Как приготовить раствор цитрат натрия

Содержание

Цитрат натрия. Выбор концентрации — 3.2% или 3.8%.
Как приготовить раствор цитрат натрия
Подготовка инструментов и материалов для получения спермы и проведения

Цитрат натрия. Выбор концентрации — 3.2% или 3.8%.

Аналитическая записка для врачей-лаборантов-коагулологов и гемостазиологов.

Влияние концентрации цитрата натрия на результаты коагулологических исследований

Для взятия проб крови широко используются такие антикоагулянты, как растворы цитрата натрия и этилендиаминтетрауксусная кислота (ЭДТА). В гемостазиологии цитрат натрия преимущественно применяют для тестирования плазменного гемостаза, а ЭДТА – для определения функциональной активности тромбоцитов.

Для приготовления растворов цитрата используются два типа соли: двухводный трехзамещенный цитрат натрия (Na₃C₆H₅O₇×2H₂O, М=294 г/моль) и 5,5-водный трехзамещенный цитрат натрия (Na₃C₆H₅O₇×5,5H₂O, М=357 г/моль). В вакуумных системах для взятия крови применяют 0,109 М или 0,129 М раствор этого консерванта, что соответствует 3,2% и 3,8% двухводного трехзамещенного цитрата натрия. Во избежание возможного несоответствия между молярной и процентной концентрацией при приготовлении консерванта следует учитывать содержание воды в применяемом реагенте, то есть молекулярную массу гидратированных форм цитрата натрия.

В настоящее время по рекомендациям Института Клинических Лабораторных Стандартов (CLSI) предпочтительным является применение 3,2% (0,109 М) цитрата натрия [1]. Эта концентрация цитрата натрия вызывает меньшую частоту преаналитических ошибок. Исследования показали, что использование 3,8% (0,129 М) приводит к удлинению протромбинового времени (ПВ) и АЧТВ и занижению содержания фибриногена в нормальном диапазоне [2]. «Правильная» молярность цитрата натрия принципиально важна в тестах, где критичным является содержание несвязанного Ca2 + . Так, согласно требованиям Всемирной Организации Здравоохранения [3], во избежание существенных диагностических ошибок при определении Международного Нормализованного Отношения (МНО), для теста ПВ следует использовать 0,109 М раствор трехзамещенного цитрата натрия в соотношении кровь:антикоагулянт = 9:1. Другие международные источники также рекомендуют использовать в тесте ПВ раствор трехзамещенного цитрата натрия в концентрации от 0,105 М до 0,109 М [4]. Раствор цитрата натрия с концентрацией 0,129 М (3,8%) не должен быть использован в данном тесте [5].

Следует помнить, что ошибки, допущенные на преаналитическом этапе исследования, нельзя скорректировать проведением процедур верификации и внутрилабораторного контроля качества коагулологических тестов.

вакуумные системы для коагулологических исследований должны использоваться только с концентрацией цитрата натрия 3,2%!

[1] CLSI. Collection, Transport, and Processing of Blood Specimens for Testing Plasma Based Coagulation Assays and Molecular Hemostasis Assays: Approved Guideline. 5th ed. CLSI document H21-A5. Wayne, PA: Clinical and Laboratory Standards Institute; 2008.

[2] Adcock DM, Kressin DC, Marlar RA. Effect of 3.2% vs 3.8% sodium citrate concentration on routine coagulation testing. Am J Clin Pathol. 1997; 107:105-110.

[3] WHO Expert Committee on Biological Standardization Guidelines for Thromboplastins and Plasma Used to Control Oral Anticoagulant Therapy. WHO Technical Report Series no. 889. Geneva: WHO, 1999: 64-93.

[4] van den Besselaar AMHP, Barrowcliffe TW, Houbouyan-Reveillard LL, et al. Guidelines on preparation, certification, and use of certified plasmas for ISI calibration and INR determination: On behalf of the Subcommittee on Control of Anticoagulation of the Scientific and Standardization Committee of ISTH. J Thromb Haemost. 2004;2:1946-1953.

