетический технический, вода дистиллированная.
Подготовка к проведению анализа. Термоустойчивость по алкогольной пробе определяют при помощи водного раствора этилового спирта с объемной долей алкоголя 68,70,72, 75 и 80 %. Концентрацию приготовленных водных растворов этилового спирта проверяют по плотности с помощью ареометра. Плотность используемых для алкогольной пробы спиртов при 20 °C должна быть равна: 0,8904 г/см 3 для 68 %-ного спирта; 0,8855 г/см 3 для 70%ного спирта; 0,8805 г/см 3 для 72 %-ного спирта; 0,8728 г/см 3 для 75 %-ного спирта; 0,8593 г/см 3 для 80 %-ного спирта.
Молоко и сливки для определения термоустойчивости исследуют при температуре (20 ± 2)°С.
Техника анализа. В чистую чашку Петри наливают 2 см 3 исследуемого молока или сливок, приливают 2 см 3 этилового спирта требуемой концентрации. Смесь тщательно перемешивают круговыми движениями. Спустя 2 мин, наблюдают за изменением консистенции исследуемого сырья. Если на дне чашки Петри при стекании испытуемых молока или сливок не появились хлопья, считается, что они выдержали алкогольную пробу.
В зависимости от того, какой концентрации раствор этилового спирта не вызвал осаждения хлопьев в испытуемом молоке и сливках, их подразделяют на группы, указанные в таблице 4.7.
Таблица 4.7 – Определение группы термоустойчивости молока
4.10. Методы определения сычужной свертываемости молока8 8
ГОСТ Р 53359-2009 Молоко и продукты переработки молока. Методы микробиологического анализа
Определение характера микрофлоры сырого молока
Проба на брожение. Метод основан на способности некоторых микроорганизмов, присутствующих в молоке, свертывать его. В зависимости от времени свертывания и от характера образования сгустка оценивают состав микрофлоры молока и пригодности его для производства сыра.
Приборы и реактивы. Пробирки лабораторные, термостат (редуктазник) с температурой (38 ±1)°С, пробки ватные.
Техника анализа. В чисто вымытые просушенные пробирки наливают около 20 см 3 молока. Пробирки закрывают ватными пробками и ставят в термостат при температуре (38 ±1)°С на 24 ч.
Через 12 ч после помещения пробирок в термостат производят первичный осмотр проб. Если молоко не свернулось или лишь начинает свертываться, оно считается хорошим. Если свернулось и сгусток вспученный – плохое.
Вторично пробы просматривают спустя еще 12 ч, и на основании этого осмотра относят исследуемое молоко к одному из четырех классов, указанных в таблице 4.8.
Таблица 4.8 – Определение класса молока по бродильной пробе
Сычужно-бродильная проба
Приборы и реактивы. Пробирки широкие вместимостью 30 см 3 , пипетки вместимостью 1 см 3 , водяная баня с температурой 38-40 °C, 0,5 %-ный раствор сычужного фермента.
Техника анализа. В стерилизованные пробирки наливают молоко, подогретое до 38-40 °C (на 1 см ниже верхнего края пробирок) добавляют 1 см 3 раствора сычужного фермента и хорошо перемешивают. Пробирки ставят в водяную баню и выдерживают 12 ч. а затем оценивают, подразделяя на три класса (таблица 4.9).
Таблица 4.9 – Определение класса молока по сычужно-бродильной пробе
Сычужная проба
Метод основан на способности молока, подвергнутого предварительной температурной обработке (пастеризации), свертываться под действием сычужного фермента. По характеру образовавшегося сгустка оценивают качество сырого молока на его пригодность для производства сыра.
Приборы и реактивы. Пробирки широкие вместимостью 30 см 3 , колбы вместимостью 250 см 3 , пипетки вместимостью 0,5 и 1 см 3 , водяная баня с температурой водяная баню с температурой (64±1) °С и (38±1) °С, 1,0 %-ный раствор сычужного фермента (хранят при температуре от 4 °C до 10 °C в течение 2 сут. ).
Техника анализа. Сырое молоко от индивидуальных сдатчиков, не подвергнутое температурной обработке, пастеризуют в лабораторных условиях. Для этого в колбу вместимостью 250 см 3 помещают около 150 см 3 молока, закрывают пробкой или фольгой. Колбу с молоком помещают в водяную баню с температурой (64±1) °С и выдерживают в течение 30 мин., после чего молоко в колбе охлаждают до температуры (38±1) °С.
Пастеризованное молоко разливают в четыре пробирки по 30 см 3 , доводят до температуры (38±1) °С в водяной бане или термостате.
