Как приготовить тончайший срез растения

Занимательная микроскопия

Как приготовить тончайший срез растения

Первое с чем сталкивается любитель микроскопии это изготовление тонких срезов растений. Если изготовить препарат эпидермиса растения легко, просто сняв пленочку с листа растения, то сделать тончайший поперечный срез стебля или листа не так просто. Срез растения должен быть очень тонким и прозрачным, чтобы его можно было наблюдать в проходящем свете микроскопа.

Для изготовления тонких срезов растений нам понадобится лезвие и обычная морковка. В качестве объекта исследования возьмем, например, стебель какого- нибудь растения, и приготовим поперечный срез. Для этого в морковке вырежем в середине полость равную диаметру стебля и поместим стебель в это отверстие так, чтобы стебель чуть-чуть выступал над уровнем морковки. Теперь осторожно приложим лезвие к морковке и осторожно срежем тончайший слой стебля. В начале пластинки могут получиться не достаточно тонкими, но довольно быстро вы приловчитесь, и у вас получится тончайший срез растения.

Чтобы приготовить поперечный срез листа нужно разрезать не до конца морковку вдоль, и поместить в разрез лист растения. Получатся как бы тиски из долек морковки, которые зажимают лист растения. Далее мы точно также как, и в примере со стеблем растения, отрезаем лезвием тончайшую пластинку.

Используя этот метод можно приготовить срезы разных растений, а также фруктов и семян. Твердые семена нужно предварительно размочить в воде.

Источник

Как подготовить срез растения

Многие любители микроскопических исследований окружающей живой природы сталкиваются в первую очередь с изготовлением тончайших срезов растений. Ведь осуществить тонкий поперечный срез листа или стебля не так легко, как может показаться на первый взгляд. Срез растения должен получиться прозрачным и очень тонким, чтобы его можно было разглядеть под проходящим светом микроскопа.

Для получения таких тончайших срезов растений вам потребуется лезвие бритвы и морковка. Приготовим, например, поперечный срез какого-нибудь стебля растения. Необходимо в середине моркови вырезать полость, которая будет равняться диаметру стебля, а затем поместить в эту полость стебель таким образом, чтобы стебель немного выступал над поверхностью взятой морковки. А теперь приступим к самой важной части процесса – срезаем тончайший слой этого стебля. С самого начала все может получиться не так, как хотелось бы, но со временем вы набьете руку, приноровитесь и сможете готовить самые тончайшие срезы растений для ваших увлекательных исследований.

Для того, чтобы сделать тонкий поперечный срез листа, нужно разрезать морковку вдоль, но не до конца, и лист растения поместить в полученный срез. У вас получатся своеобразные тиски из половинок моркови, которые будут зажимать между собой лист растения. Далее необходимо, как и в предыдущем примере со стеблем, отрезать лезвием бритвы тонкую пластинку.

С помощью описанного метода возможно получить срезы различных растений, в том числе фруктов и семян. Однако твердые семена стоит предварительно замочить в воде. Если у вас совсем нет желания или достаточного времени на приготовление своих микропрепаратов, то специально для вас представлены уже готовые микропрепараты для микроскопии. Желаем удачных исследований и экспериментов!

В нашем магазине Вы можете приобрести наборы предметных и покровных стекол, а так же готовые препараты:

Источник

Как приготовить тончайший срез растения

фЕНБ: фЕИОЙЛБ ЙЪЗПФПЧМЕОЙС ЧТЕНЕООЩИ НЙЛТПРТЕРБТБФПЧ

нБФЕТЙБМЩ. мЙУФШС ФТБДЕУЛБОГЙЙ ЧЙТЗЙОУЛПК (Tradescantia virginica), РПДУПМОЕЮОЙЛБ (Helianthus annuus); ФЩЮЙОЛЙ ЙЪ ГЧЕФЛПЧ НБМШЧЩ (Malva sp.), ЪБЖЙЛУЙТПЧБООЩЕ Ч 90-96%-ОПН УРЙТФЕ; ЛПНРМЕЛФ РПУФПСООЩИ НЙЛТПРТЕРБТБФПЧ «бОБФПНЙС ТБУФЕОЙК»; МБЛФПЖЕОПМ, УЕТОПЛЙУМЩК БОЙМЙО.

дМС ЙЪХЮЕОЙС ТБУФЙФЕМШОЩИ ПВЯЕЛФПЧ У РПНПЭША УЧЕФПЧПЗП НЙЛТПУЛПРБ ОЕПВИПДЙНП РТЙЗПФПЧЙФШ НЙЛТПРТЕРБТБФ. нЙЛТПРТЕРБТБФЩ, ОЕ РТЕДОБЪОБЮЕООЩЕ ДМС ДМЙФЕМШОПЗП ИТБОЕОЙС, ОБЪЩЧБАФУС ЧТЕНЕООЩНЙ. йЪХЮБЕНЩК ПВЯЕЛФ РПНЕЭБАФ ОБ РТЕДНЕФОПЕ УФЕЛМП Ч ЛБРМА ЧПДЩ, ЗМЙГЕТЙОБ, ТБУФЧПТБ, ТЕБЛФЙЧБ ЙМЙ ЛТБУЙФЕМС Й ОБЛТЩЧБАФ РПЛТПЧОЩН УФЕЛМПН. фБЛЙЕ РТЕРБТБФЩ НПЦОП ИТБОЙФШ Ч ФЕЮЕОЙЕ ОЕУЛПМШЛЙИ ДОЕК, РПНЕУФЙЧ ЧП ЧМБЦОХА БФНПУЖЕТХ.

еУМЙ ПВЯЕЛФЩ РПНЕЭБАФ Ч ВБМШЪБН, ЗМЙГЕТЙО У ЦЕМБФЙОПК ЙМЙ ГЕММПЙДЙО, РТЕРБТБФЩ УПИТБОСАФУС ЗПДБНЙ Й ОБЪЩЧБАФУС РПУФПСООЩНЙ.

оЕЛПФПТЩЕ ТБУФЕОЙС ЙМЙ ЙИ ПТЗБОЩ (ЧПДПТПУМЙ, УРПТЩ, РЩМШГБ Й ДТ.) НПЦОП ТБУУНБФТЙЧБФШ РПД НЙЛТПУЛПРПН ГЕМЙЛПН, ВЕЪ РТЕДЧБТЙФЕМШОПЗП ЙЪЗПФПЧМЕОЙС УТЕЪПЧ. фБЛЙЕ РТЕРБТБФЩ ОБЪЩЧБАФУС ФПФБМШОЩНЙ.

пДОБЛП ЮЙУМП ПВЯЕЛФПЧ, ЛПФПТЩЕ НПЦОП ЙЪХЮБФШ ОБ ФПФБМШОЩИ НЙЛТПРТЕРБТБФБИ ОЕЧЕМЙЛП. юБЭЕ РТЙИПДЙФУС ДЕМБФШ УТЕЪЩ ПТЗБОПЧ, РПДМЕЦБЭЙИ ЙЪХЮЕОЙА. уТЕЪЩ ЙЪЗПФБЧМЙЧБАФ ЙЪ УЧЕЦЙИ ЙМЙ ЖЙЛУЙТПЧБООЩИ ЮБУФЕК ТБУФЕОЙК. пВЩЮОП ДМС ЖЙЛУБГЙЙ ХРПФТЕВМСАФ ТБУФЧПТЩ УРЙТФБ ЙМЙ ЖПТНБМЙОБ. уДЕМБООЩЕ УТЕЪЩ ДПМЦОЩ ВЩФШ ПЮЕОШ ФПОЛЙНЙ Й РТПЪТБЮОЩНЙ. тБЪМЙЮБАФ УМЕДХАЭЙЕ ЧЙДЩ УТЕЪПЧ: РПРЕТЕЮОЩК Й РТПДПМШОЩК ( ТБДЙБМШОЩК, ФБОЗЕОФБМШОЩК, РБТБДЕТНБМШОЩК) (ТЙУ. 5, в).

