Как приготовить шоколадный агар

Агаровая шоколадная основа, применение и подготовка

шоколадный агар это твердая, обогащенная, неизбирательная и недифференцированная культуральная среда. Он используется в основном для выделения микроорганизмов, требующих с точки зрения питания, хотя он может выращивать бактерии любого типа..

Вот почему его полезность увеличивается, особенно при посеве образцов, которые обычно стерильны, таких как CSF и суставная жидкость. Хотя он также входит в число средств, выбранных для посева полимикробных образцов, но в этих случаях необходимо добавлять антибиотики, которые подавляют сопутствующую флору.

Эта среда имеет характерный коричневый цвет, очень похожий на шоколад, отсюда и его название. Препарат очень похож на кровяной агар, только в этом случае кровь должна быть нагрета, чтобы эритроциты разрушались.

Его препарат, как кровяной агар, очень деликатный, так как он легко загрязняется. По этой причине многие лаборатории предпочитают приобретать эту среду, уже приготовленную коммерческими предприятиями, что гарантирует их качество..

• 1 фундамент
• 2 использования
  • 2.1 Шоколадный агар с колумбийским агаром
  • 2.2 Шоколадный агар, приготовленный с базовым агаром ГХ (для гонококков)
  • 2.3 Шоколадный агар, приготовленный с агаром Мюллера Хинтона
  • 2.4 Шоколадный агар, приготовленный с агаром Thayer Martin
• 3 Подготовка
  • 3.1 Расчеты
  • 3.2 Взвешивать и растворять
  • 3.3 Стерилизовать
  • 3.4 Агрегация крови
  • 3.5 Еще один способ приготовления шоколадного агара без использования крови
• 4 Контроль качества
• 5 ссылок

фундамент

Эта среда состоит из основы агара, богатой питательными веществами и подогретой кровью. Гемолиз эритроцитов обеспечивает фактор X (гемин) и фактор V (NAD), которые необходимы для роста некоторых микроорганизмов, таких как род. Haemophilus. Это также очень полезно для изоляции Neisserias sp.

Как и кровяной агар, в зависимости от необходимости в качестве базового агара можно использовать разные среды. К числу используемых сред относятся инфузия мозга и соевый агар с триптиказой, хотя наиболее рекомендуемыми являются агар Columbia, агар Müeller Hinton, агар GC и агар Thayer Martin..

Некоторые варианты шоколадного агара включают коммерчески доступную обогащенную добавку под названием Isovitalex или Polivitex..

Эти добавки содержат витамин В₁₂, L-глютамин, аденин, гидрохлорид гуанина, п-аминобензойная кислота, никотинамидадениндинуклеотид (NAD), тиаминпирофосфат, нитрат трехвалентного железа, гидрохлорид тиамина, гидрохлорид цистеина, L-цистин и глюкоза.

Важно отметить, что шоколадный агар более обогащен, чем кровяной агар, но не позволяет наблюдать закономерности гемолиза..

приложений

Шоколадный агар с колумбийским агаром

Эта среда содержит казеин и расщепленный поджелудочной железой сердца, расщепленный мясной пептид, хлорид натрия, агар, дрожжевой экстракт и кукурузный крахмал. Он также богат витаминами, минералами и незаменимыми аминокислотами.

Эта база с подогретой кровью идеально подходит для выделения бактерий рода Neisseria. С другой стороны, если в среду добавлена ​​добавка для бруцелл, вышеупомянутый микроорганизм может быть выделен. Результаты улучшаются с помощью конской крови.

Шоколадный агар с базовым агаром GC (для гонококков)

Эта среда содержит пептоны, кукурузный крахмал, одноосновные и двухосновные буферы, хлорид натрия и агар..

Большинство коммерчески готовых презентаций шоколадного агара идут с этой основой и не содержат нагретой крови, а содержат синтетическую смесь гемина и химической добавки факторов роста, витаминов, минералов, аминокислот, фактора V и глюкозы..

