Как приготовить реактив тильманса

Методика определения аскорбиновой кислоты в овощах (сырых и вареных) — методом титрования реактивом ТИЛЬМАНСА

Принцип метода основан на окислительно-восстановительной реакции между аскорбиновой кислотой и реактивом Тильманса (индикатор — 2,6-дихлорфенолиндофенол). Аскорбиновая кислота, отдавая 2 атома водорода, окисляется в дегидроаскорбиновую кислоту, восстанавливая реактив Тильманса. Реактив Тильманса в щелочной и нейтральной среде имеет интенсивно-синюю окраску. В кислой среде реактив красного цвета. При восстановлении аскорбиновой кислотой индикатор переходит в бесцветное состояние — лейкоформу. Определение витамина С производится путем титрования испытуемого раствора реактивом Тильманса в кислой среде до появления слабо-розового окрашивания, указывающего, что вся аскорбиновая кислота вступила в реакцию.

Определение витамина С в сырых и вареных овощах и в овощных вторых блюдах:10 г овощей или овощного второго блюда перенести в фарфоровую ступку и тщательно растереть с чистым кварцевым песком, взятым на кончике ножа, постепенно добавляя 2% раствор хлористоводородной кислоты до 50 мл. Оставить смесь в ступке на 10 мин для более полного извлечения аскорбиновой кислоты. Затем содержимое перелить в цилиндр и довести водой до 100 мл, перемешать, профильтровать через марлю (или вату) в другую емкость. 5 мл полученного фильтрата перенести в колбочку, довести водой до 15 мл и титровать реактивом Тильманса из микробюретки (или пипетки на 2 мл) до слабо розового окрашивания, не исчезающего в течение 1 мин. Если раствор имеет интенсивную окраску, то пробу для титрования разводят водой в 5 раз.

Расчет количества содержащейся аскорбиновой кислоты производят по формуле:

где: X — искомое содержание аскорбиновой кислоты, мг на 100 г продукта;

n количество реактива Тильманса, пошедшего на титрование, мл;

F — поправка на титр раствора реактива Тильманса (0,95);

N — количество экстрагирующей жидкости (100);

100 — коэффициент для пересчета на 100 г продукта;

0,088 — постоянный коэффициент (1 мл раствора реактива Тильманса соответствует 0,088 мг аскорбиновой кислоты);

а — объем пробы, взятой на титрование (5 мл);

р — навеска продукта (10 г). Расчет содержания витамина С во вторых блюдах производится в миллиграммах на общую массу блюда (например, 180-200 г).

В норме содержание витамина С в сыром картофеле составляет:20 мг% (мг/100 продукта) — в свежесобранном; 15 мг% — через 4-5 месяцев хранения; 10 мг% — после 6 месяцев хранения.

Источник

Пищевая химия: учебник для студентов вузов

Лабораторная работа 35. Титриметрические методы определения витамина С

Сущность титриметрического метода заключается в том, что 2, 6-дихлорфенолиндофенол выступает не только как окислитель, но и как индикатор, по которому определяют окончание титрования. Окраска раствора 2, 6-дихлорфенолиндофенола зависит от рН среды, а при восстановлении он переходит в лейкоформу.

Количественное определение ведут путем добавления к подкисленному раствору, содержащему витамин С, щелочного раствора краски Тильманса. Пока в титруемом растворе содержится витамин С, добавляемый раствор 2, 6-дихлорфенолиндофенола, имеющий глубокий синий цвет, обесцвечивается с образованием лейкоформы (индикатор), за счет присутствия восстановленной формы АК. Как только все количество АК в анализируемом растворе окислится до ДАК, раствор приобретает красную окраску, характерную для окисленной формы 2, 6-дихлорфенолиндофенола в кислой среде. Метод стандартизирован (ГОСТ 30627.2–98 – Методы измерений массовой доли витамина С (аскорбиновой кислоты).

Ход анализа . Точную навеску (около 5–10 г) предварительно измельченного исследуемого материала поместить в фарфоровую ступку. Небольшими порциями добавить 20 мл 1%-го раствора соляной кислоты, тщательно растирая пробу до получения однородной кашицы. Смесь количественно перенести в мерную колбу вместимостью 100 мл (общий объем соляной кислоты не должен превышать 50 мл). Ступку и пестик ополоснуть 1%-м раствором щавелевой кислоты и собрать смывы в ту же мерную колбу. Объем раствора довести до метки раствором щавелевой кислоты.

