Приготовить все необходимое для определения групп крови

Техника определения группы крови системы АВ0 стандартными сыворотками

Показания: необходимость переливания крови, подготовка к оперативному вмешательств.

Приготовить: стандартную тарелочку с углублениями; набор стеклянных палочек; изотонический раствор хлорида натрия; набор гемагглютинирующих сывороток 1, 2, 3, 4 групп двух серий; пипетки; исследуемую взятую из вены или пальца кровь; часы; лотки; перчатки; емкости для отработанного материала; контейнеры с дезинфицирующими растворами.

Подготовка к манипуляции:

1. Медицинская сестра полностью подготовлена к выполнению манипуляции: одета в костюм (халат), маску, перчатки, колпак, сменную обувь.
2. Проверить качество стандартных гемагглютинирующих сывороток по: цветовой маркировке, внешнему виду (светлая, прозрачная); сохранность упаковки, наличию правильно оформленной этикетки.
3. Подготовить все необходимое для выполнения манипуляции.

Выполнение манипуляции:

— на белую тарелочку, согласно обозначению, последовательно нанести по одной капле сыворотки 1, 2, 3 групп двух серий. Каждую пипетку немедленно опускать в ту же ампулу (флакон) из которых они были взяты;

— с помощью стеклянной палочки нанести рядом с углублениями (6 углублений) по капле исследуемой крови. Капля крови должна быть в 10 раз меньше капли сыворотки;

— отметить время и чистой, сухой стеклянной палочкой перемешать кровь с сывороткой 1 гр., затем другой палочкой 2 гр. и т.д. во всех углублениях;

— по мере наступления агглютинации, но не ранее 3 минуты, в те капли, в которых наступила реакция агглютинации добавить по одной капле изотонического раствора хлорида натрия для исключения ложной агглютинации и продолжать наблюдение в течение 5 минут.

Оценка результатов:

а) при положительной реакции в смеси появляются видимые глазом мельчайшие зернышки, состоящие из склеившихся эритроцитов. Мелкие зерна сливаются в крупные зерна, а иногда в хлопья, сыворотка при этом – обесцвечивается;

б) при отрицательной реакции жидкость остается равномерно окрашенной в розовый цвет;

в) возможны 4 комбинации положительной и отрицательной реакции:

1. Если агглютинации нет ни в одной из ячеек, то кровь I (0) группы.

2. Если агглютинация в первой и третей ячейках, то кровь II (А) группы.

3. Если агглютинация в первой и второй группах, то кровь III (В) группы.

4. Если агглютинация в первой, второй, третей ячейках, то кровь IV (АВ) группы.

Для исключения ошибки проверяют кровь с сывороткой 4 группы, где агглютинации не должно быть.

Окончание манипуляции:

1. Снять перчатки, поместить их в дезинфицирующий раствор.
2. Вымыть руки, осушить полотенцем.

Примечание: определение группы крови производится в помещении с хорошим освещением при температуре 15 – 25 0 С.

Источник

Определение группы крови цоликлонами

Методика проведения анализа

Алгоритм определения группы крови AB0 и резус-фактора цоликлонами облегчает и стандартизирует процедуру типирования. Позволяет однозначно интерпретировать результат реакции антиген/антитело. Для каждого исследования по системе AB0 достаточно одной серии реагентов. Объект исследования – цельная кровь, эритроцитарная масса, отмытые эритроциты, клетки крови в сыворотке или физрастворе.

В качестве примера приводим схему проведения типирования крови человека по системе антигенов AB0.

1. Обеспечьте яркое освещение помещения и температуру воздуха 15 – 25 °C.
2. Промаркируйте лунки планшета: Анти-A, Анти-B, Анти-AB.
3. Добавьте в подписанные лунки по одной капле (приблизительно 0,1 мл) реагентов Анти-A, Анти-B, Анти-AB.
4. Поместите по одной маленькой капле концентрированной эритроцитосодержащей среды (0,01 – 0,03 мл) рядом с большой каплей каждого реагента.
5. В каждой из трех лунок отдельной стерильной стеклянной палочкой смешайте моноклональный реагент с кровью.
6. Плавно покачивайте планшет 2,5 – 3 минуты. Обычно агглютинация формируется в течение 5 – 10 секунд. Запас времени необходим для обнаружения слабых вариантов антигенов.
7. Проведите визуальную оценку результатов реакции в каждой лунке. Результат реакции свидетельствует об обнаружении соответствующего агглютиногена.