Шоколадный агар с агаром Мюллера Хинтон

Он используется для проведения теста на чувствительность к противомикробным препаратам требовательных микроорганизмов, таких как Streptococcus pneumoniae используя 5% нагретой бараньей крови.

Он также служит для первичной изоляции Neisserias и Haemophilus, но в частном случае изоляции Haemophilus использование конской крови является предпочтительным, так как она является богатым источником факторов X и V.

С другой стороны, если образец для посева поступает из нестерильной зоны, рекомендуется добавление антибиотиков для подавления нормальной флоры этой зоны..

Пример для респираторных образцов, где подозревается присутствие бактерий рода Haemophilus Бацитрацин используется для подавления роста Стафилококк, микрококк, стрептококк и сапрофитная нейссерия.

В случае образцов генитального шанкра, где это подозревается Haemophilus ducreyi, Успешно использовался шоколадный агар, приготовленный следующим образом: агар Мюллера-Хинтона с 5% шоколадной крови лошадей, 1% обогащенной изовиталексом и 3 мкг / мл ванкомицина.

Шоколадный агар, приготовленный с агаром Thayer Martin

Эта среда специально для изоляции Neisseria gonorrhoeae. Он должен содержать антибиотики для подавления сопровождающей флоры. Кровь ягненка используется.

подготовка

Показания для приготовления базового агара для использования должны быть видны. Они находятся на обратной стороне пакета с обезвоженной средой. Они обычно описывают, сколько нужно взвесить, чтобы приготовить один литр культуральной среды..

В лаборатории вы можете приготовить необходимое количество, оно может быть больше или меньше одного литра..

вычисления

Правило трех сделано, чтобы рассчитать, сколько нужно взвесить, чтобы подготовить желаемый объем. пример:

Если на 1 литр необходимо взвесить 40 гр, а лаборатории требуется 800 мл, то сказано:

Формула будет выглядеть следующим образом:

Х = 32 гр (весит 800 мл).

Взвесьте и растворите

Продолжаем взвешивать необходимое количество и помещаем его в фиолу с водой.

Нагреть до умеренной температуры и осторожно перемешать вращательными движениями до полного растворения обезвоженной среды, оставляя кипеть на 1 минуту..

стерилизовать

Фиолу вводят в автоклав для стерилизации среды при 121 ° С в течение 20 минут..

Агрегат крови

При выходе из автоклава его оставляют отдыхать до тех пор, пока температура среды не станет приблизительно между 56 и 70 ° C, чтобы поместить кровь и перемешивать, пока среда не станет коричневой..

Если вы собираетесь добавлять добавки, самое время это сделать. Затем смешайте и подайте 20 мл в каждую стерильную чашку Петри..

Вся процедура должна выполняться в вытяжном шкафу с ламинарным потоком или вокруг горелки Бунзена..

Дайте постоять, пока они не затвердеют и не перевернутся в холодильнике..

Еще один способ приготовления шоколадного агара без использования крови

Основную среду готовят, как описано выше, коммерчески полученный дегидратированный гемоглобин растворяют и стерилизуют в автоклаве..

Оба раствора оставляют охлаждаться до 50 ° C, присоединяют и добавляют добавку. Смешать в асептических условиях и затем подавать в стерильных чашках Петри..

Контроль качества

Важно, чтобы кровь помещалась при указанной температуре, потому что это идеальный способ лизировать эритроциты и в то же время поддерживать фактор V, который является термочувствительным.

На поверхности агара не должно быть пузырьков. Каждую партию из 100 чашек следует инкубировать по одной или двум чашкам в печи при 37 ° С в течение 24 часов для проверки ее стерильности..

Для достижения наилучших результатов шоколадный агар следует использовать вскоре после приготовления.

Контрольные штаммы бактерий должны быть взяты в лаборатории для оценки эффективности свежеприготовленной среды для роста основных требовательных микроорганизмов, имеющих клиническое значение..