рПРЕТЕЮОЩК УТЕЪ РТПИПДЙФ РЕТРЕОДЙЛХМСТОП ПУЙ ПТЗБОБ Й РПЪЧПМСЕФ ЙЪХЮЙФШ УФТПЕОЙЕ ПТЗБОБ Ч РПРЕТЕЮОПН УЕЮЕОЙЙ.

рТПДПМШОЩК ТБДЙБМШОЩК УТЕЪ РТПИПДЙФ РП ТБДЙХУХ ПУЙ ПТЗБОБ Й ДБЕФ ЧПЪНПЦОПУФШ ЙЪХЮЙФШ УФТПЕОЙЕ ПТЗБОБ Ч РТПДПМШОПН УЕЮЕОЙЙ.

рТПДПМШОЩК ФБОЗЕОФБМШОЩК УТЕЪ РТПИПДЙФ РЕТРЕОДЙЛХМСТОП ТБДЙХУХ ГЙМЙОДТЙЮЕУЛПК УФТХЛФХТЩ, ОБРТЙНЕТ, ЛПТОС ЙМЙ УФЕВМС; Ч УМХЮБЕ ЧФПТЙЮОЩИ ЛУЙМЕНЩ Й ЖМПЬНЩ РТПИПДЙФ РПД РТСНЩН ХЗМПН Л УЕТДГЕЧЙООЩН МХЮБН.

рБТБДЕТНБМШОЩК УТЕЪ (ЗТЕЮ. РБТБ + ДЕТНБ — ЛПЦБ) — УЕЮЕОЙЕ, РБТБММЕМШОПЕ РПЧЕТИОПУФЙ РМПУЛПК УФТХЛФХТЩ, ОБРТЙНЕТ, МЙУФБ (УТЕЪ ЬРЙДЕТНЩ МЙУФБ).

рТБЧЙМБ ЙЪЗПФПЧМЕОЙС БОБФПНЙЮЕУЛЙИ УТЕЪПЧ

рТЙ ЙЪЗПФПЧМЕОЙЙ ЧТЕНЕООЩИ НЙЛТПРТЕРБТБФПЧ ОЕПВИПДЙНП УПВМАДБФШ УМЕДХАЭХА РПУМЕДПЧБФЕМШОПУФШ ПРЕТБГЙК:

• чЩНЩФШ Й ФЭБФЕМШОП ЧЩФЕТЕФШ РТЕДНЕФОПЕ Й РПЛТПЧОПЕ УФЕЛМБ. юФПВЩ ОЕ УМПНБФШ ПЮЕОШ ИТХРЛПЕ РПЛТПЧОПЕ УФЕЛМП, ОБДП РПНЕУФЙФШ ЕЗП Ч УЛМБДЛХ УБМЖЕФЛЙ НЕЦДХ ВПМШЫЙН Й ХЛБЪБФЕМШОЩН РБМШГБНЙ РТБЧПК ТХЛЙ Й ПУФПТПЦОП ЧЩФЕТЕФШ ЕЗП ЛТХЗПЧЩНЙ ДЧЙЦЕОЙСНЙ РБМШГЕЧ;

• оБОЕУФЙ ОБ РТЕДНЕФОПЕ УФЕЛМП РЙРЕФЛПК ЛБРМА ЦЙДЛПУФЙ (ЧПДЩ, ЗМЙГЕТЙОБ, ТБУФЧПТБ, ТЕБЛФЙЧБ ЙМЙ ЛТБУЙФЕМС);

• уДЕМБФШ УТЕЪ ЙЪХЮБЕНПЗП ПТЗБОБ РТЙ РПНПЭЙ МЕЪЧЙС. мЕЪЧЙЕ ДПМЦОП ВЩФШ ПЮЕОШ ПУФТЩН. дМС ЙЪЗПФПЧМЕОЙС УТЕЪПЧ, НЕМЛЙЕ ПВЯЕЛФЩ РПНЕУФЙФШ НЕЦДХ ЛХУПЮЛБНЙ ЙЪ УЕТДГЕЧЙОЩ ВХЪЙОЩ ЙМЙ РЕОПРМБУФБ (ТЙУ. 5, б). мЕЪЧЙЕН ЧЩТПЧОЙФШ ЧЕТИОАА РПЧЕТИОПУФШ РЕОПРМБУФБ ЧНЕУФЕ У ПВЯЕЛФПН. ъБФЕН УДЕМБФШ ФПОЛЙК УТЕЪ, ЧЕДС МЕЪЧЙЕН Л УЕВЕ ОБЙУЛПУШ ПДОЙН РМБЧОЩН Й ВЩУФТЩН ДЧЙЦЕОЙЕН. рТЙ ЬФПН ПВЯЕЛФ ДЕТЦБФШ УФТПЗП ЧЕТФЙЛБМШОП, Б МЕЪЧЙЕ — УФТПЗП ЗПТЙЪПОФБМШОП. пВЕ ТХЛЙ ДПМЦОЩ ВЩФШ УПЧЕТЫЕООП УЧПВПДОЩ. оЕ УМЕДХЕФ ЙНЙ ПРЙТБФШУС ОБ УФПМ ЙМЙ РТЙЦЙНБФШ Л ЗТХДЙ (ТЙУ. 6). уДЕМБФШ УТБЪХ ОЕУЛПМШЛП УТЕЪПЧ. мЕЪЧЙЕ Й ПВЯЕЛФ ЧУЕ ЧТЕНС УНБЮЙЧБФШ.

• чЩВТБФШ УБНЩК ФПОЛЙК УТЕЪ, РЕТЕОЕУФЙ ЕЗП У РПНПЭША РТЕРБТПЧБМШОПК ЙЗМЩ ЙМЙ ФПОЛПК ЛЙУФПЮЛЙ Ч ГЕОФТ РТЕДНЕФОПЗП УФЕЛМБ Ч ЛБРМА ЦЙДЛПУФЙ;

• ъБЛТЩФШ УТЕЪ РПЛТПЧОЩН УФЕЛМПН ФБЛ, ЮФПВЩ РПД ОЕЗП ОЕ РПРБМ ЧПЪДХИ. дМС ЬФПЗП РПЛТПЧОПЕ УФЕЛМП ЧЪСФШ ДЧХНС РБМШГБНЙ ЪБ ЗТБОЙ Й РПДЧЕУФЙ РПД ХЗМПН ОЙЦОАА ЗТБОШ Л ЛТБА ЛБРМЙ ЦЙДЛПУФЙ Й РМБЧОП ЕЗП ПРХУФЙФШ;

• еУМЙ ЦЙДЛПУФЙ НОПЗП, Й ПОБ ЧЩФЕЛБЕФ ЙЪ-РПД РПЛТПЧОПЗП УФЕЛМБ, ХДБМЙФШ ЕЕ РТЙ РПНПЭЙ ЖЙМШФТПЧБМШОПК ВХНБЗЙ. еУМЙ ЦЕ РПД РПЛТПЧОЩН УФЕЛМПН ПУФБМЙУШ НЕУФБ, ЪБРПМОЕООЩЕ ЧПЪДХИПН, ФП ДПВБЧЙФШ ЦЙДЛПУФШ, РПНЕУФЙЧ ЕЕ ЛБРМА ТСДПН У ЛТБЕН РПЛТПЧОПЗП УФЕЛМБ, Б У РТПФЙЧПРПМПЦОПК УФПТПОЩ ЖЙМШФТПЧБМШОХА ВХНБЗХ.