Содержимое колбы перемешать и через 5 минут отфильтровать через складчатый фильтр в сухую колбу или центрифугировать. Полученный фильтрат или фугат в количестве 1–10 мл (в зависимости от содержания витамина) отобрать пипеткой в коническую колбу и довести объем раствора дистиллированной водой до 15 мл. Анализируемый раствор оттитровать из микробюретки 0,001 н раствором 2, 6-дихлор-фенолиндофенола до появления розового окрашивания, не исчезающего в течение 30–60 с.

Контрольный опыт . Для оценки поправки на присутствие других редуцирующих веществ в используемых реагентах к 10 мл фильтрата или фугата прилить 0,1 мл 10%-го раствора сернокислой меди и выдержать при температуре 110 0 С в течение 10 минут для разложения АК. После охлаждения добавить 5 мл дистиллированной воды и оттитровать анализируемый раствор из микробюретки 0,001 н раствором 2, 6-дихлорфенолиндофенола. Для титруемого объема в 15 мл объем титранта, пошедшего на контрольный опыт, обычно составляет 0,04–0,06 мл. Эту поправку необходимо вычесть из объема титранта, пошедшего на титрование опытного образца. Рассчитать массовую долю аскорбиновой кислоты ( С АК , мг %) в анализируемом материале по формуле

Читайте также:  Можно ли приготовить драники без муки рецепт

C A K = T × V 1 × V 2 m × V 3 × 100 ,

где Т – титр 0,001 н раствора 2, 6-дихлорфенолиндофенола по аскорбиновой кислоте, 0,088 мг/мл;
V 1 – объем 0,001 н раствора 2, 6-дихлорфенолиндофенола, пошедшего на титрование экстракта с учетом поправки на реагенты, мл;
V 2 – общий объем экстракта, 100 мл;
V 3 – объем экстракта, взятого на титрование, 15 мл;
m – масса навески исследуемого материала, г;
100 – коэффициент пересчета на 100 г.

Определение витамина С в окрашенных растворах

Многие растительные материалы дают окрашенные экстракты, что затрудняет определение АК путем прямого титрования краской Тильманса. В этом случае титрование ведут в присутствии растворителей, которые сами нерастворимы в воде, но растворяют краску и не растворяют пигменты экстракта, таких как хлороформ или смесь толуола и изобутилового спирта (1:1).

Ход анализа . Точную навеску (около 5–10 г) растительного материала растереть в фарфоровой ступке в 20 мл 1%-ной соляной кислоты. Полученный гомогенат количественно перенести в мерную колбу вместимостью 100 мл и довести объем до метки 1%-ным раствором щавелевой кислоты. Соотношение соляной и щавелевой кислот должно составить 1:5. Содержимое колбы перемешать и через 5 минут отфильтровать через складчатый фильтр в сухую колбу.

В пробирку вместимостью 20 мл отмерить пипеткой 5 мл отфильтрованного окрашенного экстракта, добавить мерным цилиндром 5 мл хлороформа и оттитровать 0,001 н раствором 2, 6-дихлор-фенолиндофенола при осторожном перемешивании, наклоняя пробирку. Титрование прекратить при появлении красного окрашивания в слое хлороформа.

Для оценки поправки на реагенты приготовить контрольный раствор. В качестве контрольного раствора использовать 5 мл смеси из 1%-ных растворов соляной и щавелевой кислот (в соотношении объемов 1:5) и 5 мл хлороформа. Объем титранта, пошедший на контрольный опыт, необходимо вычесть из объема титранта, пошедшего на титрование опытного образца. Рассчитать массовую долю аскорбиновой кислоты ( С АК , мг %) по формуле

C A K = T × V 1 × V 2 m × V 3 × 100 ,

где Т – титр 0,001 н раствора 2, 6-дихлорфенолиндофенола по аскорбиновой кислоте, 0, 088 мг/мл;
V 1 – объем 0,001 н раствора 2, 6-дихлорфенолиндофенола, пошедшего на титрование экстракта с учетом поправки на контрольный опыт, мл;
V 2 – общий объем экстракта, 100 мл;
V 3 – объем экстракта, взятого на титрование, 5 мл;
m – масса навески исследуемого материала, г;
100 – коэффициент пересчета на 100 г.

Определение содержания витамина С в молочных продуктах

Содержание витамина С в сыром молоке зависит от времени года, индивидуальных особенностей животного и колеблется в интервале 0,3–2 мг%. В свежем молоке 67–68% приходится на восстановленную форму витамина С (АК) и 22–33% на окисленную (ДАК). Окисление витамина С в молоке катализирует аскорбатоксидаза и ускоряется в присутствии металлов (железа, меди), света, воздуха. Прямому определению АК в молоке препятствуют белки, способные связывать 2, 6-дихлорфенолиндофенол. В связи с этим определение АК ведут в безбелковом фильтрате. Белки осаждают с помощью насыщенного раствора хлорида натрия или раствора кислоты (метафосфорной, щавелевой, соляной).