[5] Procedures for Validation of INR and Local Calibration of PT/INR Systems: Approved Guideline; CLSI (Clinical and Laboratory Standards Institute) Document H54-A, Vol 25, No. 23, Replaces H54-P, Vol 24, No. 30 (formerly NCCLS), 2005.

Источник

Как приготовить раствор цитрат натрия

+7 (495) 225 12 61
+7 (804) 333 22 61
(бесплатно по России)
info@renam.ru

О нас Каталог Документы Поддержка Фармкомпаниям Научная инф. Контакты 2+ . Так, согласно требованиям Всемирной Организации Здравоохранения[3], во избежание существенных диагностических ошибок при определении Международного Нормализованного Отношения (МНО), для теста ПВ следует использовать 0,109 М раствор трехзамещенного цитрата натрия в соотношении кровь:антикоагулянт = 9:1. Другие международные источники также рекомендуют использовать в тесте ПВ раствор трехзамещенного цитрата натрия в концентрации от 0,105 М до 0,109 М[4]. Раствор цитрата натрия с концентрацией 0,129 М (3,8%) не должен быть использован в данном тесте[5].

Вакуумные системы для коагулологических исследований должны использоваться только с концентрацией цитрата натрия 3,2%!

[2] Adcock DM, Kressin DC, Marlar RA. Effect of 3.2% vs 3.8% sodium citrate concentration on routine coagulation testing. Am J Clin Pathol. 1997; 107:105-110.

Источник

Подготовка инструментов и материалов для получения спермы и проведения

Тема: ПОДГОТОВКА ИНСТРУМЕНТОВ И МАТЕРИАЛОВ ДЛЯ ПОЛУЧЕНИЯ СПЕРМЫ И ПРОВЕДЕНИЯ ИСКУССТВЕННОГО ОСЕМЕНЕНИЯ

Цель: Освоить приготовление растворов, спиртовых тампонов и марлевых салфеток, обеззараживание инструментов и материалов.

1. Подготовка растворов, спиртовых тампонов и марлевых салфеток

Необходимые материалы: 96%-ный этиловый спирт, дистиллированная вода, цилиндр (градуированный, ёмкостью 100-200 мл), спиртометр, химически чистый натрия хлорид, натрия гидрокарбонат, весы с разновесами, химические колбы ёмкостью 200 мл, стеклянные палочки, электроплитка, гигроскопическая вата, марля и горячая вода.

1.1. Приготовление 70%-ного спирта

70%-ный спирт применяется в искусственном осеменении для обеззараживания стеклянных спермоприёмников, микрошприцев и шпрнцев-катетеров путём промывания их внутренней поверхности. Спирт такой концентрации обладает более сильными дезинфицирующими свойствами, чем 96%-ный. Это связано с тем, что 70%-ный спирт в меньшей степени способствует коагуляции белка и поэтому глубже проникает в цитоплазму микробной клетки, вызывая её гибель.

Расчёт для приготовления 100 мл 70%-ного спирта из 96%-ного производится следующим образом:

96%-ный спирт — 100%

70%-ный спирт — X. следовательно Х= 70*100/96 = 72,9

Таким образом, для приготовления 100 мл 70%ного спирта к 73 мл этилового спирта-ректификата добавляют 27 мл дистиллированной или прокипяченной воды и размешивают стеклянной палочкой. Крепость приготовленного спирта проверяют спиртометром.

Для смешивания 96%-ного спирта с водой следует пользоваться градуированным цилиндром. 70%-ный спирт обычно готовят на 2-3 дня работы и хранят в банке с притёртой крышкой.

На пунктах искусственного осеменения для промывания всей посуды и инструментов после стерилизации с целью удаления капель воды или спирта, а также для увлажнения стерильного влагалищного зеркала или разовых полиэтиленовых перчаток перед их использованием применяют какой-либо изотонический раствор: 0,9%-ньй раствор натрия хлорида, 1%-ный раствор натрия гидрокарбоната или 2,9%-ный раствор натрия цитрата.