тЙУ. 5. ъБЛМБДЛБ ПВЯЕЛФБ Ч УЕТДГЕЧЙОХ ВХЪЙОЩ (б) Й УЕЮЕОЙС ГЙМЙОДТЙЮЕУЛПЗП ПТЗБОБ (в):

1 — РПРЕТЕЮОПЕ, 2 — РТПДПМШОПЕ ТБДЙБМШОПЕ, 3 — РТПДПМШОПЕ ФБОЗЕОФБМШОПЕ.

тЙУ. 6. рПМПЦЕОЙЕ ТХЛ РТЙ ЙЪЗПФПЧМЕОЙЙ УТЕЪБ.

ъБДБОЙЕ 1. рТЙЗПФПЧЙФШ 2 ФПФБМШОЩИ НЙЛТПРТЕРБТБФБ РЩМШГЩ НБМШЧЩ (Malva sp.): РЩМШГБ Ч ЧПЪДХИЕ (ВЕЪ РПЛТПЧОПЗП УФЕЛМБ) Й Ч МБЛФПЖЕОПМЕ. тБУУНПФТЕФШ ПВБ РТЕРБТБФБ РТЙ НБМПН ХЧЕМЙЮЕОЙЙ, ПФНЕФЙЧ ПУПВЕООПУФЙ УТЕД, Ч ЛПФПТЩЕ РПНЕЭЕОЩ РЩМШГЕЧЩЕ ЪЕТОБ. йУУМЕДПЧБФШ УФТПЕОЙЕ РЩМШГЩ РТЙ ВПМШЫПН ХЧЕМЙЮЕОЙЙ НЙЛТПУЛПРБ. уДЕМБФШ ТЙУХОПЛ.

рПУМЕДПЧБФЕМШОПУФШ ТБВПФЩ. оБ УЕТЕДЙОХ РТЕДНЕФОПЗП УФЕЛМБ РЙРЕФЛПК ОБОЕУФЙ ЛБРМА УРЙТФБ У РЩМШГПК. рПУМЕ ЧЩУЩИБОЙС УРЙТФБ, РТЕРБТБФ РПМПЦЙФШ ОБ РТЕДНЕФОЩК УФПМЙЛ НЙЛТПУЛПРБ Й ТБУУНПФТЕФШ РЩМШГЕЧЩЕ ЪЕТОБ Ч ПЛТХЦЕОЙЙ ЧПЪДХИБ. рПЛБЪБФЕМЙ РТЕМПНМЕОЙС УФЕЛМБ, ЧПЪДХИБ Й РЩМШГЩ УХЭЕУФЧЕООП ТБЪМЙЮБАФУС. рПЬФПНХ Ч ЧПЪДХЫОПК УТЕДЕ ЧЙДОЩ МЙЫШ ЗТХВЩЕ Й УЙМШОП ЪБФЕНОЕООЩЕ ЬМЕНЕОФЩ УФТХЛФХТЩ. юФПВЩ ЙЪВЕЦБФШ ОЕ ЦЕМБФЕМШОЩИ ПРФЙЮЕУЛЙИ СЧМЕОЙК, ОБДП ТБУУНПФТЕФШ РЩМШГХ Ч УТЕДЕ, РПЛБЪБФЕМШ РТЕМПНМЕОЙС ЛПФПТПК ВМЙЪПЛ Л РПЛБЪБФЕМА РТЕМПНМЕОЙС УФЕЛМБ. фБЛПК УТЕДПК УМХЦЙФ МБЛФПЖЕОПМ. уФЕЛМСООПК РБМПЮЛПК ОБ ПВЯЕЛФ ОБОЕУФЙ ЛБРМА МБЛФПЖЕОПМБ, ЪБФЕН ОБЛТЩФШ ЕЗП РПЛТПЧОЩН УФЕЛМПН.

зПФПЧЩК НЙЛТПРТЕРБТБФ РПНЕУФЙФШ ОБ РТЕДНЕФОЩК УФПМЙЛ Й ЙУУМЕДПЧБФШ. рТЙ НБМПН ХЧЕМЙЮЕОЙЙ ЧЙДОЩ ЛТХРОЩЕ ЫБТПЧЙДОЩЕ РЩМШГЕЧЩЕ ЪЕТОБ У ЫЙРПЧЙДОЩНЙ ЧЩТПУФБНЙ ОБ РПЧЕТИОПУФЙ (ТЙУ. 7). рТЙ ВПМШЫПН ХЧЕМЙЮЕОЙЙ Й РЕТЕНЕЭЕОЙЙ ФХВХУБ У РПНПЭША НЙЛТПНЕФТЕООПЗП ЧЙОФБ РЩМШГЕЧЩЕ ЪЕТОБ ТБУУНПФТЕФШ Ч ТБЪОЩИ РМПУЛПУФСИ: ФП У РПЧЕТИОПУФЙ, ФП Ч ПРФЙЮЕУЛПН ТБЪТЕЪЕ. оБ РПЧЕТИОПУФЙ РЩМШГЕЧПЗП ЪЕТОБ ИПТПЫП ЧЙДОЩ ЧЩТПУФЩ УФЕОЛЙ. вМЙЦЕ Л РЕТЙЖЕТЙЙ ПОЙ ЛБЦХФУС ХДМЙОЕООЩНЙ Й ЪБПУФТЕООЩНЙ, ВМЙЦЕ Л ГЕОФТХ — ВПМЕЕ ЫБТПЧЙДОЩНЙ, Б Ч РТПЕЛГЙЙ ПОЙ ЙНЕАФ ЧЙД ОЕВПМШЫЙИ ПЛТХЦОПУФЕК. лТПНЕ ЧЩТПУФПЧ, ОБ РПЧЕТИОПУФЙ ТБУРПМПЦЕОЩ ТПУФЛПЧЩЕ РПТЩ, ЮЕТЕЪ ЛПФПТЩЕ Ч РЕТЙПД РТПТБУФБОЙС РЩМШГЩ ЧЩИПДСФ РЩМШГЕЧЩЕ ФТХВЛЙ.