Результаты реакции

Таблица результатов типирования крови с помощью цоликлонов.

Групповая принадлежность	Моноклональный реагент
	Анти-A	Анти-B	Анти-AB
0(I)	—	—	—
A(II)	+	—	+
B(III)	—	+	+
AB(IV)	+	+	+

«+» — положительный результат реакции;
«-» — отсутствие агглютинации.

• Отрицательный результат реакции во всех трех лунках свидетельствует об отсутствии агглютиногенов. Группа: 0(I).
• Агглютинация с Анти-A и Анти-AB говорит о наличии агглютиногена A. Групповая принадлежность: A(II).
• Реакция в лунках с Анти-B и Анти-AB указывает на наличие антигена B. Групповая принадлежность: B(III).
• Реакция во всех трех лунках говорит о присутствии обоих антигенов. Группа: AB(IV).

Методика проведения исследования с помощью цоликлонов требует обязательного подтверждения результатов реакции выявлением агглютининов α и β стандартными эритроцитами.

Алгоритм определения резус-фактора представлен в соответствующей статье.

Источник

Перекрестный метод определения группы крови

Стандартные эритроциты являются 5 – 10 % взвесью свежих эритроцитов. Условия хранения – в изотоническом солевом растворе консерванта при + 4 °C. Допускается использование смеси эритроцитов от 2 – 3 лиц одной группы. При использовании перекрестного метода определения группы крови требуется хорошее освещение и температура воздуха в помещении 15 – 25 °C.

Порядок действий

1. Отобрать 3 – 5 мл исследуемой крови в пробирку без стабилизатора.
2. Отстоять сыворотку 1,5 – 2 часа.
3. Однократно отмыть стандартные эритроциты в 0,9 % растворе NaCl.
4. Промаркировать лунки планшета: 0(I), A(II), B(III).
5. Разместить по две капли (приблизительно 0,1 мл) сыворотки в лунки.
6. Добавить в лунки по 0,03 мл стандартных эритроцитов групп 0, A, B.
7. Чистыми палочками перемешать сыворотку и эритроциты.
8. Покачивать планшет на протяжении 5 минут.
9. Проверить наличие агглютинации в каждой лунке.

Результаты исследования

Групповая принадлежность	Стандартные эритроциты
	0(I)	A(II)	B(III)
0(I)	—	+	+
A(II)	—	—	+
B(III)	—	+	—
AB(IV)	—	—	—

«+» — наличие, «-» — отсутствие агглютинации.

1. Агглютинация со стандартными эритроцитами A(II) и B(III) свидетельствует о наличии в сыворотке агглютининов α и β. Исследуемая кровь – 0(I).
2. Реакция в лунке с эритроцитами B(III) говорит о наличии агглютинина β. Группа A(II).
3. Агглютинация с эритроцитами A(II) – свидетельство наличия агглютинина α. Результат исследования крови – B(III).
4. Отрицательный результат во всех трех лунках указывает на отсутствие обоих агглютининов. Кровь — AB(IV).

Определение групп крови AB0 перекрестным способом в обязательном порядке дополняет обнаружение антигенов A и B в реакции прямой агглютинации с использованием цоликлонов.

Источник

Определение группы крови и резус принадлежности

Крайне важное значение для клинической практики имеет определение антигенов эритроцитов – идентификация группы крови и резус-фактора. Группа крови человека определяется наличием на поверхности эритроцита антигенов и является индивидуальным признаком. Эритроцитарные поверхностные антигены эритроцитов определяет фенотип эритроцитов или группу крови человека.

В настоящее время известно более 200 антигенов эритроцитов, поэтому группа крови может отличаться в зависимости от количества используемых антисывороток для идентификации антигенов на поверхности эритроцитов. Эритроцитарные антигены, идентифицированные в популяции в 1% случаев, считаются редкими.

Основной системой идентификации групп крови является система АВО, в которой группа крови характеризуется наличием на поверхности эритроцитов антигенов А, В, АВ или их отсутствием (О), т.е. четыре группы крови. В некоторых руководствах встречается дополнительная маркировка групп крови: О (I); А(II); В (III) и АВ (IV).