1.2. Приготовление 0,9%-ного раствора натрия хлорида

Нужный объем воды отмеряют в чистую колбу, высыпают туда навеску натрия хлорида (на каждые 100 мл воды -0,9 г хлорида натрия). Если натрия хлорид в виде таблеток но 0,9 г, то берут 1 таблетку на каждые 100 мл воды. Колбу закрывают ватно-марлевой пробкой, ставят на плитку и кипятят.

1.3. Приготовление 1%-ного раствора натрия гидрокарбоната

Цилиндром или мензуркой отмеряют необходимое количество дистиллированной или дважды прокипяченной и профильтрованной водопроводной воды и выливают её в стеклянную колбу. Волу кипятят и дают ей остыть до 60 С. Взвешивают требуемое количество химически чистого натрия гидрокарбоната (из расчета 1 г на 100 мл воды), высыпают в стерильную колбу, заливают подготовленной водой и размешивают стерильной стеклянной палочкой. Раствор натрия гидрокарбоната нельзя нагревать выше 60°С, т.к. он разлагается и становится непригодным.

1.4. Приготовление 2,9%-ного раствора натрия цитрата

Для его приготовления на каждые 100 мл воды берут 2,9 г химически чистого натрия цитрата трёх замещенного пятиводного. Техника приготовления раствора аналогична приготовлению 1 %-ного содового раствора.

Указанные выше растворы готовят ежедневно перед началом работы, после охлаждения разливают в стерильные банки—тампонницы с притертыми крышками.

1.5. Приготовление 2-3%-ного раствора натрия гидрокарбоната

Данный раствор в искусственном осеменении применяют для мытья использованных искусственных вагин и загрязнённой посуды. Готовят его ежедневно в стеклянной или эмалированной посуде. На каждый литр горячей воды берут 20-30 г двууглекислой (питьевой) соды. Можно применять также 1-1,5%-ный раствор кальцинированной соды (на литр горячей воды 10-15 г соды) или 2-3%-ный раствор (20-30 г на литр воды) одного из стиральных порошков.

1.6. Приготовление 0,02%-ного раствора фурацилина (1:5000)

Раствор фурацилина применяют для обработки наружных половых органов у самок перед осеменением, у производителей перед взятием спермы. Этот раствор готовят на изотоническом растворе натрия хлорида. В одном литре кипящей воды растворяют 9 г натрия хлорида и 0,2 г фурацилина. Раствор охлаждают и переливают в чистую бутыль из тёмного стекла. Используют его в течение двух дней и хранят в затемнённом месте.

1.7. Приготовление спиртовых тампонов

Спиртовые тампоны в искусственном осеменении применяют для обеззараживания наружной поверхности шприцев-катетеров, химических термометров, подставок, полиэтиленовых пакетов с разовыми инструментами, рук и т.д. Тампоны готовят из гироскопической ваты. Взяв кусок ваты, расслаивают его на тонкие пласты, отделяя от них небольшие кусочки, подвёртывают края их так, чтобы получались плоские тампоны диаметром 5-6 см. Изготовленные ватные тампоны помещают в невысокую стеклянную банку (можно использовать крышку от банки для тампонов), аккуратно смачивают 96%-ным спиртом-ректификатом, отжимают и, отделяя по одному, складывают в стеклянную банку с притёртой крышкой. Тампоны можно готовить на 2-3 дня работы. Спиртовые тампоны, использованные для обеззараживания инструментов путём протирания поверхности, складывают в отдельную банку с притёртой крышкой и затем их используют еще раз для стерилизации методом фламбирования (обжигания не коптящим пламенем). 1.8. Приготовление марлевых салфеток

Стерильные марлевые салфетки применяют для заворачивания стерильных инструментов, удаления из инструментов капель воды, для протирания предметных и покровных стёкол, а также оптики микроскопа и т, д. Марлю нарезают размером 20×30 или 30×30 см. Края салфеток подшивают. Загрязнённые салфетки стирают в тёплой воде с порошком, хорошо прополаскивают, сушат и проглаживают горячим утюгом для обеззараживания. Затем салфетки свёртывают вчетверо и складывают в стерильную стеклянную банку с притёртой крышкой.