уМЕЗЛБ ПРХУФЙФШ ФХВХУ У РПНПЭША НЙЛТПНЕФТЕООПЗП ЧЙОФБ Й ТБУУНПФТЕФШ ЗХУФПЕ ФЕНОПЕ ЧОХФТЕООЕЕ УПДЕТЦЙНПЕ (ЛПФПТПЕ ПФУФБМП ПФ УФЕОЛЙ ЧУМЕДУФЧЙЕ ПВЕЪЧПЦЙЧБОЙС ЕЗП УРЙТФПН) Й ДЧЕ УФЕОЛЙ: ЧОХФТЕООАА ФПОЛХА — ЙОФЙОХ Й ОБТХЦОХА ФПМУФХА У ЫБТПЧЙДОЩНЙ ЧЩТПУФБНЙ — ЬЛЪЙОХ . рПУМЕ ДЕФБМШОПЗП ЙУУМЕДПЧБОЙС РТЙ ВПМШЫПН ХЧЕМЙЮЕОЙЙ ЪБТЙУПЧБФШ ПДОП РЩМШГЕЧПЕ ЪЕТОП Й ПВПЪОБЮЙФШ ЬЛЪЙОХ, ЫЙРПЧЙДОЩЕ ЧЩТПУФЩ, ТПУФЛПЧХА РПТХ, ЙОФЙОХ, ЧОХФТЕООЕЕ УПДЕТЦЙНПЕ.

тЙУ. 7. рЩМШГЕЧПЕ ЪЕТОП НБМШЧЩ (Malva sp.) (ЮБУФШ ЪЕТОБ Ч ПРФЙЮЕУЛПН ТБЪТЕЪЕ):

1 — ЬЛЪЙОБ, 2 — ЫЙРПЧЙДОЩК ЧЩТПУФ, 3 — ТПУФЛПЧБС РПТБ (ЧЙД УЧЕТИХ), 4 — ТПУФЛПЧБС РПТБ (ЧЙД УВПЛХ), 5 — ЙОФЙОБ, 6 — ЧОХФТЕООЕЕ УПДЕТЦЙНПЕ.

ъБДБОЙЕ 2. рТЙЗПФПЧЙФШ ЧТЕНЕООЩК РТЕРБТБФ РБТБДЕТНБМШОПЗП УТЕЪБ ЬРЙДЕТНЩ У ОЙЦОЕК УФПТПОЩ МЙУФБ ФТБДЕУЛБОГЙЙ ЧЙТЗЙОУЛПК (Tradescantia virginica) Ч ЛБРМЕ ЧПДЩ, Й ТБУУНПФТЕФШ ЕЗП РПД НЙЛТПУЛПРПН.

рПУМЕДПЧБФЕМШОПУФШ ТБВПФЩ. дМС ЙЪЗПФПЧМЕОЙС РТЕРБТБФБ МЙУФ ФТБДЕУЛБОГЙЙ ПВЧЕТОХФШ ЧПЛТХЗ ХЛБЪБФЕМШОПЗП РБМШГБ МЕЧПК ТХЛЙ ФБЛ, ЮФПВЩ ОЙЦОСС УФПТПОБ ЖЙПМЕФПЧПЗП ГЧЕФБ ВЩМБ ПВТБЭЕОБ ОБТХЦХ. рТБЧПК ТХЛПК РТЙ РПНПЭЙ РТЕРБТПЧБМШОПК ЙЗМЩ ОБДПТЧБФШ ЬРЙДЕТНХ ОБД УТЕДОЕК ЦЙМЛПК Ч УТЕДОЕК ЮБУФЙ МЙУФБ Й РЙОГЕФПН УОСФШ ЕЕ ЛХУПЮЕЛ. рТЙ ЬФПН ОЕЧПМШОП ЪБИЧБФЩЧБЕФУС Й ЮБУФШ НСЛПФЙ МЙУФБ (НЕЪПЖЙММБ), ОП ПВЩЮОП НПЦОП ОБКФЙ ФПОЛЙК ХЮБУФПЛ ОБ РЕТЙЖЕТЙЙ, УПУФПСЭЙК ЙЪ ПДОПЗП ТСДБ ЛМЕФПЛ ЬРЙДЕТНЩ. уПТЧБООЩК ЛХУПЮЕЛ РПМПЦЙФШ ОБ РТЕДНЕФОПЕ УФЕЛМП Ч ЛБРМА ЧПДЩ ОБТХЦОПК УФПТПОПК ЧЧЕТИ Й ОБЛТЩФШ РПЛТПЧОЩН УФЕЛМПН. рТЙ НБМПН ХЧЕМЙЮЕОЙЙ ТБУУНПФТЕФШ ЧЩФСОХФЩЕ ЛМЕФЛЙ Ч ЧЙДЕ ЫЕУФЙХЗПМШОЙЛПЧ, ВЕУГЧЕФОЩЕ ЙМЙ ПЛТБЫЕООЩЕ Ч ВМЕДОП-ЖЙПМЕФПЧЩК ГЧЕФ ВМБЗПДБТС РТЙУХФУФЧЙА Ч ЧБЛХПМСИ РЙЗНЕОФБ БОФПГЙБОБ.

ъБДБОЙЕ 3. оБХЮЙФШУС ЙЪЗПФПЧМСФШ ТБЪОЩЕ ЧЙДЩ УТЕЪПЧ (РПРЕТЕЮОЩК, РТПДПМШОЩК ТБДЙБМШОЩК, РТПДПМШОЩК ФБОЗЕОФБМШОЩК) ЙЪ УФЕВМС РПДУПМОЕЮОЙЛБ (Helianthus annuus) Й ДЕМБФШ ЙЪ ОЙИ НЙЛТПРТЕРБТБФЩ. тБУУНПФТЕФШ ЙИ РПД НЙЛТПУЛПРПН.

рПУМЕДПЧБФЕМШОПУФШ ТБВПФЩ. уЧЕЦЕУТЕЪБООЩЕ ЙМЙ ЖЙЛУЙТПЧБООЩЕ НЕЦДПХЪМЙС УФЕВМС (ДМЙОПК 2 — 3 УН , ФПМЭЙОПК 7- 8 НН ) ТБЪТЕЪБФШ ЧДПМШ ОБ 2 ЮБУФЙ. оЕЧППТХЦЕООЩН ЗМБЪПН ЙМЙ У РПНПЭША МХРЩ ОБ РПРЕТЕЮОПН УЕЮЕОЙЙ УФЕВМС НПЦОП ЧЩДЕМЙФШ ДЧЕ ЪПОЩ: ОБТХЦОХА — ОЕПДОПТПДОХА, УПУФПСЭХА РТЕЙНХЭЕУФЧЕООП ЙЪ РМПФОП УПНЛОХФЩИ ЛМЕФПЛ, Й ЧОХФТЕООАА — ТЩИМХА, РПУФТПЕООХА ПДОПТПДОП.

рПРЕТЕЮОЩЕ УТЕЪЩ. у ЧЩТПЧОЕООПК РПЧЕТИОПУФЙ ПДОПК ЙЪ РПМПЧЙОПЛ УДЕМБФШ МЕЪЧЙЕН ОЕУЛПМШЛП РПРЕТЕЮОЩИ УТЕЪПЧ. ьФЙ УТЕЪЩ ДПМЦОЩ ЪБИЧБФЙФШ ЛБЛ РЕТЙЖЕТЙЮЕУЛХА ЮБУФШ, ФБЛ Й ЮБУФШ ТЩИМПК УЕТДГЕЧЙОЩ. у РПНПЭША РТЕРБТПЧБМШОПК ЙЗМЩ ЙМЙ ЛЙУФПЮЛЙ УТЕЪ РПНЕУФЙФШ Ч ГЕОФТ РТЕДНЕФОПЗП УФЕЛМБ, ПЛТБУЙФШ ЕЗП ТБУФЧПТПН УЕТОПЛЙУМПЗП БОЙМЙОБ, ОБЛТЩФШ РПЛТПЧОЩН УФЕЛМПН Й ТБУУНПФТЕФШ РПД НЙЛТПУЛПРПН.