Выявление в 1901 г. эритроцитарных антигенов положило начало изучению допустимости смешивания эритроцитов разных групп, т.е. совместимости гемотрансфузий. В крови (сыворотке) каждого индивидуума циркулируют антитела (называемые так же агглютинины), активные в отношении чужеродных антигенов. Взаимодействие антиген-антитело приводит к агглютинации (слипанию) и разрушению эритроцитов. В крови индивидуумов с группой крови А циркулируют антитела против антигенов В. Индивидуумы с группой крови В имеют антитела, против антигенов А. При группе крови О в сыворотке определяются антитела анти-А, анти-В, тогда как при группе крови АВ ни антитела А, ни антитела В в сыворотке не определяются.

Таким образом, индивидуумы с группой крови АВ являются универсальными реципиентами иногрупной крови.

Индивидуумы с группой крови О, эритроциты которых не имеют на поверхности ни А, ни В антигенов, являются универсальными донорами.

Антитела к эритроцитарным антигенам А или В являются генетически детерминированными, в соответствии с группой крови эритроцитов, тогда как антитела к другим поверхностным антигенам эритроцитов являются приобретенными. Пациенты, получающие трансфузии, со временем накапливают антитела, что может осложнять подбор требуемой группы крови. Для таких пациентов важно выполнять типирование группы крови с оценкой возможно большего спектра антител сыворотки.

Группа крови оценка совместимости

Для оценки совместимости групп крови и возможности трансфузий необходимо исследование реакции антител сыворотки донора и эритроцитов реципиента, а также эритроцитов донора и антител сыворотки реципиента.

При совместимости групп крови смешивание эритроцитов и сыворотки не приводит к изменению состава и окраски реакционной капли.

При несовместимости групп смешивание эритроцитов донора и сыворотки пациента вызывает реакцию агглютинации – образование в капле неоднородностей в виде слипшихся эритроцитов, точечно насыщающих поле реакции.

Резус-фактором (Rh) называют антиген D, который может располагаться на поверхности эритроцитов. Наличие или отсутствие этого антигена на поверхности эритроцитов индивидуума определяет такую характеристику группы крови, как резус положительная или резус отрицательная (Rh+ или Rh–). Примерно 85% популяции людей имеют резус-положительную группу крови (Rh+).

В отличие от антител к антигенам АВ, антитела к антигену D не присутствуют в крови. При контакте крови резус-положительной группы с резус-отрицательной, происходит сенсибилизация и синтез анти-резусных антител. Такая реакция развивается, например, при беременности Rh– матери Rh+ плодом. Выход фетальных клеток во время родов в кровоток матери активизирует синтез антирезусных антител. В случае пересечения антирезусными антителами плацентарного барьера и попадания в кровь плода, развивается гемолитическая желтуха новорожденного, обусловленная разрушением эритроцитов.

Определение резус фактора необходимо для каждого индивидуума в дополнение к определению группы крови. Отмечено, что выраженность структуры эритроцитарного антигена различна у здоровых людей и тем более у иммуноскомпроментированных больных, беременных женщин.

В настоящее время определение групп крови, резус фактора, продукции антиэритроцитарных антител выполняется в автоматическом режиме стандартизированными методами, позволяющими одномоментно проводить как типирование групп крови, определение продукции антител, так и совместимости возможных трансфузий. Визуальное отображение полученной карты для каждого пациента может быть востребовано в течение всей жизни пациента, она хранится в базе данных лаборатории.

Показания к исследованию: Любое стационарное лечение, беременность.

Условия взятия и хранения образца

Для исследования используется венозную кровь, взятую с ЭДТА или без консервантов. Взятие крови производится натощак, или не менее чем через 8 ч после последнего приема пищи. Образец крови может храниться при температуре от 4–8 °С не более 24 ч.

Группа крови системы АВО:

• 0 (I) – первая группа;
• A (II) – вторая группа;
• B (III) – третья группа;
• AB (IV) – четвертая группа крови.

При выявлении подтипов (слабых вариантов) групповых антигенов результат выдается с соответствующим комментарием, например, «выявлен ослабленный вариант А2, необходим индивидуальный подбор компонентов крови».

• Rh (+) положительная;
• Rh (–) отрицательная.

При выявлении слабых и вариантных подтипов антигена D выдается комментарий: «выявлен слабый резус-антиген, рекомендуется при необходимости выполнять трансфузию резус-отрицательных компонентов крови».

Источник