Определение резус фактора для исследования необходимо приготовить

Определение резус-фактора

Данное исследование необходимо проводить перед каждым переливанием с соблюдением всех правил безопасности работы с кровью.

Для работы необходимо приготовить:

стандартный универсальный реагент антирезус RhО;

пипетки для крови и физ. раствора;

Кровь для исследования может быть взята из пальца или из вены непосредственно перед исследованием, может быть консервированная кровь или эритроциты из пробирки со свежей кровью после образования сгустка. Пробирка должна быть маркирована для каждого исследуемого.

Техника проведения манипуляции:

На дно пробирки помещают 1 каплю исследуемой крови и 1 каплю стандартного реагента, встряхивают.

Кладут пробирку на горизонтальную поверхность (стол) и катают её ладонью по столу не менее 3 мин, чтобы содержимое пробирки растекалось по стенкам. Это делает реакцию более выраженной.

Добавляют 2-3 мл физ. раствора, закрывают пробирку пробкой и 2-3 раза спокойно переворачивают.

Оценка конечного результата проводится визуально, лучше смотреть на пробирку на фоне проходящего света.

Если произошла агглютинация, то видны крупные хлопья, что говорит о Rh (+). Если агглютинации не произошло, то в пробирке равномерно розовая жидкость без хлопьев, что говорит о Rh (-).

40.Методы переливания крови и кровезаменителей

Существует несколько методов переливания крови: 1) прямое или непосредственное переливание крови; 2) непрямое переливание; 3) обменно-замещающие переливания и 4) обратное переливание крови или реинфузия

При прямом переливании кровь поступает непосредственно от донора к больной. Под непрямым переливанием крови понимается такой метод, когда донор и реципиент полностью разобщены. У донора берется кровь в специальный сосуд с консервантом. Эта кровь может какое-то время храниться. Иногда при нарушенной внематочной беременности используется метод обратного переливания крови или реинфузии, т. е. больной вливается ее собственная кровь, излившаяся в брюшную полость.

41.Определение группы крови. Резус-фактор.

Для определения группы крови пользуются стандарт­ными сыворотками групп 0 (I), А (II), В (III), которые спе­циально готовят в лабораториях станций переливания крови. На белой тарелке на расстоянии 3—4 см слева на­право ставят цифры I, II, III, обозначающие стандартные сыворотки. Каплю стандартной сыворотки 0(I) группы наносят пипеткой в сектор тарелки, обозначенный циф­рой I; потом второй пипеткой наносят каплю сыворотки А (II) группы под цифрой II; так же берут сыворотку В (III) группы и третьей пипеткой-наносят под цифрой III.

Затем обследуемому укалывают палец и стеклянной палочкой переносят вытекающую кровь в каплю сыворот­ки, находящейся на тарелке, и смешивают до равномер­ного окрашивания. В каждую сыворотку крови переносят новой палочкой. Через 5 мин с момента окрашивания (по часам!) по изменению в смеси определяют группу крови. В той сыворотке, где произойдет агглютинация (склеивание эритроцитов), появляются хорошо видимые красные зернышки и глыбки; в сыворотке, где агглюти­нации не произойдет, капля крови останется гомогенной, равномерно окрашенной в розовый цвет.

В зависимости от группы крови обследуемого агглютинация произойдет в определенных пробах. Если обследуемый имеет 0 (I) группу крови, то склеивания эритроцитов ни с одной сы­вороткой не произойдет. Если обследуемый имеет А (II) группу крови, то агглютинации не будет только с сыво­роткой группы А (II), а если обследуемый имеет В (III) группу, то агглютинации не будет с сывороткой В (III). Агглютинация наблюдается со всеми сыворотками, если исследуемая кровь будет AB (IV) группы.

Oпределения ре­зус-принадлежности. На стеклянную чашку Петри наносят 5 капель антирезус-сыворотки той же груп­пы, что и у реципиента. В сыворотку добавляют каплю крови обследуемого и тщательно перемешивают. Чашку Петри помещают на водяную баню при температуре 42— 45°С. Результаты реакции оценивают через 10 мин. Если наступила агглютинация крови, то у обследуемого кровь резус-положительная (Rh+); если агглютинации нет, то исследуемая кровь резус-отрицательная (Rh—).

42.Пробы на индивидуальную совместимость Пробы на индивидуальную совместимость проводятся по двум системам: по системе АВ0, а также по резус-фактору донора и рецепиента.

По системе АВ0 Центрифуга, которая используется для определения групп крови При проведении пробы на индивидуальную совместимость по системе AB0 (также известной как холодовая проба) : Берут 3-5 мл свежей крови реципиента, центрифугируют ее забирают каплю получившейся сыворотки. Затем капля наносится на белую тарелку рядом с небольшой каплей крови донора, капли смешиваются Спустя 5-10 секунд оценивается, изменился раствор или нет. Если «слипания» красных клеток крови не произошло, то можно переходить к проведению пробы на установление индивидуальной совместимости по резус-фактору.