Пастеризацию молока допускается проводить непосредственно в пробирках: сырое молоко разливают в четыре пробирки по 30 см 3 , пробирки с молоком помещают в водяную баню с температурой (64±1) °С и выдерживают в течение 30 мин., после чего молоко в пробирках охлаждают до температуры (38±1) °С.
Затем в две пробирки вносят по 0,5 см 3 , в другие две пробирки по 1,0 см 3 1 %-ного раствора сычужного фермента, хорошо перемешивают и ставят на 1 ч при температуре (38±1) °С в водяную баню или термостат.
После выдерживания пробирок в водяной бане или термостате в течение установленного времени при заданной температуре оценивают качество полученного сгустка (таблица 4.10).
Молоко с оценкой «хорошее» и «удовлетворительное» (1-го и 2-го класса соответственно) считается пригодным для производства сыра, молоко с оценкой «неудовлетворительное» (3-й класс) – не пригодным для производства сыра.
Таблица 4.10 – Оценка качества полученного сгустка
Определение сыропригодности молока
(модификация З.Х. Диланяна)
Приборы и реактивы. Баня водяная с температурой 35 °C, пробирки, пипетки вместимостью 10 и 2 см 3 , рабочий раствор сычужного фермента.
Основной раствор сычужного фермента: 3 г сычужного порошка (активностью 100000 единиц) растворяют в 100 мл смеси воды и глицерина, хорошо перемешивают, оставляют на сутки в темном месте, затем фильтруют и хранят в склянке из темного стекла в течение 15 суток. Рабочий раствор готовят из основного: 1 см 3 основного раствора помещают в мерную колбу на 100 см 3 и доводят водой до метки
Техника анализа. В пробирки отмеряют 10 см 3 исследуемого молока, подогретого до 35 °C, помещают в водяную баню при той же температуре, затем вносят по 2 см 3 рабочего раствора сычужного фермента. Содержимое пробирок быстро перемешивают путем трехкратного переворачивания, и вновь помещают в баню. В этот момент включают секундомер (начало опыта). Через каждые 2-3 мин пробирки слегка наклоняют, чтобы установить начало свертывания молока (загустевание или появление хлопьев). Когда при осторожном перевертывании пробирки сгусток не выливается, считают концом образования геля и отмечают время по секундомеру. По продолжительности свертывания молоко разделяют на три класса (таблица 4.11).
Таблица 4.11 – Определение класса молока по продолжительности свертывания
Из молока I класса образуется быстро уплотняющийся грубый сгусток, выделяется излишняя сыворотка; из молока II класса получается нормальный сгусток; а из молока III класса образуется дряблый, хлопьевидный сгусток, плохо отделяющий сыворотку. Такое молоко называют сычужно вялым. Наиболее благоприятным для сыроделия является молоко II класса.
4.11. Методы контроля пастеризации молока 9 9
ГОСТ 3623-73 «Молоко и молочные продукты. Методы определения пастеризации»
На молочных комплексах и фермах, которые реализуют молоко непосредственно в торговую сеть, а также в хозяйствах, неблагополучных по заразным заболеваниям скота, молоко пастеризуют на месте. В этих случаях возникает необходимость контроля качества пастеризации, то есть проверка соблюдения заданных режимов.
Ферменты молока (пероксидаза, фосфатаза, каталаза, липаза) имеют четко определенный температурный минимум, при котором происходит их инактивация. Этими свойствами ферментов и пользуются при контроле эффективности пастеризации молока. Наибольшее значение для этих целей имеют пероксидаза и фосфатаза.
Пероксидазная проба применяется для проверки эффективности пастеризации молока при температуре выше 80 °C.
Фосфатазная проба применяется для контроля низкотемпературной пастеризации молока. Фосфатаза разрушается полностью при нагревании до 63 °C в течение не менее 30 мин или при температуре свыше 72 °C с выдержкой 20 с.
Проба на пероксидазу с йодистокалиевым крахмалом
Метод основан на разложении перекиси водорода ферментом пероксидазой, содержащейся в молоке. Образующийся при этом активный кислород окисляет йодид калия, освобождая йод, образующий с крахмалом, соединение синего цвета.
Приборы и реактивы. Пробирки, капельница, мерный цилиндр. На 10 см 3 , пипетки градуированные на 5 см 3 , 0,5 %-ный раствор перекиси водорода, йодисто-калиевый крахмал (к 3 %-ному раствору крахмала добавляют 3 г йодистого калия).
Техника анализа. В пробирку отмеривают 5 мл исследуемого молока и добавляют 5 капель йодисто-калиевого крахмала. После добавления каждого реактива перемешивают содержимое пробирки.
