Как приготовить реактив ковача

Изучение ферментативной активности микроорганизмов является распространенным способом определения как общих, так и специфических ферментов, характерных для определённых видов.

Способность микроорганизмов воздействовать на известный субстрат — это хороший маркер наличия у них того или иного фермента. Показателем работы фермента может служить изменение физического состояния субстрата (разжижение желатина), закисление питательной среды (среды Гисса с углеводами) или образование определенных продуктов метаболизма (индол, сероводород, аммиак) и т.д.

Определение присутствия индола — ключевой тест для дифференциации энтеробактерий. Кишечная палочка (E.coli), выделенная из образцов человека, в 90,1-98,6% случаев способна продуцировать индол, бактерии из родов Citrobacter и Enterobacter индола не образуют.

В 1928 году венгерско-швейцарский химик Эрвин Ковач (Erwin Kovacs) предложил использовать для обнаружения индола раствор, содержащий 4-диметиламинобензальдегид, амиловый спирт и соляную кислоту.

Индол-положительные микроорганизмы способны расщеплять L-триптофан, содержащийся в пептонных питательных средах, до индола, пировиноградной кислоты и аммиака. Индол, в свою очередь, реагирует с 4-диметиламинобензальдегидом, содержащимся в реактиве Ковача, с образованием хорошо заметного комплекса красного цвета.

В повседневной лабораторной практике реактив Ковача используется для подтверждения наличия кишечной палочки и многих других патогенных микроорганизмов.

Хранить данный реактив необходимо в темном и холодном месте.

Источник

Реактив Ковача на индол

Назначение реактива Ковача на индол

Реактив Ковача на индол предназначен для обнаружения индола при идентификации индолположительных и индолотрицательных микроорганизмов.

Набор раccчитан на проведение 2000 анализов в микроварианте и 500 анализов в макроварианте постановки анализа.

Принцип метода реактива Ковача на индол

Индолположительные микроорганизмы способны расщеплять L-триптофан, содержащийся в пептонных питательных средах, до индола, пировиноградной кислоты и аммиака. Индол реагирует с 4-диметиламинобензальдегидом, содержащимся в реактиве Ковача, и образует продукт, дающий на поверхности среды кольцо ярко-красного цвета.

Состав набора реактива Ковача на индол

Реактив Ковача на индол, 20 мл — 5 фл.
Инструкция по применению реактива Ковача на индол — 1 шт.

Использование реактива Ковача на индол

Микровариант. В лунки 96-луночного планшета вносят по 200 мкл суточных исследуемых культур бактерий, выращенных на подходящих питательных средах (нитратный бульон, бульон с триптофаном, SiM среда и др.). Затем в лунки осторожно вносят по 50 мкл (2 капли из капельницы) реактива Ковача на индол.

Макровариант. В пробирки вносят по 1 — 3 мл суточных исследуемых культур бактерий, выращенных на подходящих питательных средах (нитратный бульон, бульон с триптофаном, SiM среда и др.). Затем в пробирки осторожно вносят по 200 — 400 мкл (8 — 16 капель из капельницы) реактива Ковача на индол.

Учет и интерпретация результатов на базе реактива Ковача на индол

Результат учитывают через 1 — 2 мин после внесения реактива. Появление на поверхности питательной среды кольца ярко-красного цвета указывает на наличие индола.

Источник

Полоски с реактивом Ковача

Полоски с реактивом Ковача (на индол)

DD019

Используются для определения микроорганизмов, продуцирующих индол.

Принцип и оценка результата:

Реагент представляет собой полоски из фильтровальной бумаги, пропитанные реактивом Ковача. Реактив Ковача готовят путем растворения 10 г пара-диметил-аминобензальдегида в 150 мл изоамилового спирта с последующим медленным добавлением 50 мл концентрированной соляной кислоты. Участвующий в процессе гидролитического расщепления триптофана комплекс ферментов условно называют триптофаназой (17). При ферментации микроорганизмами триптофана образуется индол. Последний при взаимодействии с бензальдегидом образует окрашенные в красный цвет соединения – “розиндолы”.

Для приготовления пептонной воды, содержащей большое количество триптофана, используют пептический перевар животной ткани (пептон). Для определения продукции индола представителями колиформных бактерий в качестве альтернативы применяют триптонную воду (18).

Указания по применению:

Для определения индола испытуемые микроорганизмы засевают в пробирку с пептонной водой (М028), а полоску с реактивом Ковача прижимают пробкой к внутренней стенке пробирке и инкубируют посев при 35°С в течение 18–24 ч.

Контроль качества:

Культуральные свойства:

Результаты теста на индол у референс-штаммов на пептонной воде (М028) через 18–24 ч при 35°С:

Источник

Реактив Ковача, 100 мл (ФСЗ 2008/01440) (в соотв. с ГОСТ Р 52426-2005)

Кат. № R008-100ML

Цена: 1 768.00 RUB

Вы можете добавить товар в корзину, указав количество

Производитель: HiMedia Laboratories

Упаковка: 100 мл

Функциональное назначение

Технические характеристики

Источник