Источник

Основа шоколадного агара

Этот агар рекомендуют для выделения Neisseria gonorrhoeae при острых и хронических гонококковых инфекциях.

Состав**:

** Состав выверен и доведен до соответствия необходимым параметрам

Приготовление:

Размешать 45,0 г порошка в 500 мл дистиллированной воды. Прокипятить для полного растворения частиц. Стерилизовать автоклавированием при 1,1 атм (121°С) в течение 12-15 мин. Остудить до 50°С и асептически добавить такое же количество стерильного 2%-го раствора гемоглобина (добавка FD022 ). Добавить также содержимое 1 флакончика с дрожжевым аутолизатом ( FD027 ) или витаминной ростовой добавки ( FD025 ), растворенных как указано в соответствующем наставлении. Тщательно перемешать и разлить в соответствующую посуду. Если требуется среда обычной концентрации, 45,0 размешивают в 1000 мл дистиллированной воды.

Принцип и оценка результата:

Данная основа после внесения добавок обеспечивает прекрасный рост гонококков, без перерастания их контаминирующими микроорганизмами. Вместо шоколадного агара можно использовать агар для выделения гонококков G.C. Agar (M434), который дает несколько лучшие результаты (1). Диагностические исследования на гонококки были существенно усовершенствованы с введением новых микробиологических методов, предложенных разными авторами (2-7), которые убедительно показали преимущество культурального метода диагностики перед микроскопией.

Шоколадный агар не только позволяет выращивать чистые культуры гонококков, но и выделять их при культивировании материала от больных хронической гонореей, содержащего смешанную микрофлору. Показано (8), что введение в состав среды гемоглобина (FD022) полезно для определения гонококков.

Контроль качества:

Внешний вид порошка:

Гомогенный сыпучий желтый порошок.

Плотность готовой среды:

Образуется среда, соответствующая по плотности 1,5%-му агаровому гелю.

Цвет и прозрачность готовой среды:

Готовая среда прозрачна, имеет светло-янтарную окраску, слегка опалесцирует, если в чашках Петри образуется гель. После добавления гемоглобина среда имеет коричневую окраску, в чашках Петри образуется непрозрачный гель.

Кислотность среды:

При 25°С водный раствор (4,5% вес/об) имеет рН 7,3 ± 0,2.

Культуральные свойства:

Ростовые характеристики референс-штаммов через 40-48 ч при 35-37°С .

Ссылки:

1. Am. J. Syphilis Gonorrh. Veneral Disease, 33: 164 : 1949
2. Muench. Wochschr., 80:846:1933
3. J.Path. Bact.,39:221:1934
4. J. Infectious Diseases, 61:129:1937
5. Am. J. Syphilis, 20:347:1936
6. Am. J. Syphilis, 22:55:1938
7. Seventh Annual Year book(1936-37) P.133, supple., Am. J. Pub. Health, 27: no. 3 : 1937
8. Bull. Genitoinfectious diseases, Mass. State Health Dept., 2:1:1938.

Условия и сроки хранения:

Порошок хранить при температуре ниже +30°С. Использовать до даты, указанной на этикетке. Готовую среду хранить при температуре +2…8°С.

Источник

Шоколадный агар

Шоколадный агар питательная среда, обогащенная лизируются высокая температура крови или гемоглобина, который используется для выделения и культивирования патогенных микроорганизмов с высокими питательными потребностями. питательная среда получила название за характерный цвет и не содержит в своем составе шоколад или какао. шоколадный агар условно можно назвать типа кровяной агар, однако, эти среды различаются по назначению и способу приготовления пищи.