Ход анализа . Навеску анализируемого молочного продукта (10 г) растворить 15–25 мл 6%-го раствора метафосфорной кислоты, количественно перенести в мерную колбу вместимостью 50 мл и довести объем смеси до метки тем же раствором кислоты (вместо метафосфорной кислоты можно использовать 2%-ный раствор соляной кислоты). Полученную смесь перемешать и отфильтровать. В коническую колбу для титрования отобрать пипеткой 1 мл фильтрата, довести объем до 15 мл дистиллированной водой и оттитровать из микробюретки 0,001 н раствором 2,6-дихлорфенолиндофенола до появления слаборозового окрашивания, не исчезающего в течение 30–60 с.

Рассчитать массовую долю аскорбиновой кислоты ( С АК , мг %) в анализируемом молоке по формуле

C A K = T × V 1 × V 2 m × V 3 × 100 ,

где Т – титр 0,001 н раствора 2, 6-дихлорфенолиндофенола по аскорбиновой кислоте, 0,088 мг/мл;
V 1 – объем 0,001 н раствора 2, 6-дихлорфенолиндофенола, пошедшего на титрование анализируемого образца с учетом поправки на реагенты, мл;
V 2 – общий объем раствора, 50 мл;
V 3 – объем раствора, взятого на титрование, 1 мл;
m – масса навески исследуемого материала, г;
100 – коэффициент пересчета в проценты.

Упрощенный йодатный метод определения витамина С в молоке

В основе йодатного метода лежит реакция окисления АК йодноватокислым калием до ДАК.

Определение витамина С упрощенным йодатным методом не применяют для анализа жидких концентратов из плодов шиповника, консервированных продуктов, свежеотжатых соков, свежих плодов, овощей, сушенных продуктов, витаминизированных чаев.

Читайте также:  Как правильно приготовить облепиху чтобы сохранить полезные свойства

Ход анализа . Экстракцию витамина С провести с использованием 2%-го раствора соляной кислоты по методике, указанной выше. На анализ отобрать 1–5 мл экстракта (в зависимости от содержания витамина С) в коническую колбу вместимостью 100 мл, куда заранее добавить 0,5 мл 1%-го раствора йодистого калия, 1 мл 1%-го раствора крахмала и воды (3,5–7,5мл) с таким расчетом, чтобы общий объем смеси составил 10 мл. Полученный раствор оттитровать из микробюретки 0,001 н раствором йодноватокислого калия до появления устойчивого слабо синего окрашивания. Рассчитать содержание аскорбиновой кислоты ( С АК , мг %) в анализируемом молоке по формуле

C A K = T × V 1 × V 2 m × V 3 × 100 ,

где Т – титр 0,001 н раствора йодноватокислого калия по аскорбиновой кислоте, 0,088 мг/мл;
V 1 – объем 0,001 н раствора йодноватокислого калия, пошедшего на титрование анализируемого образца с учетом поправки на контрольный раствор, мл;
V 2 – общий объем экстракта, 1–5 мл;
V 3 – объем раствора, взятого на титрование, 10 мл;
m – масса навески исследуемого материала, г;
100 – коэффициент пересчета в проценты

Контрольный опыт . В коническую колбу отмерить 0,5 мл 1%-го раствора йодистого калия, 1 мл 1%-го раствора крахмала, 1 мл 2%-го раствора соляной кислоты и воды с таким расчетом, чтобы общий объем жидкости составил 10 мл, и оттитровать из микробюретки 0,001 н раствором йодноватокислого калия до появления устойчивого слабо синего окрашивания.

Необходимые реактивы, посуда, оборудование :

§ 1-, 2%-ные растворы соляной кислоты, 1%-ный раствор щавелевой кислоты, 6%-ный раствор метафосфорная кислота (Н n P n O 3n ), 10%-ный раствор сульфата меди, 2%-ный раствор серной кислоты, аскорбиновая кислота кристаллическая, 1%-ный раствор крахмала, 0,001 н раствор 2,6-дихлор-фенолиндофенола, аскорбиновая кислота кристаллическая, хлороформ, 1%-ный раствор йодистого калия, 0,001 н раствор йодноватокислого калия ( KJO 3 ), кристаллический йодид калия;

§ колбы для титрования, пипетки, микробюретки, фарфоровые ступки с пестиком, мерные колбы вместимостью 50 мл, 100 мл, делительные воронки, воронки для фильтрования, мерные цилиндры, пробирки;

§ аналитические весы, центрифуга, термостат на 110 0 С.