рТПДПМШОЩЕ УТЕЪЩ. дМС ЙЪЗПФПЧМЕОЙС РТПДПМШОПЗП ТБДЙБМШОПЗП УТЕЪБ ТБЪТЕЪБФШ ЧДПМШ ЛХУПЮЕЛ УФЕВМС РПДУПМОЕЮОЙЛБ ФБЛ, ЮФПВЩ ТБЪТЕЪ РТПЫЕМ ЮЕТЕЪ УЕТЕДЙОХ ПДОПЗП ЙЪ ЛТХРОЩИ РХЮЛПЧ, Й У РПМХЮЕООПЗП ТБДЙБМШОПЗП ТБЪТЕЪБ УДЕМБФШ МЕЪЧЙЕН ОЕУЛПМШЛП ФПОЛЙИ УТЕЪПЧ. уТЕЪ РПНЕУФЙФШ ОБ РТЕДНЕФОПЕ УФЕЛМП, ПЛТБУЙФШ УЕТОПЛЙУМЩН БОЙМЙОПН, ОБЛТЩФШ РПЛТПЧОЩН УФЕЛМПН Й ТБУУНПФТЕФШ РПД НЙЛТПУЛПРПН.

дМС ЙЪЗПФПЧМЕОЙС РТПДПМШОПЗП ФБОЗЕОФБМШОПЗП УТЕЪБ ТБЪТЕЪБФШ ЛХУПЮЕЛ УФЕВМС РПДУПМОЕЮОЙЛБ РЕТРЕОДЙЛХМСТОП ТБДЙХУХ УФЕВМС, ФБЛ ЮФПВЩ ПО РТПИПДЙМ РПД РТСНЩН ХЗМПН Л УЕТДГЕЧЙООЩН МХЮБН. рТПЙЪЧЕУФЙ ЕЗП ПЛТБЫЙЧБОЙЕ УЕТОПЛЙУМЩН БОЙМЙОПН.

пДТЕЧЕУОЕЧЫЙЕ ПВПМПЮЛЙ ЛМЕФПЛ ПЛТБУСФУС Ч МЙНПООП-ЦЕМФЩК ГЧЕФ.

ъБДБОЙЕ 4. тБУУНПФТЕФШ ОЕУЛПМШЛП РПУФПСООЩИ НЙЛТПРТЕРБТБФПЧ ЙЪ ЛПНРМЕЛФБ «бОБФПНЙС ТБУФЕОЙК». уТБЧОЙФШ ЧТЕНЕООЩЕ Й РПУФПСООЩЕ НЙЛТПРТЕРБТБФЩ УФЕВМС РПДУПМОЕЮОЙЛБ.

лПОФТПМШОЩЕ ЧПРТПУЩ

1.юЕН ПФМЙЮБЕФУС ЧТЕНЕООЩК НЙЛТПРТЕРБТБФ ПФ РПУФПСООПЗП?

2. лБЛ РТБЧЙМШОП ЙЪЗПФПЧЙФШ ЧТЕНЕООЩК НЙЛТПРТЕРБТБФ?

Источник

Изготовление срезов растений и подготовка предметных и покровных стёкол

Анатомические исследования подразумевают, прежде всего, подготовку объектов изучения таким образом, чтобы его можно рассматривать в микроскоп. Наиболее широко распространенным типом микроскопа, особенно на уровне студенческих исследований, является световой, а значит, объект должен пропустить через себя пучок света.

Из растительных объектов готовят тонкие срезы, толщиной 8 — 25 мкм. Изначально готовили срезы опасной бритвой от руки. Объект зажимают между кусочками сердцевины бузины (сейчас используют пенопласт, сердцевину топинамбура). Это очень трудоемкий способ, требующий отработанных навыков. Безусловно, таким способом, работая безопасной бритвой, нельзя подготовить массовый материал, серийные срезы, срезы значительной площади.

Совершенно изменилась технология работы с изобретением микротома. Эволюция этого аппарата прошла очень быстро по пути совершенствования. Наиболее трудной задачей является механизм закрепления объекта, из которого необходимо изготовить срезы. Если древесина как твердый материал может быть укреплена зажимами, то мелкие объекты (семена), мягкие (лист, кора) не могут быть закреплены таким образом. Есть методы специальной обработки материала (заливка в целлоидин, парафин), но они трудоемки и требуют значительного времени. Чтобы выполнить ВКР с использованием этих методов, надо работать с материалом не менее 3-х лет. Огромным прогрессом стало изобретение замораживающих столиков. Объект к ним прикрепляется с использованием низких температур.

Эти столики могут работать с использованием углекислоты, что более приемлемо для мягких животных тканей, особенно в медицине. В ботанике наиболее удобным являются столики, работающие по типу «холодильника». Постоянный ток проходит через термопару, тепло удаляется проточной водой.

Из зафиксированного материала готовят микрообъекты в виде кубиков или призм. Площадь поперечного среза зависит от характера материала. Если он однородный, то может быть больше, а если его структура гетерогенна (на границе коры и древесины), то не более 0,5 × 0,5 см; для продольных срезов (радиальный, тангентальный) один из размеров (по направлению оси органа) желательно делать длиннее (до 0,7 — 0,8 см). Приготовленный таким образом материал выдерживают в воде не менее 0,5 часа (лучше дольше), меняя через 10 — 15 минут воду. Таким образом, спирт удаляют из объекта и он хорошо примораживается. Древесину перед изготовлением микрообразцов следует варить в смеси воды и глицерина (1:1) в огнеупорной колбе на электрической плитке в течение 5 — 6 часов. Вода испаряется и ее следует периодически доливать, но ни в коем случае не в кипящую массу, а только после некоторого охлаждения с соблюдением осторожности. В противном случае происходит выброс горячей массы, который может привести к повреждению лица и рук. После такой подготовки древесина становится очень эластичной, и длина поперечного среза может достигать 2 см.

Подготовленные микрообъекты ориентируют на замораживающем столике соответствующим образом, включают вначале воду и спустя 3 — 4 минуты выпрямитель переменного тока в постоянный и наносят на объект по каплям пипеткой воду до тех пор, пока весь объект не будет покрыт небольшим куполом льда. Со стороны, противоположной движению ножа, намораживается большая площадь льда, т.к. надо обеспечить упор давлению ножа.

При резке растительных объектов необходимо помнить, что в любом органе присутствуют как мягкие не одревесневшие ткани, так и механические, сильно лигнифицированные. Поэтому очень важно «найти» правильный угол наклона ножа, угол между лезвием ножа и направле­нием его движения.

Толщину среза или устанавливают фиксированную, в этом случае доведение ножа назад до упора обеспечивает поднятие столика на толщину среза, или устанавливают вручную, поднимая после каждого среза замораживающий столик.

Разнообразие растений обуславливает и разнообразие подходов в процессе резки. Очень хорошо режутся лимонник, липа, бузина, очень трудно объекты с твердой древесиной, поэтому каждый новый объект требует некоторого испытания разных приёмов.