1. Состав и приготовление. (Composition and preparation)
В качестве основы шоколадного агара использует широкий спектр плотных питательных сред, используемых в микробиологии. В расплавленный стерильной основе добавляют 5-10 % кровь животных и нагревают на водяной бане при температуре около 80 °с 5 минут для того, чтобы лизировать эритроциты и инактивации ферментов, разрушающих фактора роста V. В некоторых случаях, например при использовании крови свиней и коз, температура нагревания может быть 100 °С, и прогрев увеличивает время до 15 минут.
Часто для приготовления шоколадного агара вместо использования крови стерилизуют в автоклаве суспензию готовят из сухого гемоглобина. Из-за того, что гемоглобин-это не полная замена крови в питательную среду добавляют синтетические добавки за роста, необходимых для роста бактерий рода Haemophilus (Гемофильная), а также витаминов и минералов, стимулирует рост гонококков и менингококков.

2. Приложение. (App)
Шоколадный агар используется для культивирования требовательных к питательной среде бактерии, такие как гонококки Neisseria gonorrhoeae (Гонококков) и менингококков Neisseria meningitidis (Менингококк). кроме того, некоторые патогенные бактерии, в частности, Haemophilus influenzae (Гемофильная инфекция) требуются дополнительные факторы роста V и X, которые находятся внутри красных кровяных клеток. красные кровяные клетки для успешного выращивания необходимые бактерии лизируются разрушен медленное нагревание клеток крови. температура в 80 °с инактивирует также ферменты, которые могут усваивать NAD (НОП) никотинамид-аденин-динуклеотид.
В отличие от кровяной агар для культивирования микроорганизмов на шоколадный агар, гемолиз не происходит. однако, некоторые α — и β-гемолизирующих организмы производят перекись водорода в форму на шоколадный агар зоны озеленения, похожие на α-гемолиз.
Добавление бацитрацин шоколадный агар делает его элективной питательной среде, селективной для вида Haemophilus (Гемофильная). вариант шоколадного агара Thayer-Martin (Тайера-Мартина) содержит ряд антибиотиков и элективные питательные среды для культивирования различных видов грамотрицательных диплококков рода Neisseria (Нейссерию).

Источник

Шоколадный агар — Chocolate agar

Сравнение двух типов питательных сред, используемых для выращивания бактерий Neisseria gonorrhoeae .

Известная как избыточный рост, неселективная среда с шоколадным агаром слева, благодаря своему составу, позволяла рост колоний организма, отличных от колоний N. gonorrhoeae , в то время как селективная среда Тайера-Мартина справа, содержащая противомикробные препараты, подавляющие рост организмов, отличных от N. gonorrhoeae , не показывает чрезмерного роста, но является положительным для бактерий N. gonorrhoeae . (Увеличьте изображение, чтобы увидеть колонии N. gonorrhoeae )

Шоколадный агар ( CHOC ) или шоколадный кровяной агар ( CBA ) — это неселективная обогащенная питательная среда, используемая для изоляции патогенных бактерий. Это вариант чашки с кровяным агаром , содержащий эритроциты , лизированные путем медленного нагревания до 80 ° C. Шоколадный агар используется для выращивания привередливых респираторных бактерий, таких как Haemophilus influenzae и Neisseria meningitidis . Кроме того, некоторые из этих бактерий, в первую очередь H. influenzae , нуждаются в факторах роста, таких как никотинамидадениндинуклеотид (фактор V или НАД) и гемин (фактор X), которые находятся внутри эритроцитов; таким образом, предпосылкой для роста этих бактерий является присутствие лизатов красных кровяных телец. Тепло также инактивирует ферменты, которые в противном случае могли бы разрушить НАД. Агар назван в честь его цвета и не содержит шоколадных продуктов.

Варианты

Шоколадный агар с добавлением бацитрацина становится селективным для рода Haemophilus . Другой вариант шоколадного агара, называемый агаром Тайера-Мартина, содержит набор антибиотиков, отобранных для видов Neisseria .

Рекомендации

Эта статья по микробиологии незавершена . Вы можете помочь Википедии, расширив ее .

Источник