При отсутствии пероксидазы в молоке цвет содержимого не изменяется. Следовательно, молоко пастеризовано при температуре выше 80 °C. Появление темно-синего окрашивания указывает на наличие в молоке пероксидазы, следовательно, молоко сырое или пастеризовано при температуре ниже 80 °C, либо сырое молоко смешано с пастеризованным.
Проба на пероксидазу с хлоридом парафенилендиамина
Метод основан на разложении перекиси водорода пероксидазой, содержащейся в молоке. Освобождающийся активный кислород, окисляет парафенилендиамин, образуя соединение синего цвета.
Приборы и реактивы. Пробирки, колба мерная вместимостью 500 см 3 , пипетки градуированные вместимостью 5 см 3 , капельницы из темного стекла, баня водяная с температурой (35 ± 2)°С, 2 %-ный раствор п-фенилендиамина дигидрохлорида, цитратная буферная смесь, 0,5 %-ный раствор перекиси водорода, вода дистиллированная.
Цитратная буферная смесь: 97 г гидрофосфата натрия и 0,65 г лимонной кислоты растворяют в мерной колбе вместимостью 500 см 3 , доливают до метки и перемешивают.
Техника анализа. В пробирку отмеривают 5 мл молока и 2,5 мл раствора буферной смеси, перемешивают и помещают в водяную баню с температурой (35 ± 2)°С на 3-5 мин. Затем добавляют 6 капель 0,5 %-ного раствора перекиси водорода и 3 капли 2 %-ного раствора п-фенилдиамина гидрохлорида. Содержимое пробирки перемешивают после добавления каждого реактива. Далее пробирку помещают в ту же водяную баню и наблюдают изменение окраски смеси.
При отсутствии пероксидазы в молоке цвет смеси в пробирке останется белым, значит, молоко пастеризованное. При наличии пероксидазы смесь в пробирке приобретает темно-синее окрашивание.
Проба на фосфатазу с 4-аминоантипирином (арбитражный метод)
Основана на гидролизе динатриевой соли фенилфосфорной кислоты ферментом фосфатазой, содержащейся в молоке. Выделившийся при гидролизе свободный фенол в присутствии окислителя дает розовое окрашивание с 4-аминоантипирином.
Приборы и реактивы. Пипетки градуированные вместимостью 5 см 3 , пробирки стеклянные, колбы конические и мерные вместимостью 100 и 1000 см 3 , баня водяная с температурой 40-45 °C, 25 %-ный раствор гидроокиси аммония, осадитель системы цинк-медь, основной буферный раствор (рН 10), растворы А и Б, дистиллированная вода.
Основной буферный раствор: 40 г хлорида аммония в мерной колбе на 1000 мл растворяют в 100-200 мл воды, добавляют 348 см 3 25 %-ного раствора гидроокиси аммония и доводят до метки дистиллированной водой.
Раствор А: 1,25 г динатриевой соли фенифосфорной кислоты растворяют в 100 см 3 основного буферного раствора.
Раствор Б: 0,8 г 4-аминоантипирина растовряют в 900 см 3 дистиллированной воды.
Осадитель системы цинк-медь: 30 г сульфата цинка и 6 г сульфата меди растворяют в 1000 см 3 дистиллированной воды.
Техника анализа. Перед работой готовят рабочий раствор субстрата, смешивая растворы А и Б в соотношении 1: 9. Рабочий раствор пригоден для работы в течение 3 ч при хранении его в склянке из темного стекла.
В пробирку вносят 3 см 3 молока и 2 см 3 рабочего раствора, перемешивают и помещают в водяную баню с температурой 40-45 °C на 30 мин. Далее в ту же пробу добавляют пипеткой 5 см 3 осадителя системы цинк-медь, перемешивают и снова помещают пробирку в ту же баню на 10 мин.
Вынув пробирку из бани, сравнивают окраску содержимого пробирки с контролем. Контролем является аналогичная реакция с кипяченым молоком. При отсутствии фосфатазы в молоке содержимое пробирки (раствор, отделившийся от осажденного белка) бесцветное. При наличии фосфатазы в молоке раствор окрашивается в розовый или красный цвет.
Проба на фосфатазу с фенолфталеинфосфатом натрия
Метод основан на гидролизе фенолфталеинфосфата натрия фосфатазой, содержащейся в молоке. Освобождающийся фенолфталеин в щелочной среде дает розовое окрашивание, что указывает на наличие фермента, а, следовательно, на недостаточную пастеризацию молока.
Приборы и реактивы. Водяная баня, пипетки градуированные, вместимостью 2 см 3 , пробирки. 0,1 %-ный фенолфталеинфосфат натрия в аммиачной буферной смеси.