1%-ный раствор соляной кислоты . В мерную колбу вместимостью 1000 мл отмерить 23 мл соляной кислоты плотностью 1,185 г/мл, развести 300 мл дистиллированной воды и довести объем раствора до метки.

0,001 н раствор йодноватокислого калия ( KJO 3 ) . Навеску йодата калия 0,03568 г растворить в небольшом количестве дистиллированной воды в мерной колбе вместимость 1 л и довести объем раствора до метки.

0,001 н раствор 2,6-дихлорфенолиндофенола ( краска Тильманса ) . Навеску краски около 0,2 г растворить в 300 мл свежепрокипяченной теплой дистиллированной воды, добавить 20–30 капель 0,01 н раствора гидроксида калия или натрия и количественно перенеси в колбу вместимостью 1000 мл. Объем раствора довести до метки и отфильтровать. Титр раствора определить по йодноватокислому калию.

Определение титра раствора 2,6-дихлорфенолиндофенола по йодноватокислому калию. В мерной колбе вместимостью 50 мл растворить 1 мг кристаллической аскорбиновой кислоты в 30 мл раствора 2%-ной серной кислоты и довести объем до метки тем же раствором кислоты. В две конические колбы для титрования отобрать по 5 мл приготовленного раствора аскорбиновой кислоты. Раствор в одной колбе оттитровать 0,001 н раствором 2,6-дихлорфенолиндофенолом до появления розового окрашивания, не исчезающего в течение 30 с. Во вторую колбу добавить несколько кристалликов йодида калия (около 1–2 мг), 5 капель 1%-го раствора крахмала и оттитровать 0,001 н раствором йодноватокислого калия до появления едва заметного синего окрашивания.

Исходя из того, что 1 мл 0,001 н раствора йодноватокислого калия, а следовательно, и 2,6-дихлорфенолиндофенола, эквивалентен 0,088 мг аскорбиновой кислоты, рассчитать титр раствора 2,6–дихлор-фенолиндофенола ( Т, мг/мл) по аскорбиновой кислоте по формуле

T = 0 , 088 × V 1 V 2 ,

где 0,088 – количество аскорбиновой кислоты, соответствующее 1 мл 0,001 н раствора йодноватокислого калия, мг/мл;
V 1 – объем 0,001 н раствора йодата калия, израсходованного на титрование раствора аскорбиновой кислоты, мл;
V 2 – объем раствора 2,6-дихлорфенолиндофенола, израсходованное на титрование, мл.

Источник

Опыт 11. Реакция с реактивом Тильманса

В пробирку внести 1-2 мл раствора HCl (1:1), добавить 2-3 капли раствора витамина С, перемешать. Затем по каплям добавлять раствор краски Тильманса. Происходит окрашивание раствора в розовый цвет с последующим обесцвечиванием окраски, благодаря окислительным свойствам витамина С. В эквивалентной точке раствор приобретает розовый цвет.

Опыт 12. Взаимодействие с метиленовой синью

В пробирку внести 1-2 мл витамина С, прилить 1-2 капли раствора метиленовой сини, перемешать и поместить пробирку в стакан с водой (40°С). Через некоторое время жидкость в пробирке обесцвечивается за счет восстановления метиленовой сини в бесцветную лейкоформу, а аскорбиновая кислота окисляется до дегидроаскорбиновой кислоты. Если бесцветный раствор энергично встряхнуть для контакта с кислородом, то он вновь приобретет синий цвет.

Читайте также:  Как правильно приготовить капустный пирог

Опыт 13. Реакция с красной кровяной солью

В пробирку внести 1-2 мл витамина С, прилить 2 мл раствора КОН, 0,5 мл раствора красной кровяной соли и энергично встряхивают. Затем добавить в пробирку 0,5 мл 10% раствора соляной кислоты и 1-2 капли раствора хлорида железа (III). Выпадает синий осадок берлинской лазури.

Провести визуальные наблюдения, сделать вывод.

Написать уравнение реакции окисления витамина С. Указать содержание витамина в сыворотке крови с.-х. животных и его биохимическую роль.

Лабораторная работа № 9

Количественное определение витаминов

Реактивы и оборудование:Сыворотка крови, этиловый спирт, петролейный эфир (или авиационный бензин) K2Cr2O7 (720 мг/л,. что соответствует по окраске 1мг% каротина), солянокислый буфер (рН= 5,2), реактив Тильманса, фильтры, пробирки, пипетки

Опыт 1. Количественное определение каротина в сыворотке крови

Приготовление исследуемого раствора.