Одним плавным, без рывков, движением ножа на себя производят срез, кисточку (желательно беличью) каждый раз смачивают в воде, движением по ножу на себя снимают срез и помещают его в бюксу с водой (ни в коем случае не спиртом, т.к. кисточка, смоченная спиртом, будет переносить его на объект, и приведет к разрушению блока).

Изготовление срезов на микротоме позволяет получить их значительное количество, а значит, позволяет вести отбор для изготовления препаратов. Необходимо готовить срезы разной толщины. Сделать очень тонкий срез, пригодный для фотографирования, но большой площади, невозможно. Срезы большой площади дают возможность судить о соотношении тканей, их топографии.

Если полученные срезы сразу не будут использованы для изготовления препаратов, то в воду следует добавить спирт, и препараты можно сделать на второй день.

Из полученных срезов готовят временные и постоянные препараты, но этому предшествует подготовка предметных и покровных стекол. Основные требования к ним: стекла должны быть обезжирены, что достигается тщательной промывкой. Стекла моют в горячей воде с мылом, протирая с обеих сторон щеточкой. Затем помещают в емкости с наструганным мылом и кипятят в течение часа, осторожно переворачивая их. Не рекомендуется использование специальных порошков, т.к. они оставляют на поверхности налет.

После кипячения стекла тщательно промывают в холодной воде под краном и погружают в насыщенный водный раствор двухромовокислого калия с крепкой серной кислотой в пропорции 3:1 или 4:1 (хромпик). В этой смеси стекла хранят не менее суток, используя по мере необходимости. Перед изготовлением препаратов стекла хорошо промывают от хромпика.

Можно промытые в мыльной воде стекла поместить на несколько часов в 10-15% раствор калийной щелочи, затем промыть водой и перенести в слабый 1-5% раствор соляной кислоты и через 1-2 минуты снова промыть водой.

Предметные стекла, на которые помещают препараты, должны быть хорошо обезжирены и промыты. На правильно подготовленных стёклах нанесенные капли воды хорошо растекаются. Если же на стекле остались следы жира, то вода собирается каплями, не растекаясь. На такие стекла срезы накладывать не следует, так как они не закрепляются на нем.

4.7.1 Изготовление временных препаратов

Для первоначального знакомства с полученными срезами, а иногда и для наблюдения, готовить постоянные препараты нецелесообразно. В этом случае ограничиваются временными препаратами, которые хранят непродолжительное время. Средой, в которую помещают срез, является вода, если материал свежий, т.е. живой. Если материал зафиксирован, то для этой цели используют глицерин (чистый или разбавленный водой) или другие просветляющие жидкости.

Срезы помещают в чистый или слегка разбавленный глицерин, в котором они могут находиться до нескольких месяцев. Для более длительного хранения покровное стекло обводят жидким парафином или канадским бальзамом, чем достигается прикрепление покровного стекла к предметному.

4.7.2 Окраска срезов и приготовление постоянных препаратов

Если срезов несколько, то их окрашивают на предметом стекле. Но при изготовлении срезов на микротоме их готовят несколько десятков, что делает возможным выбор, тогда срезы окрашивают в небольших бюксах. В этом случае срезы помешивают очень осторожно кисточкой, чтобы предотвратить слипание и обеспечить равномерное окрашивание.

Для окрашивания срезов из вегетативных органов растений используют чаще всего сафранин и водный или нильский синий. Вообще, красителей много, их применение обусловлено характером и природой объекта.

Итак, в бюксы, где в воде находятся срезы, добавляют сафранин. В сафранине срезы следует выдерживать не менее 30 минут. Затем, осторожно сливая и добавляя воду, промывают срезы для удаления сафранина. На приготовленное предметное стекло наносят пипеткой несколько капель воды и препаровальными иглами или кисточкой извлекают из стаканчиков (лучше их перелить в чашку Петри) окрашенные сафранином срезы и кладут на предметное стекло. Срезы подбирают по величи­не, как по всей площади объекта, так и более мелкие кусочки, которые, как правило, тоньше. На срезах большей площади устанавливают расположение и соотношение тканей, а тонкие срезы более пригодны для микрофотографирования.

Заранее готовят полоски фильтровальной бумаги по площади в 2 раза превышающие ширину предметного стекла и чуть больше по длине. Берут несколько полосок и, постепенно прижимая их к стеклу по направлению к себе, убирают воду, при этом после полного контакта со стеклом пальцами с нажимом разглаживают бумагу, это обеспечивает хорошее отхождение срезов от фильтровальной бумаги. Подняв бумагу, отбрасывают 2-3 слоя, впитавшие воду, и сразу на срезы пипеткой наносят водный или нильский синий, выдерживают в нем 1-2 минуты (поперечные срезы выдерживают дольше, чем продольные) и таким же приемом фильтровальной бумагой удаляют синюю краску. Далее на срезы поочередно наносят 50%, 75% и 96% спирт, выдерживая в каждом, несколько минут и убирая фильтровальной бумагой. Такое же обезвоживание производят несколько раз, пока не будет заметна резкая разница в окраске разных тканей. Этот прием называют дифференцировкой окраски.

Сафранин окрашивает одревесневшие элементы, а нильский синий нелигнифицированные, тонкостенные. Последним наносят 100% спирт, но если для обезвоживания используют 5-20% карбол-ксилол (смесь фенола с ксилолом), а это чаще всего, то его наносят после 96% спирта, минуя промывку в абсолютном спирте. Эта смесь обладает прекрасным просветляющим и обезвоживающим свойствами, продолжительность выдержки в ней зависит от интенсивности окраски. Убрав бумагой карбол-ксилол, срезы заливают ксилолом. В течение всей дифференцировки (проводки) после каждого погружения осторожно препаровальной иглой корректируют положение срезов на предметном стекле, чтобы они оказались в средней части. Не следует допускать подсыхания срезов, т.к. они свертываются в трубочку.

Трудно рекомендовать время выдержки срезов в каждом из реактивов, т.к. это зависит от толщины среза, характера объекта. Если в процессе дифференцировки срезы плохо обезвожены, они помутнеют при погружении их в ксилол. На прокрашенные и обезвоженные срезы наносят канадский бальзам и закрывают покровным стеклом, опуская его под некоторым углом к предметному стеклу, что способствует удалению воздуха. Количество наносимого бальзама устанавливают в процессе работы, и оно зависит от толщины среза, величины покровного стекла. Важно, чтобы все срезы были закрыты, покровное стекло полностью прилегало к предметному, и бальзам не вытекал в избытке.

После подсыхания в течение нескольких дней препарат маркируют или карандашом по стеклу, или наклеивают этикетку (при изготовлении учебных препаратов фабричным способом). Нельзя препараты держать на сильно освещенных местах, так как они выцветают.

Многие растения (лимонник, липа, пихта, актинидия и др.) содержат многочисленные слизевые идиобласты. Слизь затрудняет работу, т.к. срезы прилипают к фильтровальной бумаге и снять их без повреждения не удается. Избавиться от них можно кипячением в воде, но при этом мягкие ткани коры могут мацерироваться. Лучше заспиртованный материал (срезы) выдержать в 10%-ом водном растворе уксусно-кислого свинца, т.к. слизи теряют способность к набуханию.