2. Обеззараживание инструментов и материалов

Необходимые материалы: спермоприёмник стеклянный, микрошприцы и шприцы-катетеры, влагалищные зеркала, стеклянная посуда, электроплитка, водяная баня, стерилизатор, вазелин, спирт этиловый, пластмассовые инструменты, лампа бактерицидная, спиртовка. 1%-ный раствор натрия гидрокарбоната.

Используемые в искусственном осеменении посуда и инструменты должны быть стерильными. Перед обеззараживанием новые или бывшие в употреблении инструменты моют в горячем растворе соды, затем тщательно ополаскивают чистой горячей водой, протирают чистым полотенцем или высушивают на воздухе.

2.1. Стерилизация кипячением

Кипячением можно стерилизовать стеклянные и металлические инструменты.

Чистые стеклянные инструменты и посуду (шприцы-катетеры, тампонницы, стеклянные палочки и т. д.) в разобранном виде обёртывают марлей, помещают в стерилизатор (или эмалированную посуду) и заливают дистиллированной или прокипяченной и профильтрованной водой, закрывают крышкой и кипятят 15-20 минут. Затем дают остыть, не снимая крышки. Стерильным пинцетом инструменты извлекают из стерилизатора, встряхивают и завёртывают в стерильную марлевую салфетку. Инструменты, которые соприкасаются со спермой (например, шприц-катетер), перед работой должны быть обязательно промыты 4-5 раз тёплым изотоническим раствором.

Металлические инструменты (влагалищные зеркала и др.) стерилизуют кипячением в течение 15-20 минут. После этого их необходимо просушить стерильными салфетками.

2.2. Стерилизация сухим паром

Стеклянную посуду и инструменты выдерживают в электрическом сушильном шкафу при температуре 150-180°С в течение 5-30 минут. Предварительно колбы, мензурки, баночки, флаконы, спермоприёмники. палочки заворачивают в бумагу, которая при обеззараживании должна не сгореть, а только слегка пожелтеть.

2.3. Стерилизация фламбированием

Металлические инструменты, особенно в полевых условиях, стерилизуют фламбированием. то есть обжиганием на некоптящем пламени. Инструменты несколько раз проводят над пламенем. Для фламбирования чаще всего используют тампоны, пропитанные 96%-ным спиртом-ректификатом.

2.4. Обеззараживание 70%-ным спиртом-ректификатом

Спермоприёмники и шприцы-катетеры можно обеззараживать путём промывания 70%-ным спиртом. Для удаления капель спирта, губительно влияющего на спермии, инструменты промывают 4-5 раз стерильным 1%-ным раствором натрия гидрокарбоната (или другим изотоническим раствором).

2.5. Автоклавированием можно обеззараживать инструменты, изготовленные из резины, металла, стекла и натуральных тканей. Продолжительность автоклавирования 30 минут при температуре 105°С и давлении 0,15 МПа 30-45 минут.

2.6. Облучение бактерицидной лампой

Ультрафиолетовые лучи губительно действуют на микроорганизмы, поэтому их используют для стерилизации одноразовых инструментов, боксов, лабораторий. Время экспозиции 30 минут. Находиться в помещении при включенной лампе нельзя.

2.7. Стерилизация вазелина

Стерильный вазелин применяют для смазывания камеры искусственной вагины при её подготовке для получения спермы. С этой целью применяют белый или желтый вазелин без примеси. Вазелин стерилизуют перед каждым получением спермы. В водяную баню на дно кладут ватную или марлевую подкладку, наливают воду и помещают баночку с вазелином с не плотно прикрытой крышкой. Водяную баню нагревают до кипения и кипятят в течение 20 минут. Затем баночку с вазелином вынимают и охлаждают.

Источник