По резус-фактору Известно два общепринятых способа определить совместимость по резус-фактору. Первый подразумевает использование центрифуги. Для этого в пробирку для центрифугирования помещают 2 капли сыворотки пациента, 1 каплю крови из флакона, 1 каплю 33% декстрана и центрифугируют 5 минут. После этого к смеси добавляют 3-4 мл физраствора и оценивают результаты. При отсутствии агглютинации можно перейти к пробе на биологическую совместимость. Второй метод (так называемая тепловая проба) заключается в следующем. В колбочку помещается 1 капля крови донора, 2 капли теплого 10% раствора желатина и пара капель сыворотки реципиента. Смесь инкубируют в течение 10 минут на водяной бане, где поддерживается температура +46-+48 градусов, а затем также вносят 5 мл физиологического изотонического раствора. Оценка результатов проводится аналогично пробе с центрифугой.

Проба на биологическую совместимость Перед процедурой переливания крови необходимо провести биологическую пробу Проба на биологическую совместимость, по сути – это первый этап непосредственно гемотрансфузии и проводится исключительно врачом. Врач, проводящий пробу, выполняет следующие действия: подсоединяет капельную систему и вводит первые 15-20 мл донорской крови струйно; останавливает трансфузию; ждет 3-5 минут, наблюдая за пациентом. Насторожить должны появление тахикардии, затруднения дыхания, болей в пояснице, озноба или жара. если все протекает благополучно, пробу считают положительной и выполняют дальнейшую трансфузию

Таким образом, если все пробы на совместимость прошли благополучно, можно проводить переливание крови. Правильная скорость переливания составляет 50-70 капель в минуту.

43. Осложнения при переливании крови. Методы профилактики и лечения осложнений. Классификация

Осложнения механического характера, связанные с погрешностью в технике переливания крови: острое расширение сердца, воздушная эмболия, тромбозы и эмболии, нарушение кровообращения в конечностях после внутриартериальных трансфузий

Осложнения реактивного характера: гемолитический шок – при переливании несовместимой крови, посттрансфузионный – переливание крови нагретой, инфицироавнной, анафилактический шок, цитратный шок, посттрансфузионная пирогенная реакция, синдром массивных гемотрансфузий

Источник

Техника определения резус-фактора

Показания: необходимость переливания крови, подготовка к оперативному вмешательств.

Приготовить:флакон с антирезусной сывороткой, пипетки;пробирки;изотонический раствор хлорида натрия;исследуемую взятую из вены или пальца кровь, часы; лотки;перчатки; емкости для отработанного материала; контейнеры с дезинфицирующими растворами.

Подготовка к манипуляции:

1. Медицинская сестра полностью подготовлена к выполнению манипуляции: одета в костюм (халат), маску, перчатки, колпак, сменную обувь.
2. Подготовить все необходимое для выполнения манипуляции.

Выполнение манипуляции:

на дно пробирки поместить каплю антирезусной сыворотки;

сюда же поместить каплю исследуемой крови;

пробирку перевернуть и качательными движениями смешать кровь с сывороткой так, чтобы содержимое растекалось по стенкам. Это ускорит реакцию агглютинации;

при наличии агглютинации через 3 минуты для исключения ложной агглютинации добавить 3 мл изотонического раствора хлорида натрия и перемешать путем двукратного перевертывания пробирки. Не взбалтывать!

Оценка результата:

а) при наличии агглютинации – кровь резус-положительная;

б) при отсутствии агглютинации – кровь резус-отрицательная.

Окончание манипуляции:

1. Снять перчатки, поместить их в дезинфицирующий раствор.
2. Вымыть руки, осушить полотенцем.

Источник

Группа крови и резус-фактор

Комплексное исследование, позволяющее оценить принадлежность крови пациента к одной из групп по системе ABO и определить наличие/отсутствие Rh-антигена.

Группа крови по системе ABO, Rh-фактор.

Синонимы английские

Blood typing, ABO group, Rh type.

Какой биоматериал можно использовать для исследования?

Как правильно подготовиться к исследованию?

• Исключить из рациона жирную пищу в течение 24 часов до исследования.

Общая информация об исследовании

Каждый человек обладает уникальным сочетанием антигенов на поверхности своих клеток, в том числе и эритроцитов. На сегодняшний день известно более 250 антигенов эритроцитов, образующих около 30 антигенных систем. В клиническом плане наиболее важными из них являются система АВО и система резус.

Система АВO – основная система совместимости крови. Она представлена агглютиногенами A и B, являющимися гликопротеинами и расположенными на поверхности эритроцитов, и агглютининами альфа и бета, относящимися к классу иммуноглобулинов IgM и циркулирующих в плазме крови. В зависимости от комбинации этих агглютиногенов и агглютининов, выделяют 4 группы крови по системе АВО.