В пробирку внести 1мл сыворотки крови, добавить 3мл 96% этилового спирта для осаждения белков. Содержимое пробирки перемешать. Затем прилить 6мл петролейного эфира для экстракции каротина. Энергично встряхивать 2 минуты. После этого добавить 2мл Н2Одист.для лучшего расслоения жидкостей.

Верхний эфирный слой перенести в кювету ФЭКа и колориметрировать с синим светофильтром (λ =440нм) в кювете толщиною слоя 1см против дист. воды.

Приготовление рабочего калибровочного раствора.

В пробирку внести 2,4мл основного калибровочного раствора K2Cr2O7и добавить 2,6мл Н2Одист..Содержимое пробирки перемешать и колориметрировать в том же режиме.

Расчет произвести по формуле:

где, Х — содержание каротина в сыворотке, мг%; Еоп -экстинция образца сыворотки крови; Ека-экстинция калибровочного раствора, 1 — коэффициент перевода в мг%.

Полученные результаты сравнить с нормативными показателями и сделать соответствующий вывод.

Опыт 2. Спектрофотометрическое определение витамина С в напитках

Для исследования берут неокрашенные или слабоокрашенные напитки. После дегазации и, если необходимо, фильтрования исследуемых напитков готовят три раствора, согласно таблицы:

Реагент Опытная проба Калибровочная проба Контрольнаяя проба
Солянокислый буфер (рН 5,2), мл 4,5 4,5 5,0
Напиток, мл 0,5
Раствор витамина С, мл 0,5
Реактив Тильманса, мл 1,0 1,0 1,0

Содержимое каждой пробирки перемешать и колориметрировать опытную и калибровочную против контрольной в кювете толщиною слоя 1см при длине волны 540нм.

Расчет произвести по формуле:

где, Х — содержание витамина С, мг/л; Еоп -экстинция опытной пробы; Ека-экстинция калибровочного раствора, Vпр – объем исследуемого напитка, 1000 — коэффициент перевода в мг/л, 0,05 – количество витамина С в 0,5 мл стандартного (калибровочного) раствора, мг.

Примечание: Опыт № 2 не делали.

Лабораторная работа № 10

Качественные пробы на присутствие ферментов

Реактивы и оборудование:3% раствор пероксида водорода, кристаллический гидрохинон, насыщенный раствор тирозина, 5% раствор мочевины, 1% раствор сахарозы, фенолфталеин, красная лакмусовая бумага, сырой картофель, морковь, капуста, мясо, соевая мука, дрожжи, реактив Фелинга, центрифуга, ступки, песок, марля, воронки, пипетки, водяная баня, лучинки, плитка,

Опыт 1.Обнаружение каталазы в мышечной кашице.

Перекись водорода может образовываться в организмах как конечный продукт дыхания, но поскольку в больших концентрациях перекись водорода является ядом для живых клеток, существуют ферменты, способные ее обезвреживать. К таким ферментам относится каталаза. Она расщепляет пероксид до воды и кислорода. Каталаза вызывает бурное выделение пузырьков кислорода при промывании ран пероксидом водорода. Содержится каталаза и в растительных объектах, например, в картофеле, моркови.

В пробирку помещают 0,5 – 1 г мышечной кашицы, добавляют 2 мл дистиллированной воды и 1 мл 3% раствора пероксида водорода. Встряхивают пробирку и наблюдают выделение пузырьков газа. Используя тлеющую лучинку, можно доказать, что выделяющийся газ – кислород.

Опыт 2. Обнаружение пероксидазы в растительных тканях

Некоторые ферменты выделяющийся в ходе разложения пероксида водорода кислород используют для окисления органических соединений. К таким ферментам относят пероксидазу. С помощью пероксидазы, содержащейся в больших количествах в растительных клетках, происходит окисление дифенолов в хиноны, в результате чего темнеет лежащий на воздухе очищенный картофель и другие растительные продукты.

В две пробирки наливают по 3 мл 3% раствора пероксида водорода. В одну из них помещают 2-3 кусочка свеженарезанного картофеля. В обе пробирки добавляют одинаковое количество кристаллического гидрохинона. Содержимое пробирок встряхивают. Через некоторое время наблюдают образование розово-красной окраски в пробирке с картофелем вследствие окисления гидрохинона в хинон перекисью водорода под действиемпероксидазы. Много пероксидазы содержится в хрене, поэтому вместо картофеля можно использовать это растение.

Последнее изменение этой страницы: 2018-05-29; просмотров: 226.

Источник

Оцените статью