Аммиачная буферная смесь: 80 см 3 1н раствора аммиака приливают к 20 см 3 хлористого аммония, рН буферного раствора должен быть 9,8.
Техника анализа. В пробирку отмеривают 2 мл исследуемого молока и 1 мл рабочего раствора фенолфталеинфосфата натрия, перемешивают и ставят в водяную баню при температуре 40-45 °C.
Через 10 мин. (предварительный результат), а затем через 1 ч определяют окраску содержимого пробирки. При отсутствии фосфатазы в молоке окраска не изменяется, значит, молоко пастеризовано при температуре не ниже 63 °C. Если содержимое пробирки приобретает цвет от ярко-розового до светло-розового, то молоко сырое, или смешано с пастеризованным.
4.12. Способы выявления анормального молока 10 10
ГОСТ 23453-90 «Методы определения количества соматических клеток»
Анормальным считается молоко, полученное от коров с субклинической формой мастита, с примесью молозива, а также стародойное.
В анормальном молоке происходит изменение состава и свойств: увеличивается содержание хлора и уменьшается – молочного сахара, увеличивается активность каталазы и электропроводность молока, рН сдвигается в щелочную сторону. Кроме того, для анормального молока характерно повышенное количество соматических клеток (лейкоцитов). На контроле изменения этих показателей основаны методы выявления анормального молока.
Проба с мастидином (димастином)
Используется при анализе молока от индивидуальных животных или даже из разных четвертей вымени. Выявляет щелочную реакцию и повышенное содержание лейкоцитов в маститном молоке.
Приборы и реактивы. Пластины ПМК-1 молочно-контрольные, пипетки вместимостью 1 см 3 , палочки стеклянные с оплавленным концом, 2 %-ный раствор мастидина или 5 %-ный раствор димастина.
Техника анализа. В углубление пластины отмеривают 1 см 3 молока и добавляют 1 см 3 мастидина или димастина и размешивают палочкой в течение 15-30 с. Определить цвет и консистенцию полученной смеси. Оценка качества молока производится в соответствии с таблицей 4.12.
Таблица 4.12 – Оценка молока по пробе с мастидином или димастином
Проба с мастопримом
Используется для контроля сборного молока при сдаче-приемке по ГОСТ 13264-88, позволяет выявить примесь 5 % анормального молока.
Приборы и реактивы. Пластины ПМК-1 молочно-контрольные, пипетки вместимостью 1 см 3 , палочка стеклянная с оплавленным концом, 2,5%ный раствор препарата «Мастоприм».
Техника анализа. В луночку пластины ПМК-1 вносят 1 см 3 тщательно перемешанного молока и добавляют 1 см 3 раствора препарата «Мастоприм». Полученную смесь интенсивно перемешивают палочкой в течение 10 с, при перемешивании поднимают палочкой вверх на 50-70 мм, после чего в течение не более 60 с оценивают результат по таблице 4.13.
Техника анализа с использованием прибора «Соматос». Подключить прибор к электросети. Приготовить раствор препарата Мастоприм в воде следует приготовить следующим образом: взвесить 3,5 г препарата, залить в мерную колбу или цилиндр вместимостью 100 см 3 и долить до метки подогретой до 30-35 °C дистиллированной водой; раствор перед применением взбалтывать до равномерного распределения осадка. Срок годности раствора – 24 часа при температуре хранения (10-30)°С.
Таблица 4.13 – Оценка молока по пробе с мастопримом
Перед началом заполнения колбы необходимо нажать кнопку «Поворот». После поворота блока перемешивания пипеткой или шприцем емкостью 5 см 3 влить в колбу анализатора 5 см 3 приготовленного раствора препарата мастоприм, а затем добавить 10 см 3 процеженного и перемешанного молока. Во избежание образования пены, пробы молока следует вливать по внутренней стенке колбы. Кислотность проверяемого молока должна быть от 16 до 21 о Т, температура (20+ 2)°С.
После внесения реагентов следует незамедлительно нажать кнопку «Работа». Прибор автоматически перемешает пробы молока с препаратом мастоприм, измерит время вытекания смеси, переведёт его в концентрацию (тыс. в 1 см 3 ) соматических клеток и отобразит на индикаторе. (Если индикатор показывает «… до 90» или «… ПР 1500», это свидетельствует о том, что время вытекания меньше 12 или больше 58 секунд соответственно).
После проведения анализа молока колбу два-три раза следует промыть дистиллированной водой и четыре-пять раз продуть резиновой грушей. Капилляр прочистить леской.
Данное произведение размещено по согласованию с ООО «ЛитРес» (20% исходного текста). Если размещение книги нарушает чьи-либо права, то сообщите об этом.
Источник