Первая (I) группа крови (самая распространенная в европейской популяции, 42 % населения) также называется O-группа, при ней на поверхности эритроцитов агглютиногены A или B отсутствуют, в плазме выявляются агглютинины альфа и бета.

Вторая (II) группа крови (37 %) также называется A-группа, на поверхности эритроцитов присутствует агглютиноген A, в плазме выявляется агглютинин бета.

Третья (III) группа крови (13 % населения) также называется B-группа крови, на поверхности эритроцитов присутствует агглютиноген B, в плазме выявляется агглютинин альфа.

Четвертая (IV) группа крови (самая редкая, всего 8 % населения) также называется AB-группа крови, на поверхности эритроцитов присутствуют агглютиногены обоих типов A и B, в плазме агглютинины альфа и бета отсутствуют.

Система резус также состоит из нескольких антигенов, главный из которых называется антиген D, или резус-фактор. Примерно у 85 % людей на поверхности эритроцитов можно выявить резус-фактор (резус-положительная кровь).

Принадлежность крови человека к определенной группе по системе АВО и системе резус является генетически обусловленной и не меняется в течение всей жизни.

Определение группы и резус-фактора крови имеет наибольшее значение при подготовке к переливанию крови. Такая необходимость может возникнуть при тяжелой кровопотере, тяжелых формах гемолитических анемий, заболеваниях костного мозга с нарушением нормальной продукции эритроцитов, а также при проведении объемных хирургических операций. Группу крови по системе ABO и системе резус учитывают не только при переливании эритроцитарной массы, но также и при переливании других компонентов крови (тромбоцитарная масса, лейкоцитарная взвесь и др.). Определение группы крови является обязательным тестом при беременности. В этом случае данные о группе крови пациентки и в некоторых случаях о группе крови отца ребенка учитываются для своевременной диагностики и лечения иммунологического конфликта (обусловленного несовместимостью крови плода и матери) и возникающего при этом гемолиза эритроцитов плода. Обязательному обследованию на группу крови и резус-фактор также подлежат военнослужащие, бойцы МЧС и других силовых структур.

Следует отметить, что в клинической практике используют несколько приемов для подтверждения совместимости крови донора и реципиента, в том числе раздельное лабораторное определение группы крови донора и реципиента, проба на индивидуальную совместимость эритроцитов донора и сыворотки реципиента, биологическая проба. Эти мероприятия выполняются потому, что вероятность ошибки при лабораторном определении группы крови небольшая, но все же существует.

Так как в основе лабораторного метода определения групп крови лежит реакция агглютинации, то наличие в сыворотке больного специфических белков (М-протеина, холодовых антител) или некоторых бактерий, препятствующих этой реакции, может приводить к получению ложноположительных или ложноотрицательных результатов. Также прием некоторых лекарственных препаратов может отражаться на результатах определения резус-фактора. Поэтому особое внимание следует уделить подготовке к тесту.

Для чего используется исследование?

• Для определения принадлежности группы крови человека к одной из групп по системе АВО и системе резус.

Когда назначается исследование?

• При переливании компонентов крови реципиенту;
• при сдаче крови донором;
• при подготовке к хирургическим операциям;
• при планировании беременности или во время беременности;
• при подозрении на фетальный эритробластоз;
• при подготовке к трансплантации костного мозга, почки, печени и других органов и тканей;
• при поступлении на военную службу, в ряды МЧС и другие силовые структуры.

Что означают результаты?

Результаты определения группы крови по системе АВО

Агглютиногены на поверхности эритроцитов

Агглютинины в сыворотке крови

Группа крови, обозначение римскими цифрами

Группа крови, обозначение латинскими буквами

Источник

Определение резус-фактора экспресс-методом

Приводим пошаговое описание методики определения резус-фактора экспресс-методом с помощью универсального реагента антирезус Rh₀(D), содержащего неполные поликлональные IgG анти-D антитела, в пробирке без подогрева. Публикуем подробное руководство по постановке реакции конглютинации с желатином с применением стандартного реагента Rh₀(D) или цоликлона Анти-D. Доказываем преимущества использования цоликлонов Анти-D-супер и Анти-D по сравнению с универсальным реагентом.

В состав стандартного универсального реагента антирезус Rh₀(D) входят поликлональные неполные IgG анти-D антитела. Для подтверждения достоверности определения резус-фактора крови донора экспресс-методом необходимо провести проверку контрольных образцов стандартных резус-положительных и резус-отрицательных эритроцитов. При проведении контрольного исследования используйте тест-эритроциты Rh+ группы 0 или совпадающей по системе AB0 группы и одногруппные по AB0 тест-эритроциты Rh-.