4.7.3 Изготовление постоянных препаратов в глицерин-желатине

Этот способ изготовления постоянных препаратов используют в том случае, если хотят оставить неокрашенные препараты (эпидерма листа, мезофилл и т.д.). Окрашенные срезы в глицерин-желатине раскрашиваются. Это быстрый способ изготовления препаратов, причем некоторые структуры на них выявляются резче, чем неокрашенные.

Для приготовления глицерин-желатина берут 1 г желатина, 6 мл дистиллированной воды и 7 мл чистого глицерина. На 100 частей этой смеси добавляют 1 г карболовой кислоты (фенол). Сначала смачивают желатин в указанном количестве воды и оставляют набухать 2 часа, затем приливают глицерин и карболовую кислоту. Смесь при помешива­нии нагревают, пока желатин не растворится до равномерной консистенции. Затем сразу фильтруют через стеклянную вату с помощью воронки с двойными стенками, наполненной горячей водой. Можно пользоваться обычной воронкой, которую необходимо подогревать кругом, не давая ей остыть.

Для получения совершенно прозрачного желатина в теплый раствор глицерин-желатина рекомендуется добавить яичный белок, и нагреть до кипения, размешивая стеклянной палочкой. При этом белок свертывается, адсорбирует все примеси, обуславливающие муть. Глицерин-желатин нагретым надо профильтровать, но после этого мешать смесь ни в коем случае нельзя, т.к. образовавшиеся пузырьки воздуха будут попадать на препараты, а в отличие от канадского бальзама, из которого пузырьки воздуха очень хорошо исчезают, из глицерин-желатина они практически не удаляются. Хранить глицерин-желатин надо в колбе с широким дном, закрывая ее корковой пробкой, в которую через отверстие вставляют стеклянную палочку.

В комнатных условиях глицерин-желатин застывает, поэтому перед работой и в процессе изготовления препаратов его подогревают на водяной бане.

Объекты из мягких тканей в глицерин-желатине сжимаются, поэтому перед нанесением среза на предметное стекло, его сначала помещают в раствор глицерина с водой (1:9). Вода постепенно испаряется, и когда густота глицерина станет достаточной, срез помещают в глицерин-желатин под покровное стекло.

Срезы древесины такой процедуре не подвергают, а прямо из воды помещают под стекло. Избыток глицерина удаляют фильтровальной бумагой. Перед изготовлением предметное стекло слегка нагревают над спиртовкой, кладут срез, помещают на него несколько капель глицерин-желатина и накрывают покровным стеклом, опуская его постепенно на одно ребро наклонно. Тогда покровное стекло, опускаясь, вытесняет воздух. После опускания стекла его не прижимают и не надавливают (в отличие от помещения в канадский бальзам), не сдвигают. Для хранения препарата покровное стекло заключают в рамочку из канадского бальзама, расплавленного воска или парафина, перед этим удаляя выступивший из-под стекла глицерин-желатин.

4.7.4 Анализ препаратов

После изготовления препаратов, особенно при использовании канадского бальзама, им необходимо «подсохнуть». Ксилол, в котором растворяют канадский бальзам, испаряется, и покровное стекло прочно прикрепляется к предметному. Теперь необходимо произвести анализ объектов. Его характер зависит от целей исследования.

Если производится описание структуры нового объекта, о котором данных в литературе нет, то дают подробную его характеристику. Исследуя несколько срезов (они могут быть под одним стеклом), устанавливают общую картину структуры. Определяют гистологический состав объекта, топографию (расположение) тканей на разных срезах, их пара­метры, соотношение, наличие идиобластов и др.

Затем производят подробное описание, отмечая как общие, так и характерные особенности. Ткани описывают не в произвольном порядке, а в порядке их расположения в органе (в стебле – от центра к периферии, или наоборот; в листе от верхней стороны к нижней, или наоборот). Описание сопровождают количественными характеристиками, произво­дя замеры винтовым окуляр-микрометром, а если его нет, то мерной линейкой, вставляемой в окуляр. Предварительно определяют цену деления на всех увеличениях.

При описании тканей отмечают:

— наличие устьиц и тип устьичного аппарата, их количество на единицу площади;

— размеры эпидермальных клеток на поперечных и продольных срезах;

— характер утолщения оболочки (вся ли утолщена или отдельные стен­ки, утолщение равномерное или нет);

— форму клеток на поперечном срезе;

— наличие и тип трихом;

— наличие составных тканей (феллемы, феллодермы, феллогена, так как феллодерма часто может отсутствовать);

— количество клеток феллемы в радиальном ряду в границах годичного слоя;

наличие годичных слоев;

— структуру (гомо- или гетерогенная);

— наличие содержимого в клетках феллемы и других тканей;

— наличие хлоропластов, идиобластов, кристаллов;

— форму очертаний клеток на всех срезах;

— наличие утолщений оболочки и характер утолщения;

В феллодерме обычно отмечают ее ширину, сложение, форму клеток.

— отмечают ее наличие или отсутствие, тип;

— ширину ткани на поперечном срезе;

— наличие в клетках хлоропластов, кристаллов;

— возрастные изменения (склерификация);

— отличие от прилегающих клеток феллодермы и паренхимы первичной коры.

4. В паренхиме первичной коры – (обычно это наиболее развитая ткань молодых стеблей) необходимо отметить:

— форму клеток на поперечном и продольном срезах;

— характер (гомо- или гетерогенная);

— сложение (плотное, рыхлое с хорошо развитой сетью межклетников);

— наличие, форма, размер, локализация кристаллов оксалата кальция;

— наличие млечников, смолоносной системы;

5. В первичной флоэме:

— расположение (сплошным кольцом, участками);

6. Во вторичной флоэме:

— характер расположения аксиальной паренхимы;

— наличие механических элементов и их расположение;

— дифференциацию на проводящую, непроводящую, дилатационную зоны;

— тип и локализацию кристаллов оксалата кальция;

— форму поперечного сечения ситовидных элементов;

— тип ситовидных пластинок и форму ситовидных полей.

7. Во вторичной ксилеме:

— тип (рассеянно-сосудистая, кольцесосудистая или переходного типа);

— рисунок расположения просветов сосудов и их количество на единицу площади;

— форму поперечного сечения сосудов;

— наличие трахеид, волокнистых трахеид, либриформа;

— тип перфорации и межсосудистой поровости и сосудов;

— тип сердцевинных лучей, их структуру, наличие в них идиобластов, оксалата кальция;

— выраженность годичной слоистости.

Методика описания вторичной ксилемы очень подробно дана в книге А.А. Яценко-Хмелевского (1954), которую каждому исследователю необходимо проработать весьма тщательно.

Сравнительный анализ может быть выполнен в следующих двух аспектах:

1. Сравнение структур органов представителей разных таксонов (видов, родов, семейств), при этом больше внимания уделяется качественным признакам, не подверженных влиянию среды, и количественным характеристикам: тип и форма ситовидных пластинок, тип лучей, форма и место локализации оксалата кальция, тип древесины, гистологический состав тканей, выраженность годичной слоистости и т.д.

2. Сравнение представителей одного вида в зависимости от условий произрастания. Сейчас уже установлено, что ни естественные, ни антропогенные факторы практически не влияют на качественные признаки, а значит, большее внимание уделяется количественным. Производят отбор параметров, по которым сравнивают образцы и осуществляют измерения. Обязательно вычисляется достоверность различия между ними. Только в этом случае можно будет говорить о доказанности или недоказанности влияния фактора.

Если производятся наблюдения за формированием органа, т.е. образцы отбираются через равные промежутки времени в течение вегетационного сезона, то прослеживаются изменения как качественных, так и количественных признаков.

Как мы уже отмечали выше, в сравнительных исследованиях очень важна количественная характеристика объекта и его структур. Для производства измерений под микроскопом необходимо иметь объект-микрометр и окуляр-микрометр. Объект-микрометр – это металлическая пластинка, в которую вмонтировано небольшое стекло с нанесенной штриховой линейкой: 1 линейный мм поделен на 100 делений, т.е. каждое деление соответствует 10 мкм.

Винтовой окуляр-микрометр устанавливают вместо окуляра. В нем вмонтирована стеклянная шкала, имеющая 8 делений. Вдоль шкалы при помощи винта, на котором вмонтирован вращающийся барабан с нанесенными по его окружности делениями (100), перемещается подпружиненный движок. На перемещающемся стекле движка нанесены две линии, перекрещивающиеся под прямым углом и две параллельные линии над местом перекреста.

Прежде чем производить измерение, необходимо определить цену деления шкалы барабана. Она определяется для каждого объектива.

Для определения цены деления вместо постоянного препарата на предметный столик помещают объект-микрометр. Винтовой окуляр-микрометр надевают на тубус вместо окуляра. Установив на резкость линейку объект-микрометра, совмещают крайние штрихи линейки на объект-микрометре и в окуляр-микрометре, затем совмещают две параллельные линии с началом линейки (вращая барабан), при этом «0» вращающегося барабана должен совпасть с неподвижным штрихом. Отводя барабаном параллельные линии от нулевого штриха до совпадения с любым штрихом объект-микрометра (но не на полный оборот) подсчитывают число делений по шкале объект-микрометра до параллельных линий и умножают на 10 (одно деление объект-микрометра равно 10 мкм), и, поделив эту цифру на число делений барабана, на которое он переместился от «0», получают цену деления барабана. Цена деления одного большого деления шкалы окуляр-микрометра равна полному обороту – 100 делениям барабана.

Чтобы измерить величину обьекта под микроскопом, после наведения на резкость, совмещают нулевой штрих с началом обьекта, подсчитывают сколько больших делений линейки уместилось на объекте, а оставшуюся часть измеряют вращением барабана.

Допустим, по диаметру клетки поместилось 2 больших деления (100 делений барабана × 2 = 200), после штриха «2» барабан вращают от нуля до совмещения с концом объекта и отсчитывают число делений по барабану, на которое он переместился. Длина объекта в делениях барабана равна 200 плюс число делений барабана (допустим 25). Общая длина 225 делений барабана. Зная цену деления, умножаем на него длину объекта в делениях, получим длину в микронах.

4.7.5 Статистическая обработка результатов

При описании анатомического строения стебля растений необходимо использовать количественные показатели, но нужно иметь в виду, что они варьируют в очень широких пределах, т.к. процесс роста растений испытывает мощное «давление» экологических факторов. Следовательно, обычные размеры элементов даются в разбеге «от» и «до» (например, диаметр сосудов варьирует в пределах 100-150 мкм).

Обязателен математический аппарат в сравнительных исследованиях: анализ влияния экологических факторов, влияние возраста, видовой принадлежности. В том случае должна осуществляться статистическая обработка. В анатомии растений, как и в целом в биологии, вполне приемлем уровень статистической значимости 5% (W=5), соответственно, доверительный уровень равен 95%.

Для получения необходимого показателя производят 25 измерений и обрабатывают неранжированный вариационный ряд. Среднюю арифметическую вариационного ряда ( ) вычисляют по формуле:

, ( )

– сумма всех вариант ряда;

– объём выборки.

После этого определяют величину колебания значений вариант около их средней арифметической, которое характеризуется средним квадратическим отклонением ( ). Вместе со средней арифметической ( ) этот показатель используется для вычисления других показателей. Среднее квадратическое отклонение в квадрате ( ) называется дисперсией.

(1).

Этот показатель характеризует рассеянность вариант около .

Для оценки достоверности средней арифметической вычисляется её ошибка:

, (2),

– ошибка средней арифметической;

– среднее квадратическое отклонение.

Достоверность средней арифметической оценивают по критерию Стьюдента:

(3).

Средняя арифметическая считается достоверной, если вычисленное значение выше табличного. Если же оно меньше табличного, это означает, что или недостаточен объём выборки, для которой найдена средняя величина, или данные не однородны.

В результатах обработки среднюю арифметическую приводят вместе с ошибкой:

Среднее квадратическое отклонение характеризует степень отклонения вариант данной совокупности от средней арифметической в абсолютных числах. Однако, для сравнения совокупностей по их вариабельности необходимо вычислить коэффициент вариации ( ), который показывает, какой процент составляет от средней арифметической:

, % (4).

Если равно:

0-4% – варьирование признака небольшое:

5-44% – варьирование признака нормальное;

45-64% – варьирование признака значительное;

85-104% – варьирование признака очень большое;

более 105% – варьирование признака аномальное.

Важным показателем является точность опыта, который выражает величину ошибки средней арифметической в процентах от самой средней арифметической, т.е. служит показателем точности определения последней:

, или .

Точность опыта считается удовлетворительной, если величина показателя не превышает 5%. При значении более 5%, рекомендуется увеличить число наблюдений или повторностей.

Во многих случаях для получения более полного представления о строении элементов, необходимо проводить мацерацию материала путём разрушения межклеточного вещества, в котором преобладает пектин, что вызывает распад ткани на составляющие её клетки. Можно использовать несколько способов мацерации:

1. Кипячение в воде – используется для мацерации мелких и нежных тканей. Так при кипячении клубней картофеля материал распадается на отдельные клетки.

2. Кипячение материала в течение нескольких минут в едком кали различной концентрации (5-50%) в зависимости от плотности материала. После обработки щёлочью материал промывают водой.

3. Если межклеточное вещество не пропитано или слабо пропитано лигнином, что имеет место у травянистых растений, то применяют способ Мажена. Объект помещают на 24 часа в подкисленную воду или подкисленный спирт (3-5 частей 96% спирта и 1 часть соляной кислоты), после чего объект переносят в 10% раствор аммиака также на 24 часа. После такой выдержки кусочки материала при надавливании пинцетом, кисточкой, иглой легко расчленяются на отдельные клетки. Если расчленение на отдельные структуры происходит с трудом, то используют 30%-ный аммиак. При таком способе мацерации хорошо сохраняется содержимое клетки.

4. Крепкий 30%-ный водный раствор хромового ангидрида. Его используют для мацерации твердого материала (древесина, скорлупа орехов и т.д.). Лезвием опасной бритвы готовят не очень толстые срезы, которые помещают в раствор не более чем на 5 минут, после чего быстро промывают водой. После обработки по этому методу материал легко распадается на элементы.

Необходимо помнить, что объект, подвергаемый мацерации, дол­жен быть однородным. Нельзя мацерировать кусочек, содержащий древесину и флоэму одновременно, т.к. в одном и том же реактиве ткани требуют разной продолжительности воздействия (экспозиции). Пока твердая часть достигает необходимой консистенции, мягкая уже разрушается.

Мацерированный материал можно покрасить эозином, сафранином, гематоксилином. После промывки водой и дегидратации объект можно заключать в канадский бальзам и готовить постоянные препараты.

Источник