Методика постановки реакции в пробирке без подогрева

1. Внесите на дно пробирки одну каплю реагента антирезус Rh₀(D).

2. Добавьте к содержимому пробирки одну каплю анализируемых эритроцитов.

3. Встряхните пробирку для перемешивания жидкостей.

4. Наклоните пробирку практически до горизонтального положения и с небольшой скоростью поворачивайте вокруг вертикальной оси не менее трех минут. Рассредоточение эритроцитов по стенкам способствует более выраженным результатам реакции.

5. Добавьте 2 – 3 мл изотонического раствора NaCl и 2 – 3 раза переверните пробирку без взбалтывания. Хлорид натрия исключает проявление неспецифической агглютинации.

6. Оцените результат реакции визуально. Выраженные агглютинаты на фоне прозрачной жидкости говорят о наличии антигена D, равномерно окрашенная жидкость без агрегации эритроцитов – свидетельство резус-отрицательной крови.

Постановка реакции конглютинации с желатином

Реакция проходит с использованием стандартного реагента антирезус Rh₀(D) или цоликлона Анти-D.

1. Внесите в пробирку приблизительно 0,05 мл (одну каплю) анализируемой крови или 50 % взвеси эритроцитов в сыворотке.

2. Подогрейте 10 % раствор желатина до жидкого состояния.

3. Добавьте к исследуемому образцу крови 0,1 мл (две капли) желатина.

4. Внесите 0,1 мл (две капли) реагента антирезус Rh₀(D) или цоликлона Анти-D.

5. Перемешайте содержимое.

6. Подогрейте пробирку в водяной бане при 37 °C в течение 10 минут.

7. Долейте 5 – 8 мл раствора NaCl.

8. Перемешайте жидкости, осторожно перевернув пробирку 1 – 2 раза.

9. Проведите оценку результата реакции невооруженным глазом, допускается использование лупы.

Явно выраженные агрегаты различного размера на фоне прозрачного раствора свидетельствуют об обнаружении антигена D, равномерно окрашенная жидкость без наличия агглютинатов – признак отсутствия агглютиногена.

10. Подтвердите достоверность исследования контрольным определением.

При неадекватных результатах контрольного исследования повторите определение резус-фактора экспресс-методом с заменой типирующего реагента и/или желатина. В случае мелкозернистой агглютинации проведите дополнительное исследование эритроцитов в непрямой реакции Кумбса.

Сравнение различных методов определения резус-фактора

С целью выбора оптимального метода типирования крови специалисты в области трансфузиологии провели сравнительную оценку эффективности применения цоликлонов Анти-D-супер, Анти-D двух разных серий и универсального реагента антирезус Rh₀(D) для определения резус-фактора экспресс-методом в пробирке без подогрева (Шевченко, Ю.Л. Безопасное переливание крови/Ю.Л. Шевченко, Е.Б. Жибурт. — СПб.: Питер, 2000. — 308 с.). При сравнении методов анализа учитывали такие критерии, как скорость и специфичность реакции, выраженность агглютинации, выявление слабых форм антигена D u .

При проведении сравнения анализировали 3778 образцов крови доноров. При первичном определении выявили 418 (11,1 %) резус-отрицательных образцов, из которых на втором этапе исследования 42 (1,1 %) образца отнесли к резус-положительным ввиду обнаружения фенотипа D-C+.

При сравнении анализа на наличие антигена D с использованием Анти-D-супер и Rh₀(D) выявили значительные преимущества применения цоликлона Анти-D-супер: высокую скорость наступления реакции, выраженный характер агглютинации, возможность проведения исследования на плоскости. Результаты сравнения методов приведены в Таблице № 1.

Таблица № 1. Сравнения результатов типирования крови доноров с помощью цоликлона Анти-D-супер и универсального реагента антирезус Rh₀(D).

Параметр сравнения	Цоликлон Анти-D-супер	Универсальный реагент антирезус Rh0(D)
Скорость реакции	8 – 10 секунд	3 – 4 минуты
Выраженность агглютинации (от + до ++++)	++++	+++ и ++++
Специфичность	да	да

418 резус-отрицательных образцов крови доноров дополнительно анализировали на наличие антигена D с помощью универсального реагента Rh₀(D) в пробирке без подогрева и цоликлона Анти-D в желатиновом тесте. По итогам второго этапа исследования, в трех образцах эритроцитов (0,08 %) выявили слабый антиген D u . Цоликлон Анти-D продемонстрировал более высокую достоверность обнаружения слабых форм антигена D ввиду абсолютной специфичности и высокого титра (1:512) антител класса IgG по сравнению с универсальным реагентом антирезус Rh₀(D), использование которого основано на усилении действия неполных антител полиглюкином, что может вызывать неспецифическую агглютинацию и затруднить трактовку результатов реакции.

Источник